多孔利福平/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备及其性质研究

目的：制备多孔利福平/聚乳酸-羟基乙酸共聚物( PLGA)微球,并考察其理化特性和体外释放行为。方法以PLGA为载体,NH4 HCO3为致孔剂,改良乳化溶剂扩散法制备多孔利福平微球,扫描电镜观察微球的形态,测定微球的空气动力学直径,HPLC法测定微球的载药量和包封率,并考察微球的体外释放行为。结果多孔利福平/PLGA微球为多孔状,粒径和孔道大小随NH4 HCO3的量的增加而相应增大,空气动力学直径在1~5μm范围内,载药量和包封率分别约为5%和60%,体外累积释放率24 h可达60%左右。结论多孔微球具有适宜的吸入特性,或可成为递送利福平的新载体。     

聚乳酸-羟基乙酸共聚物吗啡微球的制备及体外释放模型的建立

目的：研究以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为载体的吗啡生物可降解缓释微球制剂的制备,并测定其体外释放曲线,建立体外释放模型。方法：采用溶剂挥发法制备吗啡PLGA微球,高效液相色谱法（HPLC）检测微球中吗啡的含量。采用透析释药法测定微球体外释放曲线,并用零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi模型方程进行线性拟合。结果：吗啡PLGA微球的载药量为11．86％,药物包封产率为33％,体外释放曲线显示吗啡PLGA微球释放时间明显延长至10d以上。结论：吗啡PLGA微球明显地延长了吗啡释放时间,缓释性好,体外释放遵从零级释放模型。     

多西紫杉醇PLGA/nHA复合微球的制备及体外释放研究

目的 制备多西紫杉醇(DTX)聚乳酸羟基乙酸(PLGA)/纳米羟基磷灰石(nHA)复合微球,研究纳米羟基磷灰石对复合微球的载药量,包封率和体外释放等性质的影响,以及抑制前列腺癌细胞的增长效应.方法 以疏水性抗癌药物多西紫杉醇作为模型药物,采用单乳化溶剂挥发法(S/O/W)制备PLGA/nHA-DTX复合微球,对载药前后的纳米羟基磷灰石进行透射电子显微镜观察和FTIR分析,并采用扫描电镜、激光粒度仪和高效液相色谱对微球的载药量、包封率、粒径及体外释药性质进行研究.结果 FTIR结果 表明纳米羟基磷灰石对多西紫杉醇有较强的吸附作用.PLGA/nHA-DTX复合微球的载药量和包封率分别为3.92%和88.7%,较之单纯的PLGA-DTX微球均有很大的提高.经过体外释放药物突释后,复合微球比单纯PLGA微球的药物释放慢.在第30 d时,复合微球和单纯的PLGA微球累积药物释率放分别为62.40%和72.70%.MTT实验结果 显示PLGA/nHA复合微球对癌细胞增长的抑制效果优于单纯PLGA微球和药物.结论 与单纯的PLGA-DTX微珠相比,由于纳米羟基磷灰石对多西紫杉醇存在较强的吸附作用,使PLGA/nHA-DTX复合微球的载药量和包封率得到了较大的提高,具有更好的药物缓释效果,抑制癌细胞增长的作用更有效.     

吉非替尼PLGA微球的制备与体外释放研究

目的：以吉非替尼为模型药物,乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为载体,研究制备吉非替尼PLGA缓释微球。方法：选择O/W乳化溶剂扩散法制备微球,在单因素考察的基础上,设计正交试验优化制备工艺;采用光学显微镜、扫描电镜等手段观察微球形貌;差式扫描量热法验证吉非替尼PLGA微球的形成;考察吉非替尼PLGA微球的体外释放行为。结果：差式扫描量热法结果表明,吉非替尼与PLGA分子间作用力发生变化,以分子形式均匀分散在载体中。吉非替尼PLGA微球呈白色球形颗粒,表面平整,平均粒径为（10.35±0.32）μm,包封率为（88.44±1.26）%,载药率为（10.00±0.23）%;体外释药符合零级释放方程Q=0.769t-1.800 9,r2=0.980 8。结论：吉非替尼PLGA微球制备工艺稳定,在体外缓慢释放药物达5 d以上,具有明显的缓释作用。     

