DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体的表达及其意义

目的：探讨小鼠腹腔巨噬细胞内DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控Toll样受体(TLRs)的表达水平,阐明外周免疫系统中自身免疫调节因子的调控作用及其意义。方法：小鼠腹腔巨噬细胞分为pEGFPC1/mAire转染组、pEGFPC1/mAire与negative control siRNA共转染组、pEGFPC1/mAire与DNA-PKcs siRNA共转染组、pEGFPC1转染组、pEGFPC1与negative control siRNA共转染组和pEGFPC1与DNA-PKcs siRNA共转染组,采用RT-PCR方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞内TLR1～9的表达水平;采用脂质体转染重组质粒pEGFPC1/mAire和空载质粒pEGFPC1至小鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-qPCR方法检测2组细胞TLR1～9的表达水平;采用RT-qPCR方法检测2组转染细胞沉默DNA-PKcs前后TLRs的表达水平。结果：小鼠腹腔巨噬细胞能表达TLR1～9;与转染pEGFPC1/mAire组细胞比较,转染自身免疫调节因子后巨噬细胞TLR1、3和8的表达水平增加（P<0.05）,其他组TLRs表达水平无明显变化（P>0.05）;DNA-PKcs沉默后,转染pEGFPC1/mAire组细胞TLR1、3和8的表达水平较未沉默组明显下降（P<0.05）,而在转染pEGFPC1的细胞内DNA-PKcs沉默前后TLR1-9表达水平均无明显变化（P>0.05）。结论：在小鼠腹腔巨噬细胞内,自身免疫调节因子能够调控TLR1、3和8的表达,其机制可能与DNA-PKcs协同作用有关。
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柚皮素通过调控巨噬细胞NLRP3炎症小体活化对脓毒症致急性肺损伤的影响

目的 探讨柚皮素(NAR)调控巨噬细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化对脓毒症致急性肺损伤的影响.方法 采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、柚皮素低剂量组(25 mg/kg)和柚皮素高剂量组(75 mg/kg),每组15只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,并于术后6、1...     

类风湿性关节炎患者血清ASC NLRP3水平及意义

目的:探讨血清人细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对类风湿性关节炎(RA)患者的预测价值。方法:选取2021年11月至2023年6月我院收治88例类风湿性关节炎患者作为RA组、同期88例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清ASC和NLRP3水平。采用Spearman相关性分析类风湿性关节炎患者血清ASC、NLRP3水平与DAS28评分的相关性,采用Logistic回归分析类风湿性关节炎患者的影响因素。结果:RA组血清ASC水平高于健康对照组,NLRP3水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,ASC、NLRP3为RA患者独立危险因素(P<0.05)。结论:血清ASC和NLRP3水平升高与DAS28评分独立相关,血清ASC、NLRP3对RA及其疾病活动度有潜在的诊断价值。     

NLRP3在继发性甲状旁腺功能亢进症中的表达及临床意义

目的:探讨NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体在慢性肾脏病继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)中的表达及临床意义.方法:应用HE染色观察SHPT病人异常增生的甲状旁腺镜下形态;采用ELISA法检测正常人和SHPT病人血清中NLRP3水平;免疫组织化学SP法检测NLRP3在正常和异常增生的甲状旁腺组织中的表达,并...     

C3a-C3aR轴通过巨噬细胞向M1型极化对慢性牙周炎模型小鼠炎症反应和组织损伤的影响

目的:探讨补体C3a在体外对巨噬细胞极化状态的影响和C3a受体(C3aR)敲除对慢性牙周炎模型小鼠牙周组织中巨噬细胞极化状态、牙周组织炎症和软硬组织破坏程度的影响,阐明C3a-C3aR轴在慢性牙周炎发生发展过程中的作用及其可能机制.方法:根据基因型鉴定筛选出18只8周龄C57BL/6雌性小鼠,以基因型分为C3ar+/+...     

哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的影响

目的:本研究旨在探讨哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的作用。方法:将小鼠随机分为6组:对照组、柯萨奇病毒B3(coxsackievirus group B type3,CVB3)组、哈巴苷(低、中、高剂量)组和卡托普利组,采用CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠模型。HE染色观察心肌病理损伤程度;紫外分光光度法检测肌酸激酶同工酶-MB(creatine kinase lsoenzyme-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactatedehy drogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白I(myocardialtroponin I,cTnI)和心肌钙蛋白T(cardiac troponin,cTnT)水平;超声心动图检测小鼠左室舒张期后壁厚度(LVPWd)、射血分数(EF%)、舒张早期二尖瓣血流速度(E)、舒张早期二尖瓣环运动速度(E′IVS);ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β);蛋白免疫印迹法检测NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱天冬酶-1(cleaved caspase-1)的蛋白表达。结果:与CVB3组相比,哈巴苷低、中、高剂量组和卡托普利组心肌病理损伤程度明显改善;CK-MB、LDH、cTnI、cTnT水平明显降低(P<0.05);LVPWD、E/E′IVS明显降低(P<0.05),EF%明显升高(P<0.05);TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低(P<0.05);NLRP3、cleaved caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:哈巴苷对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。     

黄芪多糖对流感病毒性肺炎大鼠肺组织NLRP3信号通路的影响

目的 探究黄芪多糖(APS)对甲型流感病毒(IAV)性肺炎大鼠肺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的影响.方法 将40只大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪多糖低剂量组(APS-L组,50 mg/kg)和黄芪多糖高剂量组(APS-H组,100 mg/kg),每组10只.除对照组外,其余各组大鼠采用甲型流感病毒H1...     

牙周炎患者牙龈组织中TLR-2和TLR-4的表达

目的 研究Toll样受体-2(TLR-2)和TLR- 4在不同类型牙周炎及不同炎症程度的牙龈组织中的分布和表达水平,初步探讨TLR-2和TLR- 4在牙周炎发生和发展中的可能作用.方法 采集牙龈组织标本分为五组(n=10):正常对照组、慢性牙周炎炎症组、慢性牙周炎临床相对健康组、侵袭性牙周炎炎症组和侵袭性牙周炎临床相对健康组.免疫组织化学方法 检测各组牙龈组织中TLR-2和TLR- 4的分布和表达水平.结果 TLR-2和TLR- 4在牙龈结缔组织全层中均有表达,TLR- 4在牙龈上皮也有表达.与正常对照组比较,其余各组牙龈组织中TLR-2和TLR- 4表达均显著增加(P<0.05).牙周炎炎症组中,慢性牙周炎组TLR-2和TLR- 4表达显著高于侵袭性牙周炎组(P<0.05).牙周炎临床相对健康组中,慢性牙周炎组TLR- 4表达显著高于侵袭性牙周炎组(P<0.05),而TLR-2表达显著低于侵袭性牙周炎组(P<0.05).结论 TLR-2和TLR- 4可能参与牙周炎症过程,但在不同类型牙周炎牙龈组织中的表达可能存在差异.     

ROCK1,TRAF3 mRNA在耐药性癫痫患者海马组织中的表达及意义

目的:观察耐药性癫痫患者脑组织中与锌离子相关的RhoA蛋白1(Rho-associatedc,oiled-coil containing protein ki-nase 1,ROCK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子3(TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)mRNA的表达,探讨其在耐药性癫痫发病中的作用。方法:收集耐药性癫痫患者术后的海马脑组织,首先用基因芯片进行差异基因表达的筛选,然后用RT-PCR从基因水平上进行验证,并与正常对照组进行比较。结果:基因芯片检测中发现与锌离子连接相关的基因ROCK1和TRAF3在耐药性癫痫患者中表达上调。目的基因ROCK1和TRAF3 mRNA在耐药性患者脑组织中的表达明显增加(P<0.05),变化趋势与芯片扫描结果一致。结论:与锌离子相关的基因ROCK1和TRAF3可能参与了耐药性癫痫的形成,并在耐药性癫痫的发病机制中起着一定的作用。     

