双氢青蒿素对急性肺损伤大鼠炎症机制的研究

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症的作用机制。方法 40只大鼠随机分为五组:大肠杆菌组(E-coli组)、空白对照组(Control组)、DHA 5 mg·kg~(-1)组、15 mg·kg~(-1)组、25 mg·kg~(-1)组(Low组、Medium组、High组);采用直视下气管内滴入大肠杆菌(0.5 mL 3×10~8 cfu/mL)诱导ALI模型,大鼠造模后24 h;(1)行ALI炎症评估:右肺中叶HE染色观察肺组织病理、行病理评分(Smith评分);右肺下叶肺湿/干质量比(W/D);收集血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)行Elisa检测血管内皮生长因子(VEGF)。(2)行巨噬细胞极化检测:收集支气管肺泡灌洗液巨噬细胞行M2表型精氨酸酶1(Arg1)、白介素1受体拮抗剂(IL-1ra);M1表型诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素1β(IL-1β)mRNA PCR检测.收集血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)行Elisa检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素10(IL-10)。结果 E-coli成功诱导ALI,DHA治疗后可明显降低simth评分和W/D比,血清及灌洗液中VEGF的表达减弱,呈剂量依赖性。大肠杆菌ALI模型中存在着巨噬细胞的极化,以M1为主:血清及灌洗液中TNF-α表达增强,IL-10表达减弱,PCR以iNOS、IL-1βmRNA表达为主;DHA治疗后巨噬细胞极化以M2为主:血清及灌洗液中IL-10的表达增强,TNF-α的表达减弱,PCR检到肺泡巨噬细胞表型以Arg1、IL-1ra mRNA的表达占优势。结论 DHA可减轻ALI病理损伤及炎症因子的表达,其机制可能与巨噬细胞的极化有关。     

M2型巨噬细胞来源外泌体对食管癌细胞生长行为及人脐静脉血管内皮细胞血管生成的影响

目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(Exo)对食管癌细胞生长及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响。方法 采用佛波酯(PMA)和白细胞介素(IL)-4将人单核细胞系THP1细胞诱导为M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨噬细胞相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、重组人精氨酸酶(Arg)1、转化生长因子(TGF)-β及CD206的表达变化;超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的Exo,透射电镜观察形态,粒径分析仪检测粒径分布,Western印迹法检测Exo标志蛋白表达;利用PKH67标记Exo后再与食管癌细胞株EC9706共培养,细胞免疫荧光染色检测Exo被EC9706细胞摄取情况;将分离的Exo与EC9706细胞共培养,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,细胞成管实验检测HUVEC血管生成情况。结果 经PMA和IL-4诱导后的细胞内M1型巨噬细胞相关基因TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达水平显著下调(P<0.05),M2型巨噬细胞相关基因Arg1、T...     

红景天苷促进小鼠脊髓损伤后巨噬细胞表型转变及神经功能修复

目的探讨红景天苷对小鼠脊髓损伤后损伤局部炎性反应的影响及促进神经功能恢复的作用机制。方法构建C57BL/6小鼠T10节段脊髓损伤模型。随机分为对照组和红景天苷组。术后3 d、7 d和14 d,采用免疫荧光双标法及实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)观察巨噬细胞促炎(M1)和抑炎(M2)表型细胞表达并计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测损伤局部组织炎症因子的表达。采用神经功能评分(BNS)评估小鼠神经功能恢复情况。结果与对照组相比,红景天苷组M1表型细胞(iNOS/CD11b/CD86)表达降低(P0.05),M2表型细胞(Arg1/CD11b/YM-1)表达增加(P0.05);红景天苷组能下调促炎因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β]表达(P0.05),促进抑炎因子IL-10表达(P0.05),还能促进脊髓损伤后神经功能恢复(P0.01)。结论红景天苷能促进小鼠脊髓损伤后巨噬细胞由M1向M2表型转变,抑制炎症因子表达。红景天苷可能通过参与巨噬细胞极性发挥神经保护作用。     

