黄芪多糖对LPS诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶表达及皮质酮分泌的影响

目的 研究黄芪多糖对脂多糖(LPS)诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶(CYP27B、CYP24A)及皮质酮表达的影响.方法 用LPS溶液建立H295R细胞损伤模型.MTT法检测不同浓度的黄芪多糖对H295R细胞增值率的影响.分组:对照组,模型组,模型+黄芪多糖低、中、高剂量组,模型+维生素D组.ELISA法检...     

淫羊藿苷对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及孕酮、孕烯醇酮分泌的影响

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B、CYP24A、CYP17A1、CYP21 mRNA表达。Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:淫羊藿苷10~(-8) mol/L浓度,维生素D在0.25×10~(-11) mol/L和0.5×10~(-11) mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。而淫羊藿苷10~(-4) mol/L,维生素D在2×10~(-11) mol/L和4×10~(-11) mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷10~(-5) mol/L、10~(-6) mol/L组的VDR、CYP27B mRNA与蛋白表达明显上调,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L、10~(-7) mol/L组的CYP24A mRNA与蛋白表达则明显下调,维生素D组与淫羊藿苷各剂量组孕酮、孕烯醇酮分泌水平均明显下降,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L组CYP17A1、CYP21 mRNA表达均明显上调。结论:淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞维生素D系统对孕酮、孕烯醇酮合成分泌产生影响。     

黄芪多糖对脓毒血症大鼠模型肾上腺皮质醇相关合成酶及维生素D轴的影响

目的 探讨黄芪多糖对脂多糖诱导的脓毒血症肾上腺损伤大鼠血清皮质醇、25(OH)D₃水平及肾上腺皮质维生素D受体(VDR)、类固醇急性调节蛋白(STAR)、21α-羟化酶(CYP21)、17α-羟化酶(CYP17A1)mRNA表达情况的影响。方法 将60只雄性SD大鼠适应性喂养7 d后,随机分为对照组、模型组、黄芪多糖高(200 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组及维生素D(3×10^-5 mg/kg)组。分别对每组大鼠以相应剂量进行为时7 d的灌胃给药,并在造模前15 min和后6 h腹腔注射给药,12 h后取样。ELISA法检测大鼠血清皮质醇和25(OH)D₃水平,HE染色法观察大鼠肾上腺皮质组织病理学改变,RT-PCR技术检测大鼠肾上腺皮质VDR、STAR、CYP21、CYP17A1mRNA的表达情况。结果 相较对照组,模型组血清皮质醇和25(OH)D₃水平显著下降(P<0.05),肾上腺组织皮质区出现较明显的炎症反应,VDR、STAR、CYP21、CYP1...     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的:探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞损伤模型存活率及维生素D受体mRNA表达的影响。方法:取正常生长的细胞,用80μmol·L~(-1)的异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导H9C2心肌细胞肥大的模型,并随机分为5组:正常组,模型组,模型组+黄芪甲苷(10μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(30μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(60μmol·L~(-1))组。运用MTT法检测心肌细胞的存活率,Real-Time PCR法检测各组H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA的表达量。结果:MTT法显示使用异丙肾上腺素会诱导H9C2心肌细胞损伤,而不同剂量的黄芪甲苷可提高心肌细胞的活性,且黄芪甲苷的浓度在30μmol·L~(-1)时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,不同剂量的黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的肥大H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量与模型组相比,其表达均明显上调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其通过维生素D轴调节VDR基因表达水平有关。     

黄芪多糖对小鼠树突状细胞前体的体内诱导研究

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)在体内是否具有诱导小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)分化和成熟作用,以阐释APS药理作用机制。方法分别设对照组及APS100、200mg/kg剂量组,腹腔注射,体内诱导小鼠髓源性DC前体和未成熟DC,称量脾重,ELISA检测血清中GM-CSF表达量,倒置显微镜观察细胞生长状态,电镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11c、MHC-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平。结果APS注射7d后,APS100、200mg/kg组小鼠脾脏重量均较对照组有明显增加(P<0.01),骨髓细胞体外分离并经rmGM-CSF、rmIL-4诱导培养后,流式细胞检测结果显示:APS100、200mg/kg组CD11c、MHC-Ⅱ类分子表达水平高于对照组(P<0.05),但CD80、CD86表达量较对照组无明显差异;血清中GM-CSF表达量,结果与对照组无明显差异。结论APS能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,并可能有促进DC成熟的作用,但此作用并非通过刺激机体GM-CSF细胞因子的分泌而发挥作用。     

黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞的作用

目的: 探讨黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞(Treg)免疫活性的影响。方法: 建立B16-F10荷瘤小鼠模型,C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、环磷酰胺(CTX)组、黄芪多糖低剂量组(0.15 g·kg^-1)、黄芪多糖高剂量组(0.3 g·kg^-1)。造模后第2天开始ig给药,给药14 d后处死各组小鼠,取肿瘤称重计算抑瘤率,取脾脏制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测小鼠脾脏中Treg的比例,通过实时定量PCR检测小鼠脾脏中转化生长因子-β (TGF-β)mRNA,白细胞介素-10(IL-10) mRNA的表达。结果: 黄芪多糖能够抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.05),降低脾脏中Treg的比例(P<0.01),降低脾脏中TGF-β mRNA, IL-10 mRNA(P<0.05)的表达。结论: 黄芪多糖可能通过降低荷瘤鼠脾脏中Treg数目,抑制TGF-β, IL-10分泌,从而实现其抑瘤作用。     

黄芪多糖对非小细胞肺癌患者免疫功能的影响

目的探讨黄芪多糖对非小细胞肺癌患者免疫功能的影响。方法 84例非小细胞肺癌患者,随机分为对照组和观察组各42例,对照组用三维适形放疗;观察组在对照组放疗基础上加用黄芪多糖注射液治疗。结果两组治疗前CD4、CD8和CD4/CD8相比较,无显著差异(P0.05),两组治疗后CD4、CD8和CD4/CD8相比较,观察组优于对照组(P0.05)。两组生活质量比较,观察组优于对照组(P0.05)。结论黄芪多糖可有效改善患者免疫功能,提高生活质量。     

黄芪多糖预处理对肾缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪多糖预处理对肾缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响及机制。方法:SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组和黄芪多糖干预组,每组各10只。黄芪多糖干预组在建模前,每天给予黄芪多糖450 mg/kg灌胃,连续用药10 d,1次/d;假手术组和模型组以相同方式灌胃等体积的生理盐水。模型组与黄芪多糖干预组建模,假手术组只分离不建模,48 h后肾动脉采血,立即处死大鼠并取肾脏组织。全自动生化分析仪测定血清中的尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡,免疫组化检测肾组织Bax和Bcl-2蛋白含量表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清BUN、Cr含量明显升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖干预组大鼠血清BUN和Cr含量明显下降(P<0.01)。与假手术组比较,模型组肾脏细胞凋亡指数明显升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖干预组大鼠肾脏细胞凋亡指数明显降低(P<0.01)。与假手术组比较,模型组肾脏Bax表达明显升高,Bcl-2表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖干预组大鼠肾脏Bax表达明显降低,Bcl-2表达明显升高(P<0.01)。结论:黄芪多糖预处理具有减轻肾脏细胞凋亡,改善肾功能的作用,其机制可能与下调Bax蛋白表达,以及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

黄芪多糖对胶原夹心培养大鼠Kupffer细胞功能的影响

目的:观察黄芪多糖(APS)对胶原夹心培养法(CSS)培养正常大鼠Kupffer细胞功能的影响.方法:分离正常大鼠Kupffer细胞,以CSS进行培养,加入终浓度为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25μg/mlAPS对Kupffer细胞进行诱导,分别作用1d和7d,以Kupffer细胞分泌NO、TNF-α量评价其免疫功能;以LDH漏出量评价APS对细胞的直接损害情况.结果:各浓度组APS诱导1d和7d均对LDH漏出量无影响.CSS培养7d,Kupffer细胞分泌NO、TNF-α量较培养1d明显增高(P<0.01);APS诱导1d,Kupffer细胞分泌NO、TNF-α量分别升高20.0～46.4%和3.2～4.1倍;APS诱导7d,Kupffer细胞对NO、TNF-α的过度分泌分别降低9.3～27.9%和17.3～61.8%.结论:在不引起细胞损伤的前提下,APS对Kupffer细胞功能具有一定调节作用.     