脂多糖对大鼠肺间质巨噬细胞CCK受体mRNA表达的影响

目的：探讨胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)受体CCK—AR及CCK—BRmRNA在大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)内的表达及脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)对其表达的影响。方法：用酶消化法结合肺泡灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化大鼠PIMs，用LPS(10mg／L)孵育PIMs0．5～12h。采用RT—PCR及Southern印迹技术观察CCK受体在大鼠PIMs内的表达亚型及LPS对其表达的影响。结果：经RT—PCR检测显示，CCK—AR和CCK—BRmRNA在大鼠PIMs均有表达，CCK—ARmRNART—PCR扩增产物为1．37kb，CCK—BRmRNART—PCR扩增产物为480bp。CCK—BRmRNA的相对表达量高于CCK—AR；LPS作用2h可明显诱导2种CCK受体mRNA表达上调，至12h仍维持较高水平。用γ-^32P—ATP标记的两种特异性探针分别对CCK—AR和CCK—BRmRNART—PCR扩增产物进行Southern分子杂交，结果均有特异性杂交带出现。结论：肺间质巨噬细胞有CCK—AR和CCK—BRmRNA表达，LPS可诱导2种CCK受体mRNA表达上调。     

IgA肾病患者外周血microRNA-223、NLRP3水平与肾间质纤维化的相关性

目的研究IgA肾病(IgAN)患者外周血microRNA-223(miR-223)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)水平与肾间质纤维化(RIF)的相关性。方法选取2018年1月—2020年1月在重庆市綦江区人民医院经肾组织病理检查确诊为原发性IgAN患者164例作为研究对象,按照RIF程度不同分为3组:RIF T0组、RIF T1组、RIF T2组。另取同期该院健康体检志愿者95例作为对照A组,以及非IgAN患者80例作为对照B组。比较各组受试者一般资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应测定受试者外周血miR-223、NLRP3 mRNA相对表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定受试者外周血RIF指标[转化生长因子β₁(TGF-β₁)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、转化生长因子α(TGF-α)、白细胞介素6(IL-6)、缺氧诱导因子α(HIF-α)];Spearman法分析miR-223、NLRP3 mRNA与RIF指标的相关性。结果与对照A组相比,对照B组、RIF T0组、RIF T1组、RIF T2组患者miR-223相对表达量依次降...     

骨膜蛋白在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的：检测慢性牙周炎患者牙龈组织中骨膜蛋白、基质金属蛋白酶8（MMP-8）和基质金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）的表达情况，探讨骨膜蛋白在慢性牙周炎发生发展中的可能作用及其相关生物学机制。方法：选择23例正常牙龈组织（对照组）和19例炎症牙龈组织（病例组）。采用免疫组织化学SP法检测2组患者牙龈组织中骨膜蛋白、MMP-8和TIMP-2表达情况，采用Spearman分析法检测2组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8和TIMP-2表达的相关性。结果：病例组患者牙龈组织中骨膜蛋白阳性表达率低于对照组（P<0.05）。相关性分析，对照组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8表达呈负相关关系（r=-0.51，P<0.05），骨膜蛋白表达与TIMP-2表达呈正相关关系（r=0.50，P<0.05）；病例组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8表达呈负相关关系（r=-0.482，P<0.05），骨膜蛋白表达与TIMP-2表达呈正相关关系（r=0.655，P<0.05）。结论：骨膜蛋白可以作为维持牙龈组织结构稳定性的初步指标，成为牙周组织再生方面的研究靶点。     