Ac2-26对急性心力衰竭大鼠血流动力学与心肌线粒体损伤的影响及作用机制

目的 探究膜联蛋白(ANX)A1拟肽Ac2-26对急性心力衰竭(HF)模型大鼠血流动力学与心肌线粒体损伤的影响及作用机制。方法 实验分为对照组、模型组和Ac2-26组,每组15只,模型组和Ac2-26组制备急性HF模型,且Ac2-26组静脉输注Ac2-26,对照组和模型组静脉输注等容积生理盐水,1次/d,连续14 d;彩色多普勒超声仪检测各组血流动力学指标,苏木素-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理学损伤,TUNEL染色检测各组心肌细胞凋亡,透射电子显微镜观察各组心肌线粒体结构,线粒体分离试剂盒分离各组心肌组织线粒体,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,免疫组织化学染色检测各组心肌组织巨噬细胞标志物CD68、M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与M2型巨噬细胞标志物CD206表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组心肌组织内肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、转化生长因子(TGF)-β、IL-10及重组人精氨酸酶(Arg)-1 mRNA相对表达量,Western印迹检测各组心肌组织IL-10、Arg-1、CD206的蛋白表达水平。结果 与模...     

从RORα调控的小胶质细胞M1/M2表型转换的角度探讨脑梗死发生的分子生物学机制

目的研究维甲酸相关孤核受体α(RORα)调控小胶质细胞M1/M2表型转换在脑梗死发病中的作用机制。方法①定向诱导原代小胶质细胞向M1/M2型转化,Western blot检测细胞内RORα及M1标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2标记物精氨酸酶1(Arg-1)的表达。②建立大脑中动脉栓塞(MCAO)小鼠模型,Western blot检测各个时间点(6 h、24 h、3天和7天)脑组织中iNOS、Arg-1、RORα的表达。③小鼠侧脑室注射RORα-siRNA,72 h后构建MCAO模型,缺血再灌注后3天,神经行为学评分(Longa评分)对脑功能进行评估,取脑组织,Western blot检测脑组织中iNOS、Arg-1、RORα的表达。④侧脑室注射RORα过表达慢病毒,于7天后构建MCAO模型,缺血再灌注后3天,神经行为学评分(Longa评分)评估小鼠脑功能。结果脂多糖/γ干扰素(LPS/IFN-γ)可诱导小胶质细胞向M1型转化,白细胞介素4/白细胞介素13(IL-4/IL-13)可诱导小胶质细胞向M2型转化,与对照组比较,RORα在M2型小胶质细胞中表达显著升高,在M1型小胶质细胞表达显著降低(P0.01)。脑缺血再灌注后,与假手术组比较,iNOS在6 h明显升高并达到高峰,随后表达逐渐下降,Arg-1在3天、7天逐渐升高,RORα在脑缺血再灌注后3天达到最高,7天时明显降低,说明脑缺血损伤后早期以M1型小胶质细胞为主,脑缺血损伤晚期以M2型小胶质细胞为主,RORα在脑缺血损伤中期即M1/M2型小胶质细胞共存期呈现高表达。下调RORα表达后,MCAO小鼠神经行为学评分显著升高,脑功能损伤较为严重。下调RORα后,Arg-1、RORα蛋白表达量显著下降,而iNOS蛋白表达明显增加;上调RORα表达后MCAO小鼠神经行为学评分明显下降,脑功能损伤得到改善;过表达RORα后,Arg-1的表达量显著升高,而iNOS的表达明显较少。结论 RORα可通过调控小胶质细胞由M2型向M1转化参与脑梗死后脑损伤机制。     

