苏格木勒-3汤水提物治疗失眠的药效学研究

目的:观察苏格木勒-3汤各成分水提物对小鼠的镇静催眠作用。方法 :通过观察小鼠自主活动、催眠剂量戊巴比妥钠睡眠时间,考察苏格木勒-3汤各成分水提物对小鼠的镇静催眠作用。结果 :苏格木勒-3汤水提物各剂量组均可显著降低小鼠活动时间、站立次数。与空白组比较,苏格木勒-3汤水提物高、低剂量组,白豆蔻水提物低剂量组,香旱芹水提物高剂量组,白豆蔻-香旱芹水提物高剂量组,白豆蔻-荜茇水提物高剂量组,香旱芹-荜茇水提物高和低剂量组,阳性对照组小鼠入睡潜伏时间显著缩短,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,苏格木勒-3汤水提物高剂量组、白豆蔻水提物低剂量组、白豆蔻-香旱芹水提物高剂量组小鼠睡眠持续时间延长,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:苏格木勒-3汤单药、药对以及复方水提物均可显著降低小鼠活动时间、站立次数。苏格木勒-3汤单药、药对以及复方水提物可缩短入睡潜伏时间,而只有复方及白豆蔻、白豆蔻-香旱芹水提物可延长睡眠持续时间。     

蒙药苏格木勒-3汤通过调节TLR4/NF-κB通路治疗心力衰竭相关实验研究

目的:探讨蒙药苏格木勒-3汤对心力衰竭大鼠炎症的影响,揭示苏格木勒-3汤治疗心力衰竭的作用机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、苏格木勒-3汤治疗组(1周)、苏格木勒-3汤治疗组(2周)、苏格木勒-3汤治疗组(3周),每组10只。模型组和苏格木勒-3汤治疗组大鼠皮下注射ISO(10mg/kg/d,连续7d)建立心力衰竭模型,造模成功后,苏格木勒-3汤治疗组灌胃给予2g/kg的苏格木勒-3汤,2次/d。灌胃给药后1周、2周、3周后,大鼠处死后,HE染色检测心脏病理损伤;ELISA检测炎症因子TNF-α的浓度;Western blotting法检测心肌中TLR4、p-P65、p-IκBα的表达。结果:苏格木勒-3汤能有效改善心肌损伤,减少炎性细胞浸润,降低大鼠血清TNF-α浓度。同时苏格木勒-3汤能明显抑制心衰大鼠心脏组织TLR4、p-P65、p-IκBα的表达,在一定时间范围内呈时间依赖性。结论:蒙药苏格木勒-3汤可有效缓解ISO诱导的心力衰竭,其机制可能与苏格木勒-3汤抑制ISO诱导的炎症有关。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

黄芪及丹参对肥大心肌细胞肌浆网钙转运干预作用研究

目的:研究黄芪注射液、丹参注射液对体外培养肥大心肌细胞钙瞬变的影响及其作用机制。方法:实验对象分为5组:对照组、模型组、黄芪组、丹参组、联合用药组,给予相应药物后于24、48、72h,用激光共聚焦显微镜测钙瞬变波荧光强度峰值及半高宽度。采用RT-PCR法及Western blot法测定钙离子转运关键蛋白肌浆网钙泵(SERCA2a)及受磷蛋白(PLB)mRNA转录水平及其蛋白表达。结果:各时点模型组钙瞬变荧光强度净变化降低,半高宽度增加,SERCA2a mRNA及蛋白含量减低,PLB mRNA含量降低,蛋白含量增加。黄芪注射液、丹参注射液及其联合应用可于不同时间点,不同程度改善钙瞬变荧光强度净变化、半高宽度、SERCA2a mRNA及蛋白含量。结论:黄芪注射液,丹参注射液可以改善肥大心肌细胞钙瞬变功能,其机制可能与改善SERCA2a及PLB基因及蛋白含量有关。     