非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中NLRP3蛋白表达水平的影响

目的：探讨非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）蛋白表达水平的影响,并阐明其作用机制。方法：将45只大鼠随机分为对照组、高尿酸血症组和非布司他组,每组15只。高尿酸血症组和非布司他组大鼠采用氧嗪酸钾灌胃建立高尿酸血症模型,非布司他组大鼠每天给予7.2 mg·kg^-1非布司他,对照组大鼠每天给予等量生理盐水,共4周。HE染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现。全自动生化仪测定各组大鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定各组大鼠血清白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平,免疫组织化学法测定各组大鼠肾组织中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和NLRP3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,高尿酸血症组大鼠尿量和饮水量升高（t=5.317,t=3.674,P<0.05）,体质量降低（t=6.374,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平升高（t=21.463,t=15.342,t=4.603,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平升高（t=35.761,t=44.168,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平升高（t=17.064,t=26.314,P<0.05）;与高尿酸血症组比较,非布司他组大鼠尿量和饮水量降低（t=4.027,t=2.976,P<0.05）,体质量升高（t=3.694,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平降低（t=13.064,t=7.461,t=3.528,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平降低（t=24.162,t=17.314,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平降低（t=8.061,t=11.057,P<0.05）。结论：非布司他可能通过抑制大鼠肾组织中NLRP3炎症小体的激活及其下游炎性因子水平发挥对高尿酸血症模型大鼠的肾脏保护作用。     

M1型巨噬细胞对慢性牙周炎模型小鼠免疫状态的影响

探讨M1型巨噬细胞对牙龈卟啉单胞菌诱导的慢性牙周炎模型小鼠免疫状态的影响，阐明M1型巨噬细胞在慢性牙周炎中的作用。     

M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的 探讨M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎（CP）患者牙龈组织中的表达及其临床意义。方法 选取2018年10月—2021年6月柳州市人民医院收治的168例CP患者。根据病情严重程度分为轻度组、中度组和重度组，分别有27例、72例和69例。另选取同期该院53例牙龈组织健康者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象牙龈组织中M1型巨噬细胞极化相关因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、信号传导及转录激活因子1(STAT1)及M2型巨噬细胞极化相关因子精氨酸酶1(Arg1)、STAT6的表达。分析不同人群牙龈组织中M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子mRNA相对表达量，分析CP患者病情严重程度的影响因素，分析M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子对CP患者病情严重程度的诊断效能。结果 轻度组、中度组和重度组牙龈组织中iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量较对照组高，中度组和重度组较轻度组高，重度组较中度组高。轻中度组与重度组性别、年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史、饮酒史、偏侧咀嚼、巴氏刷牙、刷牙≥2次/d、刷牙≥3 min...     

PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体表达及细胞凋亡的影响

目的:初步探讨大气细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)诱导大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化及细胞凋亡的潜在分子机制.方法:采用中流量采样器收集PM2.5颗粒物,经超声提取制成混悬液,作用于大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后,MTT法检测细胞存活率,Western blot检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)及凋亡相关蛋白[Bax、Bcl-2及半胱天冬酶-3(Caspase-3)]的表达水平,ELISA检测PM2.5诱导的细胞上清液中半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白介素(in-terleukin,IL)-18和IL-1β的含量.结果:随着PM2.5浓度的增加和刺激时间的延长,NR8383细胞存活率降低(24 h:F=17.253,P=0.000;48 h:F=18.678,P=0.000;72 h:F=256.104,P=-0.000);PM2.5诱导NR8383细胞内NLRP3 (F=437.166,P=0.000)和Cathep-sin-B(F=42.062,P=0.000)蛋白的表达上调;PM2.5上调细胞内促凋亡蛋白Bax(F=72.827,P=0.000)表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2(F=390.322,P=0.000)表达,下调Caspase-3(F=169.833,P=-0.000)蛋白的表达;PM2.5上调细胞培养液中Caspase-1(F=629.866,P=0.000)、IL-18(F=587.165,P=0.000)和IL-1β(F=68.472,P=0.000)的水平.结论:PM2.5可通过溶酶体模式诱导肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化,促进IL-18和IL-1β分泌,并引起肺泡巨噬细胞发生凋亡.     