硫化氢调节巨噬细胞分化对低氧诱导肺动脉高压的肺血管重构的影响

目的:探究硫化氢(H_2S)在低氧诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠中的作用。方法:将45只健康SD大鼠随机分为三组:对照组、模型组、治疗组。模型组和治疗组在氧浓度为(10±0.5)%的环境下每日处理8 h,连续处理4周,对照组在常氧环境下饲养;治疗组在处理结束后通过腹腔注射50μmol/kg NaHS溶液,每日一次,连续处理4周。实验结束后,测量各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室收缩压(RVSP)以及右心室肥厚指数[RV/(LV+S)],苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态学变化,免疫荧光染色检测组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,免疫组织化学染色检测组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,实时荧光定量PCR检测组织中M1型巨噬细胞标志物TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、iNOS与M2型巨噬细胞标志物甘露糖受体C2(Mrc2)、巨噬细胞半乳糖N-酰基半乳糖胺特异性凝集素1(Mgl1)、精氨酸酶-1(Arg1)的mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠mPAP、RVSP显著增高(P0.05),RV/(LV+S)显著增加(P0.05),组织有明显炎症细胞浸润,肺动脉管壁厚度显著增高(P0.05),α-SMA和iNOS表达显著增加(P0.05),TNF-α、IL-6、iNOS的mRNA表达水平显著升高(P0.05),而Mrc2、Mgl1、Arg1的mRNA表达水平显著下降(P0.05);与模型组比较,治疗组大鼠mPAP、RVSP显著降低(P0.05),RV/(LV+S)显著下降(P0.05),炎症细胞浸润减少,肺动脉管壁增厚显著减轻(P0.05),α-SMA和iNOS表达显著下降(P0.05),同时,TNF-α、IL-6、iNOS的mRNA表达水平显著下降(P0.05),Mrc2、Mgl1、Arg1的mRNA表达水平显著升高(P0.05)。结论:硫化氢可能通过促进巨噬细胞向Ⅱ型巨噬细胞分化,进而减轻肺动脉高压大鼠的肺动脉血管重构。     

同种异体骨髓间充质干细胞对急性坏死性胰腺炎大鼠腹腔巨噬细胞极化的影响

目的 探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对ANP大鼠炎症反应及腹腔巨噬细胞极化状态的影响。方法 将30只Sprague Dawley雄性大鼠分为对照组,ANP组,低(0.5×10^6个细胞)、中(1×10^6个细胞)、高剂量(2×10^6个细胞)BMSCs治疗组。采用胰胆管逆行注入5%牛黄胆酸钠1 ml/kg的方法制备ANP模型。BMSCs在制膜后1 h内经大鼠尾静脉注入。取大鼠胰腺组织行病理检查,免疫组织化学法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)蛋白表达阳性的巨噬细胞。取外周血检测淀粉酶、TNF-α、IL-1β和髓过氧化物酶(MPO)水平。通过腹腔灌洗从灌洗液中获取巨噬细胞,应用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞TNF-α、iNOS mRNA表达,流式细胞技术检测M1(F4/80+CCR2+)型和M2(F4/80+CD163+)型巨噬细胞表达的动态变化。结果 各治疗组大鼠胰腺组织病理损伤较ANP组明显减轻。ANP组大鼠胰腺组织内出现较多的iNOS、Arg1阳性巨噬细胞,而对照组及各治疗组无或仅有少量阳性细胞。3个治疗组中,中剂量BMSCs治疗组的治疗效果显著高于其他2组,差异有统计学意义(P值均<0.05)。与ANP组大鼠比较,除血淀粉酶外,中剂量治疗组血TNF-α[(99.5±11.8)ng/L比(185.5±27.5)ng/L]、IL-1β[(24.1±3.7)ng/L比(128.5±66.1)ng/L]、MPO[(643.8±98.4)ng/L比(2131.9±261.4)ng/L]水平,腹腔巨噬细胞TNF-α(2.16±0.98比6.53±3.45)、iNOS(2.32±1.88比7.37±2.98)mRNA表达量,巨噬细胞M1型与M2型比值(1.53±0.10比2.02±0.31)均显著下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。ANP组和3个治疗组的上述所有指标均显著高于对照组,差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论 静脉注射同种异体BMSCs可抑制腹腔巨噬细胞向M1型极化,降低腹腔巨噬细胞M1型与M2型比值,减轻ANP大鼠的炎症反应。     

姜黄素通过影响巨噬细胞的极性延缓动脉粥样硬化进展

目的研究姜黄素对ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化进展及斑块中巨噬细胞极性的影响。方法用高脂高胆固醇饮食饲养ApoE~(-/-)小鼠建立动脉粥样硬化模型,设立姜黄素治疗组、阿托伐他汀治疗组和高脂组;通过免疫组织化学(HE染色、油红O染色、Masson染色、苏木精染色)及免疫荧光染色检测主动脉斑块形态及不同亚型巨噬细胞的含量。通过实时荧光定量PCR检测主动脉组织中炎症因子的表达。结果姜黄素干预能减轻ApoE~(-/-)小鼠主动脉粥样硬化病变,并降低动脉粥样硬化斑块的易损指数。姜黄素降低动脉粥样硬化斑块内M1/M2巨噬细胞的比值,减少M1型巨噬细胞分泌的促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,促进M2型细胞因子IL-10、Ym1和Fizz1的表达。结论姜黄素可通过影响斑块中巨噬细胞的极性、抑制相关的炎症反应,从而延缓ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的进展。     