大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤的干预作用

目的建立缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,观察心肌细胞肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤对H9c2细胞缺氧/复氧损伤钙超载的影响。方法 JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,RT-PCR荧光相对定量检测大鼠心肌肌浆网Ca转运ATP酶(SERCA2a)、L型钙通道(CAV1.3)、兰尼碱受体(RyR1,RyR2)、受磷蛋白(PLB)、肌集钙蛋白(CASQ)的mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组细胞早期凋亡显著增加(P0.05),细胞内钙离子浓度增加明显(P0.05),CAV1.3mRNA表达水平显著升高(P0.05),RyR1和CASQmRNA表达明显降低(P0.05)。SERCA2a和PLB mRNA表达水平亦降低但差异无统计学意义。当归补血汤干预后,与模型组比较,能够显著降低复氧损伤细胞的早期凋亡率(P0.05),细胞内钙离子浓度降低,差异具有统计学意义(P0.05)。SERCA2a和CASQ mRNA水平显著增加(P0.05),PLB和RyR1 mRNA虽有不同程度的增加,CAV1.3mRNA水平降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后出现明显的钙超载及肌浆网钙调节蛋白调节紊乱现象,当归补血汤能够通过升高肌浆网钙调节蛋白SERCA2a和CASQ mRNA的表达,减轻复氧后钙超载,降低复氧损伤H9c2心肌细胞早期凋亡率。     

蒙成药苏格木勒-3味汤对术前甲亢病人基础代谢率影响的临床观察

目的:比较术前甲亢病人复方碘溶液加用蒙成药苏格木勒-3味汤和单用复方碘溶液对基础代谢率的影响。方法:将50例甲亢患者随机分成治疗组和对照组,用复方碘溶液3滴起始递增法每日3次口服的同时,给治疗组加用蒙成药苏格木勒-3味汤5g,加牛奶250ml熬开后,早、晚饭前服用清汤,每天计算两组的基础代谢率(BMR)。结果:治疗组的基础代谢率下降速度明显快于对照组(P<0.05)。结论:治疗组的甲亢病人,用复方碘溶液的同时加用蒙成药苏格木勒-3味汤,其基础代谢率下降速度明显快于单纯服用复方碘溶液的对照组。     

消癥汤对膀胱肿瘤T24细胞凋亡及相关蛋白Slit2、Bim、Bad的影响

目的探讨消癥汤抑制膀胱肿瘤复发的可能作用机制。方法取对数生长期膀胱肿瘤T24细胞,调整浓度为1×10~4个/ml,每孔200μl接种于96孔板中,常规培养24 h后每孔加入200μl含有不同浓度消癥汤(药物终浓度分别为5、10、20、40、80、160、320、640、1280μg/ml)的完全培养基,每种浓度设5个平行孔,干预24 h后测定消癥汤对T24细胞增殖抑制作用,并计算消癥汤半数抑制浓度(IC_(50))。根据结果取低、中、高剂量的消癥汤培养T24细胞24 h,并设0μg/ml消癥汤做对照,检测消癥汤对T24细胞凋亡的影响,并测定低、中、高剂量组Slit2、Bim、Bad蛋白及基因表达。结果消癥汤对T24细胞的IC50为127.14μg/ml,中剂量取120μg/ml,低剂量取60μg/ml,高剂量取240μg/ml。对照组T24细胞凋亡细胞百分比为(4.41±0.50)%,低剂量组为(4.47±0.13)%,中剂量组为(11.04±1.32)%,高剂量组为(12.08±0.55)%。与对照组比较,中剂量组和高剂量组凋亡细胞百分比明显升高(P0.05或P0.01)。与低剂量组比较,中、高剂量组能够增加与凋亡相关的Slit2、Bim、Bad蛋白及基因表达(P0.05)。结论消癥汤能抑制膀胱肿瘤T24细胞的增殖,可能与增加凋亡相关蛋白Slit2、Bim、Bad的表达有关。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导HL-1心肌细胞活性及维生素D受体mRNA相对表达量的影响。方法用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)10μmol·L~(-1)诱导HL-1心肌细胞损伤的模型,随机分为5组:正常组,模型组,模型组+黄芪甲苷(3μmol·L~(-1))(即黄芪甲苷低剂量组),模型组+黄芪甲苷(10μmol·L~(-1))(即黄芪甲苷中剂量组),模型组+黄芪甲苷(30μmol·L~(-1))(即黄芪甲苷高剂量组)。运用MTT法检测心肌细胞的存活率。RT-PCR检测维生素D受体mRNA的相对表达量。结果 ISO处理HL-1心肌细胞,不同浓度的黄芪甲苷可提高心肌细胞的活性,且黄芪甲苷的浓度在30μmol·L~(-1)时,保护作用最好。RT-PCR检测结果显示,不同剂量的黄芪甲苷VDR基因相对表达量与模型组相比,其表达明显下调(P0.05)。结论黄芪甲苷对HL-1心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能通过维生素D轴调节VDR基因表达水平有关。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量的影响。方法以2×10~4·ml~(-1)密度接种细胞,用异丙肾上腺素诱导小鼠HL-1心肌细胞损伤,实验分为正常组、模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、维生素D组。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率。RealTime PCR法检测各组HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结果 MTT法显示不同剂量的淫羊藿苷均可提高小鼠肥大HL-1心肌细胞的存活率,且淫羊藿苷的浓度在10μmol·L-1时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,与模型组比较,不同剂量的淫羊藿苷均可明显下调(P0.05)异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结论淫羊藿苷对小鼠肥大HL-1心肌细胞具有保护作用,其机制可能通过维生素D轴调节VDR mRNA表达水平有关。     