基于维生素D轴探讨黄芪多糖对脓毒症肾上腺皮质功能的保护机制

脓毒症(sepsis)是一种具有全身性的炎症反应综合征,常并发于严重创伤、烧伤、感染及大手术等多种应激情况,易诱发脓毒症休克及多器官功能障碍综合征(MODS)。肾上腺皮质功能不全是脓毒症的重要病理改变。另一方面,维生素D不仅与脓毒症密切相关,还对肾上腺皮质功能存在一定调控作用。此外,黄芪多糖可改善脓毒症。基于文献及前期研究表明黄芪具有调节维生素D轴的作用,黄芪多糖具有调节肾上腺皮质的功能,据此提出黄芪多糖可能通过作用于维生素D轴,调节肾上腺皮质功能,从而改善脓毒症。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠血管内皮细胞的影响

探讨黄芪多糖对糖尿病大鼠血管内皮细胞损伤的治疗作用及其机理。 3 0只SD大鼠随机分成正常对照组、四氧嘧啶糖尿病组与糖尿病黄芪多糖 (APS)治疗组 (黄芪多糖 4 0 0mg/kg/d-1腹腔注射 ) ,5周后 ,处死动物取血测血糖浓度 ,血清胰岛素 ,超氧化物歧化酶 (SOD) ,丙二醛 (MDA) ,内皮素 (ET) ,一氧化氮 (NO) ,并应用形态定量的方法比较各组的心肌病理检查结果。结果 ,腹腔注射四氧嘧啶 ( 2 0 0mg/kg)后的SD大鼠血糖浓度显著升高 ,血清NO ,MDA ,SOD ,ET及胰岛素水平明显改变。APS治疗 5周后 ,血糖浓度 ,MDA和ET较未治疗组显著下降 ;而NO ,胰岛素和SOD的含量显著升高。切片光镜下观察 ,糖尿病大鼠心肌毛细血管数量减少 ,基底膜增厚 ,微血管与心肌纤维的比率显著降低 ,这些改变都可被APS改善。黄芪多糖可降低糖尿病大鼠血糖水平 ,对早期糖尿病大鼠内皮细胞具有良好的保护作用 ,这可能与其减轻氧自由基的损伤 ,影响NO ,ET的产生以及促进胰岛B细胞损伤的恢复有关     

淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴及VDR蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,随机分为:正常组;模型组(生理盐水4.0 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷高剂量组(120 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷中剂量组(60 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷低剂量组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);维生素D组(30ng·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。造模1月后,药物干预2月,酶联免疫法(ELISA法)检测血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3。免疫组化检测VDR蛋白表达。Real-Time PCR法检测肾上腺皮质维生素D受体(VDR)、25-羟维生素D_3-24-羟基化酶(CYP24A1)、25-羟维生素D1α-羟化酶(CYP27B1)mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量下降(P0.05);淫羊藿苷干预后血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量均上升(P0.05)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组VDR蛋白表达下降(P0.05);经淫羊藿苷干预后,表达上升(P0.05)。Real-Time PCR显示,经淫羊藿苷干预后,表达量上调(P0.05),除VDRmRNA外,CYP24A1mRNA与CYP27B1mRNA变化趋势均与维生素D组表现一致。模型组基因表达均高于正常组(P0.05),Real-Time PCR检测结果与免疫组化检测的蛋白表达不完全一致。结论:淫羊藿苷可能调节维生素D轴促进VDR蛋白表达改善维生素D缺乏。     

黄芪多糖对核糖核酸酶及其抑制因子平衡系统的保护作用

核糖核酸酶(RNase)与它的抑制因子(RI)结合,以潜伏形式存在于机体,其活力反映 RI 的水平。潜伏的 RNase%依次为:肾>肝>肺>脾。黄芪多糖抑制游离的RNase 活力的程度是:肾<肝<肺<脾。此结果应用平衡反应的相对增加速度来解释;黄芪多糖的作用在低 RI 组织表现显著。而它对正常动物的血、肾 RNase 活力无抑制作用。汞剂中毒时,血、肾 RNase 活力显著升高;预先给于黄芪多糖,能对抗汞剂的作用,使机体的核糖核酸酶及其抑制因子平衡系统维持正常,具有保护机体的作用。     

