Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的：探讨SurvivinsiRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。方法：肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染＋吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法（MTT法）检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率。结果：SurvivinsiRNA＋吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组（P〈0．01）;且siRNA＋吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期（P〈0．01）。结论：siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性。     

microRNA-10b与胰腺癌吉西他滨耐药的相关性及机制研究

目的：探讨microRNA-10b(miR-10b)与胰腺癌细胞吉西他滨（gemcitabine,GEM）化疗耐药的相关性及可能机制。方法：RT-qPCR检测吉西他滨相对耐药的胰腺癌细胞株PANC-1及吉西他滨相对敏感的CFPAC-1中miR-10b的表达情况;用不同浓度的吉西他滨作用于上述细胞,RT-qPCR检测二者miR-10b的表达变化;CFPAC-1细胞转染miR-10b mimics上调miR-10b表达量,CCK-8法及流式细胞仪检测细胞对吉西他滨药物敏感性的变化,Western blot检测抗凋亡相关蛋白（如PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin）的表达,RT-qPCR检测PTEN基因的表达变化。结果：PANC-1细胞中miR-10b的表达显著高于CFPAC-1细胞,且上述两种细胞中miR-10b的表达量与吉西他滨呈浓度梯度依赖;高表达miR-10b后CFPAC-1细胞对吉西他滨的敏感性下降,PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin蛋白的表达升高,PTEN mRNA的表达水平降低。结论：miR-10b可能通过负性调控PTEN的表达水平,从而增加PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin蛋白的表达,减少凋亡来降低CFPAC-1对吉西他滨的敏感性,最终导致胰腺癌细胞对吉西他滨化疗耐受。     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

LncRNA-BLACAT1调节CyclinD1/CDKN2B轴对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织和癌细胞中长链非编码RNA（LncRNAs）BLACAT1的表达特征及其调控机制,阐明BLACAT1在NSCLC发生发展中的作用和临床意义。方法：高通量基因表达数据库（GEO数据库）分析BLACAT1在NSCLC组织的表达特征,Kmplot网站分析BLACAT1表达与NSCLC患者生存预后的联系。qRT-PCR法检测BLACAT1在25例NSCLC患者癌组织和癌旁组织及NSCLC细胞系中的表达情况。将si-NC（阴性对照）和si-BLACAT1（抑制物）转染入NSCLC A549细胞作为si-NC组和si-BLACAT1组,qRT-PCR法分别检测各组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞不同细胞周期细胞百分率,细胞集落生成实验检测各组细胞克隆形成能力,CCK8实验检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blotting法检测各组A549细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）mRNA和蛋白表达水平。结果：GEO数据库的NSCLC数据集GSE18842和GSE19804、qRT-PCR法检测以及Kmplot分析,与癌旁组织比较,NSCLC患者癌组织中BLACAT1表达水平明显升高（P< 0.01）;NSCLC患者癌组织中BLACAT1低表达患者的存活时间明显高于BLACAT1高表达患者（P=0.011）。与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平明显降低（P< 0.05）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞周期G₁期细胞百分率增加（P< 0.05）,S期细胞百分率降低（P< 0.05）,细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均降低（P< 0.05或P<0.01）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P< 0.05）,而CDKN2B mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P< 0.05或P<0.01）。结论：LncRNA-BLACAT1在NSCLC患者癌组织和癌细胞中表达升高,下调BLACAT1表达可通过调节CyclinD1/CDKN2B轴从而抑制NSCLC A549细胞增殖,BLACAT1可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。     

c-myc RNA干扰增强肺腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的：探讨c-mycRNA干扰后肺腺癌细胞A549对吉西他滨敏感性的改变。方法：构建c-myc特异RNA小干扰（siRNA）的表达载体,转染A549细胞,G418筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹检测c-myc基因表达水平。吉西他滨作用于干扰有效A549细胞,分为GE＋siRNA组、GE组、siRNA组和空白对照组。每组12例,四甲基偶氮唑蓝法检测吸光度,流式细胞仪测凋亡率。结果：成功构建c-myc-siRNA表达载体。c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%。吉西他滨作用于c-myc-siRNA细胞其吸光度在各时间点较单用吉西他滨组、单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降（P＜0.01）,凋亡率增加（P＜0.01）。结论：c-mycRNA干扰后A549细胞的增殖减慢,对吉西他滨的敏感性增加。     