搭载紫杉醇脂质体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物静电纺丝膜对神经干细胞增殖分化的影响

目的：探讨搭载不同浓度紫杉醇脂质体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）静电纺丝膜对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响，评价载有紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤组织工程修复中应用的可行性。方法：将紫杉醇脂质体和PLGA以不同比例混合，利用静电纺丝技术分别构建1、5和10 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜。从胎鼠大脑组织中分离纯化NSCs。扫描电镜（SEM）检测各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径，免疫荧光染色鉴定分离纯化所得的NSCs。将NSCs分别培养在含有不同浓度（0、1、5和10 μg·L^-1）紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜的培养基中（作为纯PLGA静电纺丝膜组和1、5及10 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组），MTT法检测各组NSCs增殖活性，RT-PCR法检测各组NSCs中Tuj-1和GFAP mRNA表达水平。结果：紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜呈白色薄膜状。SEM检测，各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光染色，从胎鼠脑组织中分离出的细胞呈球状，所有细胞均有Nestin蛋白阳性表达。MTT法检测，5 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs增殖活性高于其他3组（P<0.05）。RT-PCR检测，与纯PLGA静电纺丝膜组比较，5 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs中Tuj-1 mRNA表达水平升高（P<0.05），GFAP mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论：中等浓度紫杉醇能够促进NSCs增殖，诱导NSCs向神经元分化。载有中等浓度紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤修复中有一定的应用价值。     

载紫杉醇缓释微球的制备及其体外抑瘤效果的观察

目的 应用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载紫杉醇(PTX) PLGA微球,探讨其理化性质及其体外抑瘤效果.方法 采用双乳剂挥发法制备PTX-PLGA微球,扫描电镜及光学显微镜观察其外观形态,测定微球径线.高效液相色谱法评价PTX-PLGA微球载药率及其包封率.培养卵巢癌SKOV3细胞株,并设空白对照组、生理盐水组、PLGA微球悬液组、紫杉醇注射液组和PTX-PLGA微球悬液组,应用MTT法检测不同处理组在不同时间细胞的生长抑制情况,倒置显微镜下观察肿瘤细胞凋亡形态.结果 PTX-PLGA微球大小均匀,表面光滑无粘连,平均直径为(2.00±0.19) μm,载药率约为5.68％,包封率为81.10％.给药72 h后药物浓度为1×105 mol/L时,PTX-PLGA组的卵巢癌细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05).结论 本法制备的PTX-PLGA微球性质稳定,对卵巢癌细胞的抑制作用具有一定缓释效果.     

正丁苯酞-聚乳酸聚羟基乙酸微球的制备及性能评价

目的 优选正丁苯酞 聚乳酸聚羟基乙酸（PLGA）微球的制备工艺,并对制备微球的性能进行检测。 方法 使用O/W型乳化溶剂挥发法制备正丁苯酞-PLGA微球,以载药量、包封率为观察指标,通过单因素实验优选制备工艺,并观察体外释药性能。采用生物显微镜观察微球的表面形态并测量粒径。结果 最佳制备工艺为投药量15 mg,PLGA 50 mg,聚乙烯醇质量分数为 2%,搅拌转速为700 rpm。正丁苯酞的载药量 （14.49±0.56）,包封率 （82.89 ± 1.46）。所制备的微球光滑圆整、粒径均一,平均粒径约为 （23.6±0.87）nm。体外释药实验表现为突释。结论 采用O/W型乳化溶剂挥发法初步制备了正丁苯酞 PLGA微球,优选的制备工艺条件稳定,制备方法重现性良好。     

磷酸钙骨水泥/印第安刺猬蛋白/聚乳酸羟基共聚物微球复合物制备及体外释放性能初步研究

目的:观察不同浓度印第安刺猬蛋白(Ihh)对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(BMDMs)增殖分化的影响，筛选最适浓度用于后续实验，并初步探索磷酸钙骨水泥/印第安刺猬蛋白/聚乳酸羟基共聚物(CPC/Ihh/PLGA)微球复合物的制备工艺及体外释放情况。方法:选择6～8周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠10只，处死后分离骨髓，纯化BMDMs并进行培养。根据培养基不同分为空白对照组、100 ng/ml Ihh组、200 ng/ml Ihh组、300 ng/ml Ihh组、400 ng/ml Ihh组和500 ng/ml Ihh组。利用CCK-8法检测不同浓度Ihh对小鼠BMDMs增殖速率的影响。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法评估不同浓度Ihh促小鼠BMDMs破骨向分化能力。采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同浓度Ihh对小鼠BMDMs破骨向分化相关基因mRNA表达的影响。应用复乳溶剂挥发法制备Ihh/PLGA微球。利用扫描电子显微镜观察微球形态并计算其粒径大小。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测微球中Ihh包封率。最后制备CPC/Ihh/PLGA微球复合物并对其体外释放...     