黄芪多糖对C17.2神经干细胞定向分化的调控作用

目的:观察黄芪多糖(APS)对C17.2神经干细胞体外定向分化的调控作用。方法:建立C17.2神经干细胞的体外培养体系及分化模型,设置APS干预组及PBS对照组。诱导分化4 d后通过细胞免疫荧光染色的方法检测2组细胞中神经干细胞的标志性蛋白巢蛋白(Nestin)、星形胶质细胞的标志性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞的标志性蛋白髓鞘碱性蛋白(MBP)及神经元的标志性蛋白神经元特异性核心抗原(NeuN)的表达水平。结果:与PBS对照组比较,APS干预组细胞的Nestin及GFAP蛋白表达水平明显下调,MBP及NeuN蛋白表达水平明显上调差异有统计学意义(P 0.05)。APS下调了分化模型中的细胞Nestin蛋白的表达水平;APS下调了GFAP蛋白的表达水平,上调了MBP及NeuN蛋白的表达水平。结论:APS可抑制C17.2神经干细胞向星形胶质细胞的定向分化,促进向少突胶质细胞及神经元的定向分化,APS可抑制C17.2神经干细胞的干性维持,促进其进入分化状态,有可能成为治疗神经退行性疾病的潜在药物。     

黄芪对维生素D缺乏大鼠骨质的保护作用

目的：观察黄芪对维生素D 缺乏大鼠骨质的保护作用。方法：选用30只雄性SD大鼠,随机分为3组：对照组、模型组、黄芪组。实验周期8周。实验结束后,酶免法检测血清25羟维生素D3[25（OH）VD3]、成纤维生长因子-23[FGF-23]、Klotho,股骨HE 染色。结果：与正常对照组比较,维生素D 缺乏大鼠模型组血清25（OH）VD3、Klotho降低,FGF-23升高,存在骨质疏松。与模型组比较,黄芪组血清25（OH）VD3、FGF-23降低,Klotho升高;黄芪组骨质疏松明显改善。结论：黄芪具有调节维生素D 缺乏大鼠FGF-23、Klotho,保护骨质作用。     

黄芪注射液对H22荷瘤小鼠瘤组织Bax 及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究黄芪注射液对H22荷瘤小鼠瘤组织Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。方法:建立H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将50只荷瘤小鼠随机分为空白对照组(模型组)、环磷酰胺组(CTX组)、黄芪注射液(高、中、低剂量)组,连续ip给药10 d,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,绘制肿瘤生长曲线。10 d后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;采用流式细胞术测定药物作用后肿瘤细胞凋亡率;免疫组化方法检测肿瘤组织Bax及Bcl-2的蛋白表达。结果:小鼠移植瘤H22试验结果显示,在128,,4 g.kg-1的剂量下黄芪注射液的抑瘤率分别为52.36%,33.68%,17.28%。流式细胞术及免疫组化结果表明黄芪注射液各剂量组均可明显增加肿瘤细胞凋亡率;增强Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,且Bax/Bcl-2明显增高(P<0.05)。结论:黄芪注射液通过促进Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达来诱导H22肿瘤细胞凋亡,进而发挥抑瘤效应。     

黑木耳多糖对外周血单个核细胞增殖和细胞因子表达的影响

目的观察黑木耳多糖(APP)对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖和细胞因子表达的影响.方法采用水提、乙醇沉淀、DEAE-纤维素柱层析分离纯化APP,并作用于体外培养的PBMCs,以Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖;酶联免疫法(ELISA)测定PBMCs培养上清液中TNF-α和IFN-γ的浓度.结果从黑木耳中分离的3个多糖组分在100～800 μg/ml剂量范围内对PBMCs均有不同程度的促进增殖作用;其中组分AAP2能显著增加PBMCs细胞培养上清液中TNF-α和IFN-γ的浓度(P＜0.05或P＜0.01),并显示剂量依赖效应.结论APP具有免疫促进作用,并能通过细胞因子TNF-α和IFN-γ发挥免疫调节功能.     

归芪多糖对衰老细胞周期及p53、p16蛋白的影响

目的:研究归芪多糖对衰老的WI-38细胞的细胞周期及p53、p16蛋白表达的影响。方法:采用MTT法,研究不同浓度归芪多糖对WI-38细胞活力的影响,筛选出归芪多糖最佳作用浓度;采用流式细胞术分析细胞周期;Western blot法分析归芪多糖对p53、p16蛋白表达的影响。结果:0.016/mg·m L归芪多糖可明显促进细胞增殖;与衰老组细胞相比,归芪多糖可明显促进衰老细胞进入分裂期(P0.01),并可显著降低衰老模型组细胞p53和p16蛋白的表达。结论:归芪多糖可延缓WI-38细胞的衰老,其作用机制与调控细胞周期,抑制p53-p21和p16-pRb信号通路有关。