电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasL mRNA表达的影响

目的　观察电磁脉冲对小鼠脾细胞 Fas和 Fas Lm RNA表达的影响 .方法　 40只体质量 (18± 2 ) g的健康雄性 BAL B/c小鼠随机分为未照射组 (8只 )和全身照射组 (32只 ) .小鼠连续 2 d接受每日 2 5次脉冲的电磁脉冲全身照射 ,每次照射间隔约 2 min.于照射后 2 ,4,8和 12 h分别取 2只未照射小鼠和 8只照射小鼠的脾脏 .采用 RNA打点杂交法检测小鼠脾细胞 Fas和 Fas L RNA的表达水平 ,并对杂交信号进行灰度扫描后计算 RNA表达指数 .结果　受电磁脉冲照射后 2 h,小鼠脾细胞 Fas和 Fas L 的 RNA表达指数即分别从未照射的 0 .5 9± 0 .2 6和 0 .5 6± 0 .2 3升高到 0 .97± 0 .2 5和 0 .96± 0 .2 1,4h又下降至 0 .75± 0 .2 4和 0 .6 9± 0 .2 2 ,8h再度上升达最高峰 1.2 2± 0 .2 2和 1.32± 0 .5 0 (与对照组相比P<0 .0 0 1) ,于 12 h时下降至接近正常水平 .结论　电磁脉冲辐照可引起小鼠脾细胞 Fas和 Fas L RNA表达水平波动性升高 .     

反义肽核酸抑制树突细胞趋化因子受体CCR7表达的实验研究

目的探讨靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突细胞(DCs)CCR7的表达及趋化活性的影响。方法体外培养大鼠骨髓来源DCs,设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA、空白组为对照处理体外培养7d的DCs,分别于24h,48h,72h后收集细胞,利用Western-blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测反义PNA对CCR7分子表达的影响,通过趋化实验检测DCs的趋化活性。结果DCs经PNA处理后24h,各组DCs其CCR7表达无明显差别,在48h,Western-blot检测显示反义PNA组CCR7蛋白表达明显低于对照组,而RT-PCR检测在mRNA水平却无明显差别。在72h,反义PNA组CCR7的表达在不同水平均明显低于对照组。经趋化实验证实,在48h以后反义PNA组DCs趋化活性受到明显抑制(P<0.05)。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠树突细胞趋化因子受体CCR7的表达及其趋化活性,为进一步研究体内应用反义PNA抑制DCs的定向迁移和抗原递呈,调节免疫反应和诱导免疫耐受提供了新的策略。     

组织芯片技术检测BAG3蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨Bcl相关抗凋亡蛋白3（又称BAG3蛋白）在结肠癌组织中的表达及其临床意义,阐明BAG3蛋白与结肠癌发生发展的关系。方法：选取90例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织,采用组织芯片技术和免疫组织化学SP法检测组织中BAG3蛋白的表达,Kaplan-Meier、单因素和多因素生存分析法分析结肠癌患者临床病理参数与预后的关系。结果：BAG3蛋白在结肠癌组织中呈高表达,90例结肠癌组织中BAG3蛋白阳性表达率为37.8%,癌旁组织中BAG3蛋白阳性表达率为0.01%,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。BAG3蛋白表达与患者性别和肿瘤大小有关联（P<0.05）,与患者年龄、病理分级、TNM分期和有无淋巴结转移无关联（P>0.05）。Kaplan-Meier分析,BAG3在结肠癌组织中的表达与患者预后无关联,年龄较小的患者生存率较高,TNM分期低的患者生存率较高。结论：BAG3蛋白在结肠癌组织中呈高表达,蛋白表达与肿瘤大小有关联;BAG3蛋白可能作为结肠癌的肿瘤标志物或治疗靶点。