吉西他滨联合维生素C、维生素K3应用于人膀胱癌T24系的实验研究

目的观察吉西他滨联合维生素C和维生素K3对体外培养的人膀胱癌T24细胞系的作用,探讨VC＋VK3对吉西他滨诱导细胞凋亡的影响。方法采用体外培养技术,MTT法观察细胞抑制作用,分别筛选出吉西他滨、VC＋VK3的最佳作用浓度。流式细胞术检测药物作用的细胞凋亡和细胞周期分布。结果药物作用72h后,吉西他滨联合VC＋VK3组凋亡率为（41.39±1.04）％,吉西他滨组为（9.23±1.08）％,VC＋VK3组为（17.42±1.09）％,空白对照组为（5.92±0.76）％,各组间差异具有显著性（P〈0.05）。与对照组相比,联合用药组细胞周期分布出现S期上升。结论吉西他滨联合VC＋VK3协同作用于人膀胱癌T24系细胞,VC＋Vk3增强吉西他滨诱导细胞凋亡的作用。     

整合素连接激酶在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：观察子宫内膜癌患者癌组织中整合素连接激酶（ILK）的表达水平,通过体外细胞实验探讨其对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：采用免疫组织化学SP法检测29例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织细胞中ILK阳性表达率。分别将ILK siRNA和siRNA control转染至子宫内膜癌HEC-1B细胞作为干扰组和空载组,以不作处理的细胞作为对照组;采用Western blotting法检测HEC-1B细胞中ILK、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell小室法检测侵袭细胞数。结果：29例子宫内膜癌患者癌组织中ILK阳性表达率为79.3%,癌旁组织中ILK阳性表达率为10.3%,子宫内膜癌组织中ILK阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）。与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞中ILK、p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Akt和GSK-3β蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验,与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ILK在子宫内膜癌组织中呈高水平表达,干扰ILK表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与其抑制Akt和GSK-3β蛋白磷酸化有关。     

国产与进口吉西他滨联合顺铂治疗非小细胞肺癌疗效与毒副作用观察

目的观察比较国产吉西他滨（商品名泽菲）与进口吉西他滨（商品名健择）加顺铂联合化疗（GP方案）非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效与毒副作用.方法将62例NSCLC患者随机分为国产吉西他滨组（A组）和进口吉西他滨组（B组）,每组各31例.每组化疗药物用法分别为：A组,国产吉西他滨1000 mg/m^2 d1,8静脉滴注,顺铂25mg/m^2 d1～3静脉滴注;B组,进口吉西他滨1 000 mg/m^2 d1,8静脉滴注,顺铂25mg/m^2 d1～3静脉滴注.2组均21天为1个周期,使用4～6个周期后评价总有效率、中位疾病无进展时间（TTP）、中位生存期、1年生存率及不良反应.结果无论是国产吉西他滨还是进口吉西他滨,两者联合顺铂治疗NSCLC均取得较好疗效,分别获得48.4%、45.2%的总有效率和41.9%、45.2%的1年生存率及较长的中位TTP、中位生存期,且两者毒副作用相近,差异均无统计学意义.结论GP方案是治疗NSCLC的较好方案,国产吉西他滨与进口吉西他滨的疗效相当,毒副作用相近,值得临床推广应用.     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

吉西他滨联合外照射诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：研究吉西他滨联合外照射诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡的作用。方法：采用MTT法检测吉西他滨（D）,外照射（R）,吉西他滨和外照射（R＋D）分别对MCF-7细胞的抑制作用,流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数,电子显微镜观察MCF-7细胞凋亡的形态学特征,结果：细胞生长抑制率随吉西他滨作用浓度的增加而逐渐增大;（R＋D）组与D组及R组凋亡指数比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：吉西他滨能诱导人乳腺癌细胞产生凋亡,并能明显增强放疗对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。     

Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的：探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法：倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^-1磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^-1Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^-1LY294002+0.1μmol·L^-1Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt (p-Akt)/...     