巨噬细胞极化在白藜芦醇抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨巨噬细胞极化在白藜芦醇(Res)抗肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I/R组)、Res后处理组(Res组),每组8只。建立急性HIRI模型,于再灌注6 h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10、转化生长因子(TGF)-β的浓度,采用Real-time PCR法检测肝脏组织TNF-α及IL-10 mRNA的表达情况,采用流式细胞术分析肝脏M1、M2型巨噬细胞分布情况。结果 Res后处理可以降低肝脏功能学指标ALT、AST、AKP的血清浓度;与I/R组比较,Res组IL-10和TGF-β含量升高,而IL-6和TNF-α含量降低,同时IL-10 mRNA表达量升高而TNF-α表达量下降;流式细胞分析结果显示Res后处理可以降低M1型巨噬细胞的比例,使巨噬细胞向M2型转化。结论 Res对HIRI的保护是通过调节巨噬细胞极化发挥作用的。     

TIPE2通过TLR4/IκBα/NF-κB通路调节脂肪组织巨噬细胞表型转化

目的探讨肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子-2(TIPE2)对脂多糖或白细胞介素4(IL-4)诱导的脂肪组织巨噬细胞(ATM)表型转化的作用和分子机制。方法应用免疫组化、Western印迹法和实时定量PCR(RT-qPCR)检测肥胖小鼠和TIPE2敲除小鼠(KO)及其各自对照小鼠内脏脂肪组织中TIPE2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、CD206和精氨酸酶1(Arg-1)的表达水平。分离培养TIPE2敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(WT)的腹腔巨噬细胞及RAW 264.7小鼠巨噬细胞系, 给予脂多糖(100 ng/mL)或IL-4(20 ng/mL)刺激6 h, Western印迹法和RT-qPCR检测TIPE2、iNOS、MCP-1、CD206和Arg-1的表达水平。结果在肥胖小鼠中, TIPE2表达下调, 促炎因子iNOS和MCP-1表达升高, 抑炎因子CD206和Arg-1表达降低。脂多糖降低RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞TIPE2的表达, 诱导经典活化的巨噬细胞(M1表型)标志物iNOS和MCP-1表达升高, 降低替代活化的巨噬细胞(M2...     

电针预处理对大鼠脑缺血再灌注后小胶质细胞极化的影响

目的 探讨电针预处理对大鼠脑缺血再灌注(IR)后小胶质细胞极化的影响以及与酪氨酸激酶2(JAK2)/信号传导及转录活化因子3(STAT3)通路的关系。方法 选择健康清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、IR组和电针组,每组15只。IR组采用线栓法建立大鼠IR损伤模型,电针组造模前连续5 d行电针刺激百会穴,假手术组仅暴露颈部血管。再灌注后24 h,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)观察各组大鼠神经功能损伤程度,氯化三苯四氮唑染色观察脑梗死体积,Western blot检测经典激活型(M1)标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和替代激活型(M2)标志物精氨酸酶1(Arg-1)、磷酸化JAK2、JAK2、磷酸化STAT3及STAT3蛋白表达,定量聚合酶链反应检测M1标志物iNOS mRNA和M2标志物Arg-1 mRNA表达,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)表达。结果 与假手术组比较,IR组和电针组mNSS、脑梗死体积、磷酸化JAK2/JAK2、磷酸化STAT3/STAT3、iNOS蛋白、iNOS mRNA、Arg-1蛋白、Arg-1 mRNA、TNF...     

