P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：观察黄花倒水莲皂苷C抑制氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipopprotein，ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（oxidized low desity lipoprotein receptor-1，LOX-1）表达的作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12），随机分为：对照组、ox-LDL（50mg／L）组和氧化型低密度脂蛋白（50mg／L）＋黄花倒水莲皂苷C（1，3，10μmol／L）组，通过RTPCR和Western blot蛋白印迹分析检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达。结果：ox-LDL上调LOX-1 mRNA和蛋白的表达，黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达，且呈浓度依赖性。结论：黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1 mRNA和蛋白的表达。     

LOX-1在ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞TGF-β1表达的作用

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PCR法检测细胞LOX-1和TGF-β1mRNA表达,用Westernblot法检测细胞LOX-1蛋白合成,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果:ox-LDL以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1mRNA和蛋白表达的同时,也以时间和浓度依赖的方式增加细胞内TGF-β1mRNA表达和培养液中TGFβ1蛋白的含量,JTX92(10μg/ml)可以明显抑制LOX-1和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:ox-LDL通过激活LOX-1调节HGMCTGF-β1基因表达、蛋白合成与分泌。     

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白所致内皮细胞功能的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞株ECV304单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的调节作用。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应(ELISA)、SP免疫组化法等,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达MCP-1、LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果6.25～25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6～48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1、LOX-1 mRNA和蛋白表达(P0.05),具有浓度、时间效应关系(P0.05)。LOX-1拮抗剂PIA可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1、MCP-1 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞黏附因子MCP-1表达,该作用可能通过抑制LOX-1的表达来实现。     

银杏黄酮苷元对内皮细胞植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的：探讨银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导脐静脉内皮细胞株ECV304植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1（Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）表达的调节作用。方法：应用逆转录聚合酶链式反应、SP免疫组织化学法,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果：6.25~25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6~48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）,具有浓度、时间效应关系（P〈0.05）;LOX-1拮抗剂聚肌苷酸可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论：ox-LDL可能通过LOX-1导致内皮功能障碍,银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

TWEAK对THP-1细胞中LOX-1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂(TWEAK)对人单核细胞(THP-1)中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法通过半定量RT-PCR检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1mRNA的表达,通过Western blot检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1蛋白表达的影响。结果发现TWEAK能够上调THP-1细胞中LOX-1mRNA及蛋白的表达,并且具有浓度和时间依赖性。结论 TWEAK可通过诱导单核-巨噬细胞表达LOX-1而具有致动脉粥样硬化的作用。     

氧化低密度脂蛋白诱导心肌细胞LOX-1表达的研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对心肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）表达的影响。方法原代培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的ox-LDL（0,10,20,50,100μg/ml）与心肌细胞作用不同时间（0,6,12,24,36h）。用RT-PCR测定LOX-1mRNA表达水平,Western blot测定LOX-1蛋白表达水平。结果不同浓度的ox-LDL均可诱导心肌细胞LOX-1mRNA和蛋白表达,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）,在10-50μg/ml的剂量范围内存在明显的剂量-效应关系,各组间比较有显著性差异（P〈0.05）。随着ox-LDL与心肌细胞作用时间的延长,心肌细胞LOX-1mRNA和蛋白表达增加,与对照组比较差异具有显著性（P〈0.05）,在6～24h内呈明显的时间-效应关系,各组间比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 ox-LDL可诱导心肌细胞LOX-1表达,并在一定范围内随ox-LDL浓度增加和作用时间延长而表达增强。     

LOX-1在D-葡萄糖培育人肾小球系膜细胞的表达

目的 研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖培养人肾小球系膜细胞(HGMC)的表达,探讨糖尿病肾脏损伤的机制.方法 体外培养HGMC,用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达,用Western blot法检测p38MAPK蛋白质的相对含量.结果 D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1 mRNA的表达,该作用可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制;D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式上调p38MAPK蛋白的表达,该作用也可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制.结论 D-葡萄糖能以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1的表达.高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1 mRNA表达,激活细胞内的p38MAPK信号传递途径,参与糖尿病肾病的发生发展.     

Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1

[目的]探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)作为氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用.[方法]用天然低密度脂蛋白(n-LDL)、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly(I)]250μg/mL和爱兰苔胶(carrageenan)以及不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100 μg/mL)与HUVECs作用于不同的时间(0,6,12,24,36 h),用Realtime RT-PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平,用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平,并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化.[结果]在HUVECs中加入不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100μg/mL),各组剂量的ox-LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),在10～50 μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系.但n-LDL对LOX-1的表达无影响.随着ox-LDL与HUVECs作用时间的延长,LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P＜0.01),在6～24 h内呈明显的时间-效应关系(P＜0.01).HUVECs预先与250 μg/mL的poly(I)或carrageenan作用2 h,然后再加入50 μg/mL的ox-LDL作用24 h.poly(I)和carrageenan都可以显著抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01).[结论]Ox-LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达,该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗.表明LOX-1不仅特异性地结合ox-LDL,而且介导ox-LDL对LOX-1表达的上调作用.     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体与内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶关系的研究

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化人脐静脉内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用不同浓度的ox-LDL孵育,通过W estern印迹检测LOX-1、p38MAPK蛋白水平,逆转录聚合酶链法观察LOX-1 mRNA表达,并以LOX-1特异阻断性抗体(JTX92)预处理内皮细胞,检测p38MAPK蛋白水平。四氮唑蓝法观察ox-LDL对细胞活力的影响。结果ox-LDL引起内皮细胞形态结构的改变,而且抑制内皮细胞的生长(P<0.05);ox-LDL呈浓度依赖性地上调LOX-1蛋白和mRNA表达(均P<0.05),并呈浓度依赖性激活p38MAPK通路,不同浓度ox-LDL(25μg/m l,50μg/m l,100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白质表达水平均明显高于对照组(48±7,79±15,113±14 vs 24±5,P<0.01);JTX92+ox-LDL(100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白水平明显低于ox-LDL(100μg/m l)组,(58±13 vs 113±14,P<0.01)。结论ox-LDL通过LOX-1途径激活p38MAPK信号通路,LOX-1上调是ox-LDL致动脉粥样硬化的重要环节。     

银杏叶提取物对脂多糖介导的血管内皮细胞低密度脂蛋白受体LOX-1表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物（GBE50）对脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor,LOX-1）表达的影响.[方法]应用LPS刺激体外培养的HUVECs 24h.RT-PCR方法检测（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor mRNA,LOX-1 mRNA）表达水平;采用蛋白质印迹分析检测LOX-1蛋白表达水平.[结果]LPS （1 μg/ mL）上调LOX-1 mRNA和蛋白表达水平,GBE50（40 μg/mL）轻度抑制LPS介导的LOX-1 mRNA（P＜0.005）和蛋白表达增加（但没有统计学意义,P＞0.05）,GBE50（80 μg/mL）及NF-κB抑制剂CAPE（20 μg/mL）明显抑制LOX-1 mRNA和蛋白表达上调（P＜0.01）.[结论] GBE50可能通过抑制LOX-1表达,在防治动脉粥样硬化中发挥作用.     

银杏叶提取物对同型半胱氨酸诱导LOX-1mRNA表达升高的拮抗作用

目的 观察同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响并探讨银杏叶提取物对其拮抗作用.方法 采用含不同浓度(0.001,0.01和0.1 mmol/L)同型半胱氨酸的培养液孵育人脐静脉血管内皮细胞;取最能诱导LOX-1表达升高的同型半胱氨酸浓度,分别加入银杏叶提取物和B族维生素.结果 随着同型半胱氨酸浓度的增加,LOX-1 mRNA表达增加,0.1 mmol/L的同型半胱氨酸最能诱导LOX-1 mRNA的表达;同型半胱氨酸+银杏叶提取物组和同型半胱氨酸+B族维生素组LOX-1mRNA表达较同型半胱氨酸组明显减少(吸光度值0.42±0.03和0.65±0.04 vs 0.83±0.05,P＜0.05),且同型半胱氨酸+银杏叶提取物组降低幅度较同型半胱氨酸+B族维生素组更大(P＜0.05).结论同型半胱氨酸具有诱导血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的作用,且呈剂量依赖性.银杏叶提取物可拮抗同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达升高,有望应用于治疗高同型半胱氨酸所致的动脉粥样硬化.     

厄贝沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因及蛋白表达的影响

目的研究不同浓度厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人单核/巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmoL/L佛波酯诱导分化后,将细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、厄贝沙坦干预组,干预组分别加入不同浓度厄贝沙坦孵育2 h后,再加入AngⅡ1×10-6moL/L孵育24 h,用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测(LOX-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,Ang II可明显上调THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度厄贝沙坦均能抑制(LOX-1)蛋白表达(P<0.05),并且随着厄贝沙坦浓度降低,抑制作用减低,即两者呈浓度依赖性。结论厄贝沙坦以浓度依赖方式抑制AngⅡ诱导的THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,减少巨噬细胞通过(LOX-1)途径的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)摄入,影响泡沫细胞的发生、发展,发挥其抗动脉粥样硬化(AS)作用。     

Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1

【目的】探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）作为氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用。【方法】用天然低密度脂蛋白（n—LDL）、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly（I）250μg／mL和爱兰苔胶carrageenan）以及不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL）与HUVECs作用于不同的时间（0，6，12，24，36h），用Realtime RT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平，用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平，并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化。【结果】在HUVECs中加入不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL），各组剂量的ox—LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），在10—50μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系。但n—LDL对LOX-1的表达无影响。随着ox—LDL与HUVECs作用时间的延长，LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高（P〈0．01），在6～24h内呈明显的时间-效应关系（P〈0．01）。HUVECs预先与250μg/mL的poly（I）或carrageenan作用2h，然后再加入50μg／mL的ox—LDL作用24h。poly（I）和carrageenan都可以显著抑制ox—LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。【结论】Ox—LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达，该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗。表明LOX-1不仅特异性地结合ox—LDL，而且介导ox—LDL对LOX-1表达的上调作用。     

MiR-590-5p对ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡以及LOX-1表达的影响

目的:研究miR-590-5p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调节作用,观察miR-590-5p对HUVECs凋亡的影响。方法:HUVECs经ox-LDL(50μg/mL)作用不同时间(0~48 h)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-590-5p的表达变化。HUVECs转染miR-590-5p模拟物(miR-590-5pmimics)后ox-LDL继续作用48 h。RT-qPCR和Western印迹分别检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达情况。FCM检测HUVECs凋亡率的变化。结果:随ox-LDL作用时间的延长,HUVECs凋亡率逐渐升高,miR-590-5p表达逐渐下调。miR-590-5p模拟物转染后可以降低LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。结论:miR-590-5p可抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调LOX-1基因表达有关。     

oxLDL和大豆异黄酮对滋养细胞LOX-1表达的调控及意义

目的通过检测氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)和大豆异黄酮(SI)对绒癌细胞株JEG-3细胞血凝素样氧化修饰低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调控,来探讨SI对滋养细胞的抗氧化作用,为其应用于子痫前期的防治提供一定的实验基础。方法以具有妊娠早期细胞滋养细胞特性的绒癌细胞株JEG-3细胞为研究对象,用细胞免疫化学、Westernblot、RT-PCR方法检测oxLDL和不同浓度的SI对JEG-3中LOX-1表达的调控。结果通过细胞免疫化学技术检测到LOX-1在JEG-3细胞浆及细胞膜中均有表达。oxLDL可诱导JEG-3细胞LOX-1mRNA和蛋白的表达;在oxLDL作用基础上,加入不同终浓度的SI共培养24h后,又可剂量依赖的逆转上述作用。结论推测SI在JEG-3细胞可能通过受体途径LOX-1对抗oxLDL的氧化损伤作用。     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响.方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代,CMV感染3～6代细胞,不同时间提取细胞总RNA,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达.结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似,病毒感染12、24h与对照组比较明显增强.结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达,可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一.     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化砸低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒（CMV）感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代，CMV感染3-6代细胞，不同时间提取细胞总RNA，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达。结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似，病毒感染12、24h与对照组比较明显增强。结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达，可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一。     

氨氯地平对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（hUVEC-12）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA表达的影响,以进一步探讨氨氯地平抗动脉粥样硬化的作用机制。方法筛选ox—LDL与hUVEC-12细胞孵育合适的处理浓度与时间,然后用不同浓度氨氯地平（0、0．1、1．0、10．0μmol／L）预孵育hUVEC-12后,与ox—LDL共同孵育,RT—PCR检测细胞MCP-1 mRNA表达的变化情况。结果筛选出ox—LDL与hUVEC-12共同孵育的合适浓度为50mg／L,时间为24h。氨氯地平可下调MCP-1 mRNA的表达,并且对其表达的影响呈现浓度依赖性。结论氨氯地平可下调ox—LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA的表达。     

动脉硬化兔血管壁组织中LOX-1的表达

目的 研究动脉硬化兔血管壁组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达情况,探讨氟伐他汀干预对其表达的影响.方法 24只新西兰大白兔随机分为正常饮食组、高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组(n=8).应用RT-PCR法和免疫组化法分别检测各组动物胸主动脉血管壁组织中LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并进行统计学分析.结果 高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组兔胸主动脉血管壁组织中均有LOX-1 mRNA及蛋白表达,而正常饮食组无表达;高脂饮食加氟伐他汀干预组LOX-l mRNA及蛋白表达水平均明显低于高脂饮食组(P＜0.05).结论 动脉硬化兔胸主动脉血管壁组织中LOX-1表达明显升高,而氟伐他汀干预能够显著下调其表达水平.