妊娠期糖尿病患者胎盘组织中Apelin和APJ的表达及其对滋养层细胞胰岛素抵抗和行为的影响

目的：观察妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘组织中Apelin和其受体血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（APJ）表达情况,探讨其对滋养层细胞胰岛素抵抗（IR）、增殖和侵袭能力的影响。方方法法：收集GDM患者（GDM组,30例）和糖耐量正常（NGT）孕产妇（NGT组,30例）胎盘组织。采用免疫组织化学法检测2组研究对象胎盘组织中Apelin和APJ阳性表达率,Western blotting法检测胎盘组织中Apelin和APJ蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测胎盘组织中Apelin、APJ和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK） mRNA表达水平,Pearson相关分析法分析Apelin和APJ mRNA表达水平与AMPK mRNA表达水平的相关性。体外培养滋养层细胞HTR-8/SVneo(HTR-8),分为对照组、Apelin组、高糖组（HG组）、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组;采用Western blotting法检测各组细胞中Apelin、APJ和胰岛素信号传递中胰岛素受体底物1 (IRS1)、胰岛素受体底物2 (IRS2)和葡萄糖转运蛋白4 ...     

北五味子多糖对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨北五味子多糖(SCP)对体外培养人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养人膀胱癌T24细胞,分为对照组和50、100及200 mg·L^-1SCP组。不同剂量SCP干预24～48 h后,采用MTT法检测各组T24细胞增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色法检测各组T24细胞凋亡情况,AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测各组T24细胞凋亡率,流式细胞术检测各组T24细胞不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组T24细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,50、 100和200 mg·L^-1SCP组T24细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01);T24细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);50、100和200 mg·L^-1SCP组T24细胞G0/...     

葛根素对索拉非尼心肌毒性的保护及作用机制

目的 探讨葛根素通过抑制心肌铁死亡对索拉非尼心肌毒性的保护及其分子作用机制。 方法 细胞实验:分离培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,给予不同的药物处理,分为二甲基亚砜(DMSO)组、索拉非尼组、索拉非尼+Ferrostatin-1(Fer-1)组、索拉非尼+去铁胺组、索拉非尼+葛根素组,检测各组细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放,观察光镜下细胞形态,并检测脂质活性氧(ROS)水平以及脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法检测上述分组以及索拉非尼处理心肌细胞0、12、24、36、48、60、72 h后内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(GRP78)水平。给予不同的药物处理,将心肌细胞分为索拉非尼组、索拉非尼+葛根素组、索拉非尼+毒胡萝卜素组以及索拉非尼+葛根素+毒胡萝卜素,检测各组细胞活力、LDH释放、MDA水平,采用Western blotting法检测GRP78水平。小鼠实验:将40只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、葛根素组、索拉非尼组、索拉非尼+葛根素组,采用ELISA法检测血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,测算心脏质量/胫骨长度(HW/TL)、心肌组织切片Masson染色后测量心肌细胞横截面积(CSA),检测心肌组织ROS、MDA水平,采用Western blotting法检测心肌组织GRP78水平。 结果 细胞实验中索拉非尼组较DMSO组细胞活力降低、LDH释放增加,细胞空泡化,脂质ROS及MDA水平升高,GRP78蛋白上调,差异均有统计学意义(P均<0.01);与索拉非尼组相比,索拉非尼+ Fer-1组、索拉非尼+去铁胺组以及索拉非尼+葛根素组细胞活力升高、LDH释放减少、空泡化减轻,脂质ROS及MDA水平降低,且GRP78蛋白下调,差异均有统计学意义(P均<0.05);内质网应激诱导剂毒胡萝卜素和葛根素对GRP78水平、细胞活力、LDH释放、MDA水平的交互作用差异有统计学意义(P均<0.05)。小鼠实验中索拉非尼组较对照组CK-MB水平升高,HW/TL下降,CSA升高,脂质ROS和MDA水平升高,GRP78蛋白上调,差异均有统计学意义(P均<0.01);葛根素与索拉非尼间的交互作用差异有统计学意义(P均<0.05);与索拉非尼组相比,索拉非尼+葛根素组小鼠CK-MB水平下降、HW/TL升高,CSA下降,脂质ROS和MDA水平降低,GRP78蛋白下调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。 结论 葛根素可以抑制索拉非尼引发的心肌铁死亡,对索拉非尼的心肌毒性具有良好的保护作用,毒胡萝卜素可拮抗葛根素的细胞保护和抑制脂质过氧化作用,葛根素通过清除脂质ROS抑制内质网应激可能是其背后主要的分子机制。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对脂多糖(LPS)诱导的成骨细胞前体细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用,阐明其相关机制。方法：将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和不同浓度(10、25、50及100 mg·L^-1)AS-Ⅳ组,采用CCK-8法检测各组细胞活性。将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+LY294002 [磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂]组,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中血红素加氧酶1 (HO-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中HO-1、 PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、核因E2相关因子2(Nrf2)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果：CCK-8法检测,与对照组比较,LPS组细胞活性明显降低(P...     