高效液相色谱法测定蒙药苏格木勒-14中栀子苷的含量

目的：建立苏格木勒-14含量测定。方法：采用反相高效液相色谱法测定含量：C18（250mm×4．6mm．5μm）g，甲醇-水（35：65）为流动相，检测波长为238nm，流速为0．5ml·min^-1。结果：栀子苷分离完全，平均加样回收率为101．48％，RSD为1．12％（n=9）。结论：本方法准确、重现性好，可作为苏格木勒-14的含量控制方法。     

温化胶囊对人早幼粒白血病细胞株HL-60增殖的影响研究

目的:探讨温化胶囊对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响.方法:取对数生长HL-60期细胞以12孔板每孔接种0.5×10 4/m1个细胞,接种24h后加药培养,分设温化胶囊高、中、低剂量组与PBS阴性对照组.分别于加药后30min、1～6d收集细胞,台盼蓝染色,分别计数活细胞与死细胞,作生长曲线、细胞存活率与抑癌率计算.结果:温化胶囊高、中、低剂量组均显著抑制HL-60细胞的生长,抑癌率最高达70.8%,IC 50<10μg/ml,对HL-60细胞有显著的细胞毒作用.结论:温化胶囊体外能抑制人早幼粒白血病细胞的存活与增殖.     

抗纤益心方通过调控SERCA2a蛋白抑制扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的:观察抗纤益心方对扩张型心肌病(DCM)大鼠内质网钙ATP酶2a(SERCA2a)的影响,探讨其抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:80只Wistar雄性大鼠随机选取8只作为正常对照组,剩余大鼠通过呋喃唑酮水溶液制备DCM模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组及抗纤益心方1. 8、3. 6 g/kg组,卡托普利10. 1 mg/kg组。相应药物或生理盐水连续灌胃8 w后,检测大鼠超声心动图指标,HE染色观察心肌组织病理学改变,Westen blot检测各组大鼠心肌组织中SERCA2a、转录因子C/EBP(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸蛋白酶8(Caspase8)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase3)蛋白表达水平,荧光探针法检测心肌内质网Ca~(2+)浓度。结果:与正常对照组相比较,模型对照组大鼠LVESD、LVEDD明显升高,FS、LVEF明显降低,心肌组织病理损伤明显,内质网钙离子浓度降低、SERCA2a蛋白表达明显下调,CHOP、GRP78、Caspase8、Caspase3蛋白表达明显上调(P <0. 05);与模型对照组相比,抗纤益心方1. 8、3. 6 g/kg组,卡托普利10. 1 mg/kg组大鼠LVESD、LVEDD明显降低,FS、LVEF明显升高,心肌组织损伤程度明显减轻,内质网钙离子浓度升高、SERCA2a蛋白表达明显上调,CHOP、GRP78、Caspase8、Caspase3蛋白表达明显下调(P <0. 05)。结论:抗纤益心方可通过调控SERCA2a蛋白表达,以维持细胞内钙离子稳态,从而改善内质网应激引起的细胞凋亡。     

