沉默ZEB1基因对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的影响

目的：探讨沉默锌指E盒结合同源框1（ZEB1）基因对胶质瘤U87细胞间质标志物表达和细胞迁移的作用,阐明ZEB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化（EMT）的影响。方法：将构建的ZEB1短发夹RNA（shRNA）干扰质粒（shZEB1#1和shZEB1#2）和对照质粒（shCtrl）转染至胶质瘤U87细胞,Western blotting法检测干扰效果。将胶质瘤U87细胞分为对照组（转染shCtrl的胶质瘤U87细胞）、EMT组[转染shCtrl的胶质瘤U87细胞用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导EMT]和ZEB1基因沉默组（转染shZEB1的胶质瘤U87细胞用TGF-β1诱导EMT）。Western blotting法检测各组细胞中间质标志物（N-钙黏蛋白和波形蛋白）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）的蛋白表达水平,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移率。结果： Western blotting法检测,转染shZEB1#1和shZEB1#2的胶质瘤U87细胞中ZEB1蛋白表达水平较转染shCtrl的细胞明显降低（P<0.05或P<0.01）,shZEB1#2对ZEB1表达的抑制效果更明显,表明ZEB1已稳定转染到U87细胞。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）;与EMT组比较,ZEB1基因沉默组N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。EMT组细胞迁移率明显高于对照组（P<0.01）,而ZEB1基因沉默组细胞迁移率明显低于EMT组（P<0.01）。结论：沉默ZEB1基因表达可抑制胶质瘤U87细胞EMT,并降低细胞迁移能力,提示ZEB1可作为侵袭性胶质瘤治疗的重要靶标。     

沉默Smad4基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究降低Smad4表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中Smad4 mRNA表达水平;Smad4-shRNA与Scramble-shRNA质粒分别稳定转染Smad4高表达MCF-7细胞,实验分为未转染MCF-7细胞组（正常对照组）,采用Smad4基因沉默组和Scramble组（阴性对照组）;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测增殖相关基因CDKN1A、CDK1和CDK2以及凋亡相关基因Suvivin、bcl-2、caspase3和caspase9 mRNA表达水平。结果：各组细胞增殖能力比较差异无统计学意义（P > 0.05）,各组细胞CDKN1A、CDK1和CDK2 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）;与正常对照组和阴性对照组比较,Smad4基因沉默组细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Smad4基因沉默组细胞Suvivin和bcl-2 mRNA表达水平明显升高（P < 0.01）,caspase3和caspase9 mRNA表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：Smad4可以通过下调Suvivin和bcl-2的表达、上调caspase3和caspase9表达引起细胞凋亡。     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：应用RNA干扰（RNAi）技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1α mRNA的小干扰RNA （siRNAs）,同时合成错义RNA （SCR）,采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组（无血清培养基）,RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组（survivin-siRNA,sis组）、联合干扰组（survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组）、非靶向特异性组（SCR组）和空白对照组（无血清培养基）,MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果：与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化（P>0.05）,sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）;与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

TP53在不明原因复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞生长的影响

目的：探讨肿瘤蛋白P53（TP53）在不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞凋亡和迁移的影响,初步阐明其机制。方法：选取40例URSA患者（患者组）和30例实施人工流产健康孕妇（对照组）的绒毛组织,采用RT-PCR和Western blotting法检测绒毛组织中TP53 mRNA及蛋白表达水平。培养人滋养层HTR-8细胞,分为空白对照组、空载体组和TP53-siRNA组,Western blotting法检测转染siRNA后3组细胞中TP53蛋白表达水平。流式细胞术、Transwell小室和Western blotting法分别检测空白对照组和TP53-siRNA组细胞凋亡率、细胞迁移数和细胞中TP53、Cleaved-Caspase3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：患者组绒毛组织中TP53 mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组（P<0.01）。TP53-siRNA组细胞中TP53蛋白表达水平明显低于空白对照组（P<0.01）。细胞转染48h后,与空白对照组比较,TP53-siRNA组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,细胞迁移数明显升高（P<0.01）,Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：TP53在URSA患者绒毛组织中呈高表达,沉默人滋养层HTR-8细胞TP53表达能明显促进细胞迁移和抑制细胞凋亡。     

沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨沉默WNT4基因对稳定转染配对盒基因2（PAX2）大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明PAX2基因是否通过WNT4基因调控细胞生物学活性。方法：选取对数生长期的PAX2基因稳转细胞系,分为稳转组和对照组。稳转组细胞分为稳转对照组（不应用WNTsiRNA沉默）和沉默72 h组（应用WNTsiRNA沉默72h）。Western blotting法检测稳转组和对照组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白的相对表达量,Realtime PCR法检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量,细胞划痕实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率,Transwell实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数。结果：Western blotting法检测,稳转组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白相对表达量高于对照组（P<0.05）。Real-time PCR法检测,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量低于稳转对照组（P<0.05）。细胞划痕实验10 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验18 h后,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组（P>0.05）。Transwwell实验,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数低于稳转对照组（P<0.05）。结论：PAX2基因可能通过WNT4基因调控细胞的生物学活性。     

RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞系的建立

目的：构建RHBDF2基因过表达慢病毒载体,建立稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞,为RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞的建立提供依据。方法：根据NCBI提供的RHBDF2基因序列,设计并合成引物,PCR扩增RHBDF2基因后通过Gateway克隆技术将目的基因克隆至入门载体,再亚克隆至慢病毒载体pLV[Exp]-EGFP,构建重组慢病毒质粒pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2;将慢病毒表达载体质粒pLV[Exp]-EGFP和重组慢病毒质粒pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2分别与慢病毒辅助包装质粒共转染HEK293T细胞,包装慢病毒并测定慢病毒滴度;将感染pLV[Exp]-EGFP-control的EA.hy926细胞作为对照组,感染pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2的EA.hy926细胞作为实验组,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞;荧光定量PCR （qPCR）和Western blotting法检测对照组和实验组EA.hy926细胞中RHBDF2 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切电泳和测序检测,实验组过表达慢病毒载体的基因序列与设计合成的序列完全一致;对照组包装的慢病毒滴度为1×10⁸ TU·mL^-1,实验组慢病毒的滴度为3×10⁸ TU·mL^-1;荧光显微镜下慢病毒成功感染EA.hy926细胞,感染率达95%以上;qPCR检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2 mRNA表达水平较对照组明显升高（P<0.01）;Western blotting法检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2蛋白表达水平较对照组明显升高（P<0.05）。结论：成功构建RHBDF2过表达慢病毒载体,利用pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2慢病毒建立了稳定上调RHBDF2表达的EA.hy926细胞系。     

氯化锂对地塞米松诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的影响及其机制

目的：建立地塞米松（Dex）诱导的大鼠胰岛INS-1细胞凋亡模型,探讨氯化锂（LiCl）对Dex诱导的胰岛β细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：将INS-1细胞分为对照组、0.1 μmol·L^-1Dex组和LiCl+0.1 μmol·L^-1Dex组。TUNEL染色和Annexin Ⅴ/PI染色法检测各组INS-1细胞凋亡率,Real-time PCR法检测各组INS-1细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、诱导型-氧化氮合酶（iNOS）、NADPH氧化酶4（Nox4）、NADPH oxidase （p47phox）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组INS-1细胞中GSK-3β、p-GSK-3、SOD、iNOS和Nox4蛋白表达水平,GENMED试剂盒检测各组NIS-1细胞中活性氧（ROS）水平,Griess法检测各组INS-1细胞中一氧化氮（NO）水平。结果：与对照组比较,0.1 μmol·L^-1Dex组INS-1细胞凋亡率升高（P<0.05）,SOD mRNA和p-GSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞中Nox4、p47phox、iNOS mRNA表达水平升高（P<0.05）,细胞中ROS和NO水平升高（P<0.05）;与0.1 μmol·L^-1Dex组比较,LiCl+0.1μmol·L^-1Dex组INS-1细胞凋亡率降低（P<0.05）,SOD mRNA和p-GSK-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,细胞中Nox4、p47phox和iNOS mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和NO水平降低（P<0.05）。结论：Dex可诱导大鼠胰岛β细胞凋亡,LiCl可通过抑制GSK-3β活性减轻Dex诱导的胰岛β细胞凋亡。     