谷氨酰胺通过内质网应激途径对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用

目的：探讨谷氨酰胺（GLN）通过内质网应激（ERS）途径对高氧诱导新生大鼠肺损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：足月新生Wistar大鼠90只,随机分为对照组（吸入氧浓度为21%）、高氧组（吸入氧浓度>85%）和高氧+GLN组（吸入氧浓度>85%且腹腔内注射GLN,剂量为0.75g·kg^-1·d^-1）,每组30只。实验开始第3、7和14天测定大鼠体质量和肺组织含水量,采用HE染色法检测大鼠肺组织形态表现,氯化硝基四氮唑蓝（NBT）法测定肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸（TBA）法测定大鼠肺组织中丙二醛（MDA）水平,蛋白免疫印记（Western blotting）法测定大鼠肺组织中半胱氨酸蛋白酶12（Caspase-12）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、生长抑制DNA损害基因153（GADD153）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。结果：实验第3、7和14天,与同时间对照组比较,高氧组大鼠体质量明显降低（P<0.05）,肺组织含水量明显升高（P<0.05）,肺组织中SOD活性明显降低（P<0.05）,MDA水平明显升高（P<0.05）,肺组织中Caspase-12、GRP78、GADD153和Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）;与同时间高氧组比较,高氧+GLN组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,肺组织含水量明显降低（P<0.05）,肺组织中SOD活性明显升高（P<0.05）,MDA水平明显降低（P<0.05）,肺组织中Caspase-12、GRP78、GADD153和Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显升高（P<0.05）。对照组大鼠肺组织结构规则,未见肺泡水肿,肺泡大小及肺泡间隔基本一致,无炎性细胞浸润;高氧组大鼠肺组织中支气管及肺泡上皮细胞肿胀,肺泡管腔增大,间质细胞水肿,可见炎性细胞浸润及纤维渗出;高氧+GLN组大鼠肺组织中肺泡损伤程度、炎性渗出和纤维组织增生程度均减轻,介于高氧组与对照组之间。结论：GLN可减轻高氧诱导新生大鼠肺组织水肿及炎症反应,其机制之一是通过ERS途径,降低GADD153、GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平而发挥保护作用。     

GRP78 upregulation-induced increase in cisplatin sensitivity of SPCA1 lung cancer cells

Background  Glucose regulated protein 78 (GRP78), an endoplasmic reticulum (ER) chaperone, plays a critical role in chemotherapy resistance in a variety of cancers. In this study, we investigated the up-regulation of GRP78 induced by A23187 and its association with the chemotherapeutical sensibility to cisplatin in human lung cancer cell line SPCA1.

Methods  SPCA1 cells were pretreated with A23187 at different concentrations. The expression of GRP78 at the mRNA level was analyzed by RT-PCR; the expression of GRP78 at the protein level was determined by Western blotting and immunofluorescence assay. Cell survival was determined by MTT assay. Cell apoptosis was analyzed by flow cytometry.

Results  The expression of GRP78 at both the mRNA and protein levels was obviously induced by A23187 in SPCA1 cells, with an elevation of GRP78 by 2.1-fold at the mRNA level and by 3.8-fold at the protein level compared to the control. There was a dose-dependent response. Survival curve analysis demonstrated that A23187 induction caused a significant reduction of survival for the cells subjected to cisplatin treatment (P <0.05). After treatment by cisplatin, the percentage of apoptotic cells in the A23187 pretreated group increased about three fold compared with the control group ((27.53±4.32)% vs. (9.25±3.64)%, P <0.05).

Conclusions  A23187 treatment was fairly effective for the induction of GRP78 in SPCA1 cells at both the mRNA and protein levels. To a certain extent, GRP78 up-regulation by A23187 was associated with the enhancement of drug sensitivity to cisplatin in human lung cancer cell line SPCA1.