丹参酮Ⅱa通过AMPK/mTOR通路调节自噬促进急性白血病细胞凋亡作用机制研究

目的观察丹参酮Ⅱa对HL-60的凋亡与自噬以及相关因子水平的影响,探讨丹参酮Ⅱa抗急性髓系白血病的分子机制。方法使用不同浓度的丹参酮Ⅱa处理HL-60细胞24、48 h后用CCK-8法检测增殖抑制率,吉姆萨染色观察细胞形态,Western blotting检测Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、PARP-1、p-AMPK、pmTOR、LC3B水平变化,联用自噬抑制剂巴弗洛霉素A1以CCK-8测细胞存活率。结果以0、1、2、4、8、16、32、64、128μmol/L丹参酮Ⅱa处理HL-60细胞24、48 h后HL-60增殖被抑制,其作用随浓度增加和时间延长而加强,24、48 h的IC₅₀分别为32.87、18.4μmol/L;吉姆萨染色镜下观察见,随着药物浓度增加HL-60凋亡增加;Western blotting显示Caspase-3减少、Cleaved-Caspase-3增加,PARP-1切割增加,凋亡增强;p-AMPK增加、pmTOR减少、LC3B增加,显示AMPK/mTOR自噬通路激活,联用巴弗洛霉素A1后丹参酮Ⅱa增殖抑制作用减弱。结论丹参酮Ⅱa通过诱导HL-60凋亡和自噬发挥抗白血病作用,AMPK/mTOR可能是介导这一效应的重要信号通路。     

白藜芦醇对肺炎克雷伯菌的致病性影响

目的利用秀丽隐杆线虫-肺炎克雷伯菌感染模型,探讨白藜芦醇对肺炎克雷伯菌致病性影响。方法取同期化处理后的L4期线虫,经肺炎克雷伯菌感染5d后,洗涤、离心,转移至96孔板内(10只/孔),每孔加入LB溶液40μl、M9缓冲液160μl、FUDR及不同浓度的白藜芦醇,每组5个复孔,20℃静置培养。实验组加入不同浓度的白藜芦醇(0,0.1,0.2,0.4,0.8mg/ml),空白对照组L4期线虫经大肠埃希菌OP50喂养5d后转移至96孔板内,不加白藜芦醇;每24h观察线虫生存情况。结果经Log Rank检验法进行组间差异比较发现,与0mg/ml白藜芦醇比较,0.2,0.4,0.8mg/ml浓度对线虫生存时间的影响有统计学差异(P0.05,χ2值分别为29.262,35.148,37.040);0.1mg/ml浓度的白藜芦醇对线虫生存时间的影响无统计学差异(P0.05,χ2=0.05);同时采用Log Rank检验法对0.2,0.4,0.8mg/ml三组浓度白藜芦醇对感染后线虫生存时间进行组间比较发现,该三组对线虫生存时间的影响无统计学差异(P0.05,χ2值分别为0.05,0.25,0.56)。结论在秀丽隐杆线虫-肺炎克雷伯菌感染模型中,高浓度白藜芦醇能使感染后线虫生存时间延长,但随着浓度的增加,对线虫生存时间并无明显影响。     

龙牙葱木皂苷对培养心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:观察龙牙葱木皂苷对培养心室肌细胞游离钙离子浓度的影响,旨在从细胞水平进一步证明了As的正性肌力作用的机制。方法:采用特异性的荧光指示剂Fluo-3/AM(5μmmol/l)负载心肌细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并连续动态扫描细胞内荧光强度的变化,从而反映其对细胞内游离钙浓度的影响。结果:As(10μg/ml)明显增加培养乳鼠心肌细胞内的游离钙离子浓度。Ca2+平均荧光强度明显升高,与对照组相比,P<0.01,差异显著。荧光强度比正常对照组增30%。结论:增加心肌细胞的钙离子浓度,影响心肌兴奋-收缩藕过程,As增加心肌细胞的收缩力,进而实现正性肌力作用。     