淫羊藿苷/载明胶纳米复合物-PLGA缓释系统的制备及工艺优化

目的：制备淫羊藿苷（ICA）@明胶纳米粒（GNPs）-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）（ICA@GNPs-PLGA）缓释系统,并对制备工艺进行优化。方法：采用二步去溶剂法和S/O/W乳化溶剂挥发法制备ICA@GNPs-PLGA缓释系统,检测投放的PLGA和纳米复合物的质量比和ICA的投入量等不同因素对微球包封率（EE）的影响以优化制备工艺。扫描电镜（SEM）观察纳米复合物和微球的表面特征;高效液相色谱法（HPLC）测量微球EE及其体外释放结果。结果：所制备的复合微球和纳米复合物均为白色粉末状;SEM下微球和纳米复合物表面光滑、圆整,粒径较为均一,粒径分布范围分别为4~12 μm和150~200 nm。当GNPs投入量为6 mg,PLGA在二氯甲烷（DCM）中的临界浓度为0.5%~1.0%;当GNPs的质量上升至12 mg时,PLGA在DCM中的临界浓度升至1.0%~2.0%;当PLGA的浓度低于0.25%时,无完全包封的复合微球可以形成。在临界浓度内,ICA@GNPs-PLGA微球的EE高于（62.00±1.25）%,且EE和ICA的投入量呈负相关关系（P<0.05）。24h时内微球累积释放率低于5.47%,40d时累积释放率为65.21%。结论：采用优化的制备工艺可以制备出粒径分布较窄、载药率较高、低突释和长期释放的ICA@GNPs-PLGA微球缓释系统。     

聚乳酸/羟基磷灰石复合材料的机械性能及其细胞毒性

目的：制备不同质量配比聚乳酸/羟基磷灰石(PLLA/HA)复合材料,对其机械性能和细胞毒性进行研究,得出两者的最佳质量配比,并探讨其作为乳前牙根管桩材料的可行性。方法：以NH4H2PO4、Ca(CH3COO)2?H2O　和CH3COONH4为原料制备微球型HA。采用溶液共混法和热压成型法制备PLLA/HA复合材料,按复合材料中HA质量分数不同分为PLLA、PLLA-3%HA、PLLA-5%HA、PLLA-7%HA和PLLA-9%HA组。采用扫描电子显微镜(SEM)观察HA形貌和尺寸;X射线晶体衍射(XRD)法进行物相分析;傅立叶变换红外光谱(FT-IR)法分析产物成分;万能材料试验机测试复合材料的弯曲强度和弹性模量;MTT法检测PLLA/HA复合物对L929细胞相对增殖率(RGR)的影响。结果：扫描电镜,所制备的HA为片层状晶体所构成的微球形,直径约1 μm,大小均匀,形态一致。XRD图谱,观测到HA的特征峰,无明显杂峰。FT-IR谱图中可见PO43－基团在565、606和1 042 cm－1处的强吸收峰。与PLLA组比较,含有HA的各组PLLA-HA复合材料的弯曲强度和弹性模量明显增高（P<0.01）,PLLA-5%HA组材料的弯曲强度和弹性模量最大（138 MPa、4.6 GPa）。MTT法,PLLA、PLLA-3%HA、PLLA-5%HA、PLLA-7%HA和PLLA-9%HA各组复合材料RGR均在93%以上,细胞毒性级别均为0～1级。结论：PLLA/HA复合材料具有一定的力学性能,无细胞毒性,有望成为理想的乳前牙根管桩材料。     

Pilot production of high-titer interferon and virus with a microcarrier suspension culture system.