异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

不同种类脂肪酸对巨噬细胞M1/M2极化的影响

背景:巨噬细胞表型和功能改变在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生、发展中具有重要作用。近年研究发现不同种类脂肪酸在NAFLD中发挥不同作用。目的:探讨不同种类脂肪酸对巨噬细胞M1/M2极化的影响及其可能机制。方法:分别以脂多糖(LPS)、白细胞介素-4(IL-4)、饱和脂肪酸[棕榈酸(PA)]、多不饱和脂肪酸[二十二碳六烯酸(DHA)]、LPS/IL-4联合PA/DHA处理小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞株,同时设立阴性对照组。采用real-time PCR检测M1型巨噬细胞极化基因[诱生型一氧化氮合酶2(i NOS2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和M2型巨噬细胞极化基因[精氨酸酶1(ARG1)、甘露糖受体C2(MRC2)]表达;采用蛋白质印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和磷酸化核因子-κBp65(p NF-κBp65)表达。结果:与阴性对照组比较,LPS组i NOS2、TNF-α表达显著升高(P<0.01;P<0.05),IL-4组ARG1、MRC2表达显著升高(P<0.01;P<0.05),PA组i NOS2、TNF-α、ARG1表达显著升高(P<0.05;P<0.01;P<0.05),DHA组i NOS2表达显著降低(P<0.01)。LPS+PA组和IL-4+PA组可进一步影响TNF-α、ARG1表达,但与LPS组、IL-4组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与LPS组比较,LPS+DHA组i NOS2、TNF-α表达显著降低(P<0.05;P<0.05);与IL-4组比较,IL-4+DHA组ARG1表达显著降低(P<0.01)。与阴性对照组比较,PA组、DHA组PPARγ蛋白表达水平显著升高,PA组p NF-κBp65蛋白表达水平显著升高。结论:饱和脂肪酸能诱导巨噬细胞M1/M2混合型极化,而多不饱和脂肪酸则抑制巨噬细胞M1型极化。不同种类脂肪酸可能通过PPARγ/NF-κB相关信号通路参与巨噬细胞M1/M2极化的转化。     

蛇床子素对病毒性心肌炎小鼠炎症反应的抑制作用研究

目的 探究蛇床子素对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎(VMC)小鼠炎症反应的抑制作用。方法 选择SPF级雄性BALB/c小鼠30只,随机分为蛇床子素治疗组(观察组)、模型组及对照组,各10只。向观察组、模型组小鼠腹腔注射CVB3病毒稀释液0.2 mL构建VMC动物模型。观察组小鼠给予50 mg·kg^-1·d^-1蛇床子素腹腔注射治疗。7 d后处死所有小鼠,留取血清和心脏标本。采用荧光定量PCR法检测心肌组织内CVB3相对表达量以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达水平。采用酶联免疫吸附测定法检测血清中炎症因子TNF-α和IL-1β水平。采用Western blot法检测心肌组织内TNF-α和IL-1β蛋白表达水平以及蛋白激酶B(Akt)和核因子-κB(NF-κB)蛋白磷酸化水平。结果 模型组小鼠心肌组织内CVB3 m RNA相对表达量、IL-1β和TNF-α m RNA表达水平高于对照组,观察组上述指标低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠血清中的IL-1β、TNF...     

葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。     

葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。     

CD137信号调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生

目的探讨CD137-CD137L信号(简称CD137信号)是否通过调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生。方法将3%巯基乙酸盐肉汤诱导的小鼠腹腔原代巨噬细胞分3组,即对照组、CD137信号激动组和CD137信号抑制组,通过检测M1和M2型巨噬细胞的相关特异性标志物观察巨噬细胞表型的变化,采用流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞表面CD137、CD86及CD206的表达,Western blot和RT-PCR检测巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、Ⅰ型精氨酸酶(Arg-1)的蛋白和mRNA表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测巨噬细胞培养上清中白细胞介素(IL)-12和IL-10分泌水平。将巨噬细胞和内皮细胞(bEnd.3)共培养,上室种植巨噬细胞,下室基质胶种植内皮细胞,实验分为3组,即对照组、CD137信号激动组和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)抑制组,检测各组内皮细胞的管腔形成能力。结果 (1)分离的小鼠腹腔原代巨噬细胞纯度为(97.93±1.31)%,巨噬细胞表面CD137表达为(97.40±2.70)%。(2)与对照组比较,CD137信号激动组Arg-1 ...     