奥利司他联合EZH2抑制剂GSK126对胰腺癌细胞脂质代谢重编程的影响

目的 阐明果蝇zeste基因增强子的人类同源物2（EZH2）抑制剂抗胰腺癌疗效不理想的可能机制,为探索新的胰腺癌治疗方案提供依据。 方法 采用不同浓度（0~50 μmol·L^－1）EZH2抑制剂GSK126分别处理胰腺癌PANC-1细胞、CFPAC-1细胞和胰腺转移癌SW1990细胞,CCK-8法检测各组细胞存活率。将3种细胞各分为对照组和GSK126组,GSK126孵育48 h后采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中甘油三酯（TG）水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中凋亡基因含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1、3、7、9（Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9）和血管内皮生长因子A（VEGFA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）及干性标志基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平,以及脂代谢相关基因脂肪酸合成酶（FASN）、乙酰辅酶A羧化酶a （ACACA）、柠檬酸合成酶（CS）、ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）和酰基辅酶A合成酶短链家族成员2 （ACSS2）mRNA表达水平。将3种细胞各分为对照组、GSK126组、FASN抑制剂奥利司他（Orlistat）组和GSK126+Orlistat组,细胞孵育48 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率,计算两药联合指数（CI）,油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中TG水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中凋亡基因Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9及干性基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平。 结果 GSK126呈浓度依赖性抑制胰腺癌细胞增殖。与对照组比较,GSK126组3种细胞凋亡率和凋亡基因mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）,GSK126组SW1990细胞中VEGFA和PANC-1细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,3种细胞中CD133及CFPAC-1和SW1990细胞中CD24 mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）。与对照组比较,GSK126组3种细胞中脂滴数量明显增加,TG水平和FASN mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或 P<0.01）,其他脂代谢相关基因也有不同程度升高。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126 +Orlistat组细胞存活率明显降低（P<0.05或P<0.01）,经计算两药CI均<1,具有协同作用。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+Orlistat组细胞中脂滴数量明显减少;与对照组和GSK126组比较,GSK126+Orlistat组细胞中TG水平明显降低（P<0.01）,凋亡基因和干性基因mRNA表达水平明显升高（P<0.05或 P<0.01）;与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+ Orlistat组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。 结论 GSK126在抑制胰腺癌细胞增殖的同时可诱发细胞内脂代谢重编程,削弱了其抗癌效果,联合使用FASN抑制剂Orlistat可部分逆转该效应,协同抑制细胞增殖,明显增强细胞凋亡并降低干性基因表达。     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的：探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌(LSCC) TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。方法：TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。结果：慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01...     

PHF8基因对食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 利用慢病毒(lentivirus)介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous-cell carcinoma,ESCC,以下简称食管鳞癌)裸鼠移植瘤模型,观察锌指蛋白8(plant homeodomain finger protein 8,PHF8)对移植瘤生长的影响。方法 分别将未感染慢病毒(空白对照组)、感染Nonsilencing-shRNA慢病毒(阴性对照shRNA组)和PHF8 shRNA慢病毒(PHF8 shRNA组)的人食管鳞癌细胞系TE-1接种于裸鼠背部皮下,建立食管鳞癌裸鼠移植瘤模型。定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。4周后处死裸鼠,定量PCR及Western blotting法检测肿瘤组织中PHF8的表达。结果 PHF8 shRNA组较阴性对照shRNA组、空白对照组的裸鼠致瘤能力明显减弱,PHF8 mRNA和蛋白的表达水平显著降低。结论 慢病毒介导的shRNA干扰能有效减少食管鳞癌裸鼠移植瘤中PHF8的表达,而降低PHF8的表达能抑制食管鳞癌移植瘤的生长。     

卵巢癌组织中miR-223的表达及其对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的促进作用

目的：分析微小RNA-223 (miR-223)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨miR-223对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的影响,并阐明其分子调控机制。方法：采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测45例卵巢癌患者手术切除组织样本和不同卵巢癌细胞中miR-223表达水平,分析不同临床病理特征卵巢癌患者癌组织中miR-223表达水平。体外培养卵巢癌OVCAR3细胞,采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法分析miR-223对N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向调控关系。OVCAR3细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、 miR-223抑制剂(MiR in组)和同时转染miR-223抑制剂及siRNA-NDRG1质粒(MiR in+si-NDRG1组),克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数。结果：与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中miR-223表达水平明显升高(P<0.01),miR-223表达水平与卵巢癌患者组织学分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有密切...     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的：探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。方法：取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、 MKN-45、 SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1 (CTDP1)mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Ve...     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

曲美替尼在卵巢癌中对PAX8的表达作用

目的 探究MEK抑制剂—曲美替尼在卵巢癌中对PAX8表达的作用。 方法 应用基因富集分析(GSEA)检测卵巢癌细胞经曲美替尼处理后相关基因表达的差异,蛋白免疫印迹法、免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测曲美替尼对卵巢癌细胞PAX8蛋白表达和PAX8 mRNA的影响;结晶紫染色法检测曲美替尼对卵巢癌细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR和CCK8实验检测干扰KRAS突变卵巢癌细胞ELK1基因后PAX8表达及细胞增殖的变化。 结果 GSEA结果显示,曲美替尼使卵巢癌细胞的KRAS基因和ELK1基因表达下调(P<0.01);实时荧光定量PCR结果显示,曲美替尼能抑制KRAS突变卵巢癌细胞中PAX8的转录(P<0.001);结晶紫染色法结果显示,曲美替尼处理后的KRAS突变卵巢癌细胞的增殖能力降低;蛋白免疫印迹法结果显示,曲美替尼能抑制KRAS突变卵巢癌细胞PAX8基因和ELK1基因表达(P<0.001),干扰KRAS突变卵巢癌细胞ELK1基因能抑制PAX8基因的表达(P<0.001);CCK8结果显示,干扰ELK1基因表达可抑制KRAS突变卵巢癌细胞增殖(P<0.05)。 结论 曲美替尼在KRAS突变的卵巢癌中通过ELK1抑制PAX8表达及细胞增殖。