We have successfully cultured four cell lines--L929, BHK-13, BHK-21 and CHO-K1 using an MC-1 type microcarrier made in our academy. With the microcarrier in a concentration of 5 mg/ml, the cell density was about 30 x 10(4) cells/ml; after 3 days in suspension culture, the cells could proliferate to 1 x 10(6) cells/ml. At this time, when L929 cells were primed with 25 IU/ml MuIFN for 14-24 h and then superinduced with NDV, cycloheximide (20 micrograms/ml) and actinomycin D (2 micrograms/ml), the titer of IFN reached approximately 10(5) IU/ml (10(5) IU/mg of protein, expressed in specific activity). When VSV was inoculated into the other three cell line cultures, the viral titer reached 6 Log TCID50/ml or much higher. The yield with the CHO-K1 cell line was the highest, reaching titers of 7-8 Log TCID50/ml. These titers were similar to those seen in stationary culture. With trypsin-citrate solution and a more rapid stirring speed, the cells could be satisfactorily released from the microcarriers and reattached on fresh ones. These experiments show that the microcarrier suspension culture system is suitable for producing large scale, high-titer, low-cost vaccines and IFNs, both natural and recombinant, using genetically-engineered CHO cell lines.     

含有二色性染料的PDLC的光电性能

用聚合分相法,在Ｅ－７液晶中掺入二色性液晶分散蓝,制成聚合物分散液晶膜。测定了它的光电性能。与不加二色性染料的聚合物分散液晶膜比较,膜对比度提高,响应时间τｏｎ保持不变,松驰时间τｏｆｆ略有增加。     

微载体在培养人骨髓间充质干细胞成骨诱导中的作用

目的探讨微载体在培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨诱导中的作用,建立一种大量、快速获得骨组织工程种子细胞的方法.方法将普通培养瓶培养的第3代hMSCs分别应用搅拌式生物反应器和微载体成骨诱导培养,分别于培养的第2、4、6、8、10、12、14天检测诱导细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,并与普通成骨诱导方法进行对比.观察细胞增殖情况,比较两种方法细胞增殖速度(细胞数/d).结果接种24 h后,88%的hMSCs细胞粘附于微载体并铺展,3 d后生长加速,约8～9 d后生长达最大值,最终细胞收获密度为接种时的16～22倍.细胞增殖速度约为普通培养法的3.2倍(P＜0.05).诱导细胞的ALP的活性在第12天达最大值,且微载体成骨诱导培养的细胞ALP活性与普通培养法无显著差异(P＞0.05).结论应用微载体技术可成功地进行hMSCs的成骨诱导培养和快速扩增,能满足骨组织工程的需要.     

新型生物活性复合材料RGD-PLGA/HA体外细胞相容性的实验研究

目的研究新型多孔多肽聚乳酸乙醇酸/羟基磷灰石(RGD-PLGA/HA)支架材料的体外细胞相容性。方法采用贴壁法对兔骨髓基质细胞(BMSCs)进行体外矿化诱导培养,扩增后与实验A组(RGD-PLGA/HA)、实验B组(PLGA/HA)分别进行体外复合培养,并通过定性及定量法检测BMSCs在材料表面的黏附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性。结果兔BMSCs在每组材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,实验A组细胞的黏附及增殖能力均强于实验B组。结论兔BMSCs与新型多孔RGD-PLGA/HA支架材料有良好的相容性。     

一种新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能研究*

目的：研究一种新型聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid), PLGA]/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能。方法：制备PLGA电纺膜(A组)、纯鱼皮胶原膜(B组)及新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜(C组)3种膜,分别检测接触角、失重率、拉伸强度、断裂伸长率等物理性能,初步评价新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能,为其应用于种植引导组织再生提供理论依据。结果：新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜(C组)具有良好的亲水性,接触角为68.52°;体外降解12周后失重率为(14.85±0.13)%,拉伸强度为(2.41±0.47) MPa,断裂伸长率为(77.98±25.72)%,失重率速率最小且仍保持一定的拉伸强度与断裂伸长率。结论：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理机械性能能够达到临床要求,为进一步的细胞实验提供基础。     

纤维素与明胶微载体微重力培养肝细胞的比较

目的 探讨商品化的多孔微载体:cytopore 2和cultispher S何种更适合于微重力条件下培养CL-1细胞.方法 采用RCCS旋转培养系统.在50 ml水平微重力旋转培养CL-1细胞.分别对接种至cytopore 2和cultispher S的细胞进行动态形态学观察、细胞计数和功能学检测.结果 CL-1细胞在两种载体上均可粘附生长,并于第9天达到生长高峰.细胞计数结果提示cultispher S的细胞密度可达到4×10 6个/ml.在第10、11、12天,cytopore 2组的上清中自蛋白浓度明显高于cultispher S组.有显著差异(P<0.05),在第10、11天,cytopore 2组的上清中尿素浓度明显高于cultispher S组,有显著差异(P<0.05).结论 Cytopore 2培养的CL-1细胞计数低于Cultispher S组,但功能好于Cultispher S组.     