血管紧张素（1-7）对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响及机制研究

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对DM大鼠IR的影响及可能机制。方法随机选取Wistar大鼠10只为正常对照组(NC),另取24只予高脂饮食喂养联合STZ注射构建DM模型,造模成功的20只大鼠随机分为糖尿病组(DM)、Ang-(1-7)组[Ang-(1-7)300μg/(kg.d)皮下注射],每组各10只。干预8周后检测FPG、FIns及血管紧张素II(Ang II)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及敏感指数(HOMA-ISI),观察肝脏病理改变,检测肝脏炎症通路及Ins信号转导通路相关因子的mRNA及蛋白表达。结果与NC组比较,DM、Ang-(1-7)组体重、FIns、HOMA-ISI、IRS-2 mRNA、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)mRNA和蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(Akt-2)mRNA和蛋白表达降低(P0.05),FPG、Ang II、HOMA-IR、肝脏指数、IκB激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、糖原合成酶激酶3α(GSK-3α)mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与DM组比较,Ang-(1-7)组FPG、Ang II、HOMA-IR、肝脏指数、IKKβmRNA和蛋白、NF-κB mRNA和蛋白、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、GSK-3αmRNA和蛋白表达降低,FIns、HOMA-ISI、IRS-2 mRNA、PI3K m RNA和蛋白、Akt-2 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。结论 Ang-(1-7)可能通过抑制肝脏IKKβ/NF-κB炎症通路及上调IRS-2/PI3K/Akt-2胰岛素信号通路,改善IR。     

糖蛋白M6B对RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的 研究糖蛋白M6B（glycoprotein M6B,GPM6B）对巨噬细胞炎症因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和IL-6的影响。 方法 ①Western blot和qPCR检测RAW264.7经典激活的巨噬细胞（classically activated macrophage, M1）和替代激活的巨噬细胞（alternatively activated macrophage, M2）中GPM6B表达量变化。②分别用对照组（sh-Scramble）和GPM6B干涉组（sh-GPM6B1和sh-GPM6B2）的慢病毒感染RAW264.7巨噬细胞系,荧光显微镜下观察病毒的感染效率。Western blot和qPCR检测GPM6B的干涉效率。③qPCR检测对照组和GPM6B干涉组促炎因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平,ELISA法检测上清中IL-1β和IL-6的含量。④Western blot检测干涉GPM6B后炎症相关分子p65和Iκα的磷酸化水平变化。 结果 ①相比于对照组,RAW264.7巨噬细胞M1型中GPM6B蛋白和mRNA水平均显著升高（P<0.05）,而M2型中GPM6B蛋白和mRNA水平均显著降低（P<0.05）。②与sh-Scramble组相比,sh-GPM6B1组和sh-GPM6B2组GPM6B蛋白和mRNA水平均显著降低（P<0.05）。③干涉GPM6B后促炎因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平和上清中IL-1β和IL-6均显著降低（P<0.05）。④干涉GPM6B后炎症相关分子p65和Iκα的磷酸化水平降低。 结论 干涉GPM6B可抑制RAW264.7巨噬细胞促炎因子的表达。     

蛋白激酶SGK-1在高血压性心脏纤维化中的表达及影响

目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(SGK1)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensionⅡ,AngⅡ)所诱导高血压性心脏纤维化中的表达及作用。方法:40只雄性C57BL/6小鼠随机分为0.9%氯化钠组和AngⅡ组,每组20只。采用植入式胶囊渗透压泵对小鼠分别灌注0.9%氯化钠和AngⅡ,于第7天时采用鼠尾套法检测小鼠尾动脉血压处死并取其心脏进行组织切片,行HE染色观察心脏组织炎症细胞浸润、Masson染色观察胶原沉积、免疫组织化学染色检测巨噬细胞(Mac-2)及炎症细胞因子[诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素1β(IL-1β)、精氨酸酶1(Arg1)]和促纤维化的因子[转化生长因子β(TGF-β)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的表达;Real-time PCR检测SGK1 mRNA表达;Westernblot检测SGK1蛋白水平的表达和活化。结果:与0.9%氯化钠组相比,AngⅡ组灌注7 d时血压显著升高(P<0.01);巨噬细胞Mac2浸润增加、胶原沉积增多、促炎因子(iNOS、IL-1β、Arg1)及促纤维化因子(TGF-β、α-SMA)的表达水平均显著升高(均为P<0.05);Real-time PCR结果显示AngⅡ灌注明显上调SGK1 mRNA表达(P<0.05);Western blot结果显示AngⅡ灌注增加SGK1磷酸化水平(P<0.05)。结论:在高血压性心脏纤维化疾病进程中,炎症反应增加并且SGK1表达明显上调及活性增强,提示SGK1可能是高血压导致心脏纤维化的关键信号分子,并且SGK1可能通过调节炎症反应促进心脏纤维化的进展。