聚乳酸乙醇酸共聚物与纳米羟基磷灰石共混制备组织工程纤维环支架的实验研究

目的探讨以聚乳酸乙醇酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)与纳米羟基磷灰石(hydroxyapa-tite,HA)为原料,利用静电纺丝的技术制备出的三维多孔支架构建组织工程纤维环的可行性。方法将PLGA与HA溶解于丙酮中,配制20%(w/v)的溶液,磁力搅拌均匀后,进行静电纺丝,制备三维多孔支架。支架通过扫描电镜和磷酸盐缓冲液降解(phosphate buffered saline,PBS)的方式,观察支架的形貌和降解性能;利用CCK-8和伊红染色的方法观察支架的生物相容性。结果支架具有良好的纤维形貌,直径均匀,扫描电镜下可见HA结晶。支架在磷酸盐缓冲液中降解速度较快,8周时支架失重可达40%,表现出良好的降解性能。细胞毒性试验和伊红染色均表明细胞在支架上的生长情况较好,支架具有良好的生物相容性。结论 PLGA与HA共混制备的纳米纤维支架具有良好的空间结构和生物相容性,因此该支架是一种良好的组织工程纤维环支架材料。     

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1表型与流感病毒血凝素特异性T细胞增殖及其抗体的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR4/1表型与流感病毒血凝素(HA)308-317多肽特异性T细胞增殖和血清抗HA308-317抗体之间的关系.方法 将HA308-317多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5 d,3H掺入法测定T细胞增殖.用ELISA法检测RA患者血清HA308-317抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR.SSP)技术对RA患者进行HLA-DR分型.结果 在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性.其中,HA308-317多肽可刺激T细胞增殖的RA患者有17例(62.9%),10例无反应性;15例(55.6%)HLA-DR4/阳性RA患者抗HA308-317抗体阳性.在HLA.DR4/I表型阴性的RA患者中,T细胞对HA308.317多肽有反应性者10例(23.3%),无反应性者33例;25例(58.1%)患者抗HA308-317抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组HA308-317特异性细胞增殖高于HLA-DR4/1表型阴性组(P＜0.01),但两组血清中HA308-317抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者HA308-317特异性T细胞增殖与HLA-DR4/1表型有关,HA308-317抗体生成与HLA-DR4/l亚型无明显关系;HA308-317多肽可能通过诱导HLA-DR4/1特异性T细胞活化参与RA的发病.     

透明质酸功能化三氧化二钆纳米颗粒的制备及其放疗增敏作用

［摘要］目的: 制备透明质酸功能化三氧化二钆（HA Gd2O3）纳米颗粒,探讨其对肝癌HepG 2细胞的放疗增敏作用。方法: 利用透明质酸、氯化钆为前驱物通过聚醇水热法制备HA Gd2O3;通过透射电子显微镜、X射线衍射仪表征HA Gd2O3的理化特性;通过CCK 8法观察不同浓度的HA Gd2O3（0～200 mg/L）作用24 h后肝癌细胞的细胞活性;通过HE染色分析HA Gd2O3静注后小鼠各脏器病理学结构的变化;根据实验要求将细胞随机分为对照组、HA Gd2O3组、照射组、HA Gd2O3+照射组,通过CCK 8法、克隆形成实验检测HA Gd2O3的放疗增敏作用。结果： 成功构建HA Gd2O3;HA Gd2O3粒径约112 nm,物相结构无定形;0,25,50,100以及200 mg/L的HA Gd2O3对HepG 2细胞的增殖抑制率分别为0%,(0.640±0.024)%,（3.943±0.063）%,(4.871±0.062)%和（4.084±0.076）%,各浓度间抑制率差异无统计学意义（P<0.05）;静注HA Gd2O3后,小鼠各重要脏器组织形态未见明显变化;HA Gd2O3+照射组HepG 2细胞抑制率明显低于对照组、放射组、HA Gd2O3组（P<0.05）。结论： 利用透明质酸修饰成功构建HA Gd2O3纳米颗粒,其具有良好的水溶性、生物相容性,对HepG 2细胞具有显著放疗增敏作用。