黄芪甲苷对肥大心肌细胞表面积及维生素D轴相关基因表达的影响

目的研究黄芪甲苷对肥大心肌细胞表面积及维生素D轴相关基因表达的影响,从而探讨黄芪甲苷保护心脏的作用机制。方法取大鼠的H9C2心肌细胞进行常规培养,使用异丙肾上腺素(ISO)干预24h造模。待心肌肥大模型建立后,随机分为6组:正常组、模型组、模型组+维生素D组(10-8mmol·L~(-1))、模型组+黄芪甲苷10μmol·L~(-1)组,模型组+黄芪甲苷30μmol·L~(-1)组,模型组+黄芪甲苷60μmo l·L~(-1)组。MTT法检测各组心肌细胞的存活率,通过软件检测各组心肌细胞的表面积,RT-PCR法检测与维生素D轴相关基因(CYP24A、CYP27B、VDR)的相对表达量。结果 MTT检测结果表明,ISO会导致心肌细胞的存活率大大下降,而加入了维生素D和黄芪甲苷后存活率则明显上升。通过对细胞表面积的检测表明,黄芪甲苷和维生素D能够不同程度的减轻由ISO诱导的心肌细胞肥大。RT-PCR检测结果表明,维生素D和黄芪甲苷能够提高维生素D轴相关基因的表达量,而ISO则会导致其表达量降低。结论黄芪甲苷能够减轻心肌细胞的损伤,保护心肌细胞,而其机制可能与黄芪甲苷对维生素D轴的调节作用有关。     

南昌樟叶挥发油化学成分分析及对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌杀菌研究

目的对南昌樟叶中挥发油粗油成分进行分析,并研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌两种细菌的抑菌浓度和杀菌浓度。方法采用气相色谱-质谱-计算机联用技术测成分;采用96孔板微量稀释法培养测吸光度检测的方法,研究其对两种细菌的抑菌浓度和杀菌浓度。结果从油中分离出40个色谱峰,鉴定了39个化合物,占总量的97.5%;挥发油对大肠杆菌的最低抑制浓度(MIC)在培养18~20 h为0.78μl/ml,延长至24 h后降低到1.56μl/ml,其最低杀菌浓度(MBC)为1.56μl/ml;而对金黄色葡萄球菌的MIC随时间变化不明显,24 h内均为0.78μl/ml,其MBC为1.56μl/ml。结论南昌樟叶挥发粗油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌和杀菌效果较好。     

清热活血方对斑马鱼胚胎血管新生的影响及安全性

目的观察清热活血方对斑马鱼胚胎血管新生的抑制作用并探讨其安全性。方法选取受精后2天的斑马鱼胚胎120个,置于12孔板中,每孔10个。分为空白组、阳性药组和清热活血方50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml组,阳性药组给予浓度为50μg/ml瓦他拉尼(PTK787) 3ml,清热活血方各浓度组给予相应浓度清热活血方3ml,各组连续给药72h,每24h更换暴露液,在体式显微镜下观察统计斑马鱼胚胎体节间血管指数及镜下荧光点数。通过预实验确定清热活血方最大非致死浓度(MNLD)为802μg/ml和最小全致死浓度(MTLD)为2560μg/ml,在此区间设定8个药物浓度,建立致死曲线,计算半数致死浓度(LD50)。选用1/10 MNLD(80μg/ml)、1/3 MNLD(267μg/ml)、MNLD 3个浓度作为毒性指标观察的给药浓度,给予药物暴露液3ml,连续给药72h,显微镜下计数斑马鱼胚胎心率,并记录各浓度清热活血方对各个脏器系统及其他表型指标产生的影响,包括斑马鱼胚胎卵黄、肠腔、肠褶皱、尾鳍等。结果与空白组比较,阳性药组及清热活血方100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml组斑马鱼胚胎体节间血管指数及镜下荧光点数均降低(P0.01)。清热活血方100μg/ml组、150μg/ml组、200μg/ml组之间比较,随着中药浓度的增加斑马鱼胚胎体节间血管指数显著降低(P0.05),而各组斑马鱼胚胎镜下荧光点数仅有减少趋势而差异无统计学意义(P0.05)。根据清热活血方致死曲线可得LD50为1200μg/ml,安全指数为5.1。与空白浓度比较,清热活血方267μg/ml、802μg/ml浓度干预时斑马鱼胚胎心率显著增快(P0.01),80μg/ml浓度对斑马鱼胚胎心率影响不明显(P0.05),267μg/ml浓度与802μg/ml浓度对斑马鱼胚胎心率增快的程度差异无统计学意义(P0.05)。当浓度高于267μg/ml时,清热活血方对斑马鱼胚胎的发育表现出实质性的毒性作用,如肠褶皱消失、肠变性等。结论浓度为100μg/ml的清热活血方对斑马鱼胚胎有较强的抑制血管新生的作用,且具有安全性。     

穿心莲内酯对HL-60细胞凋亡、CytC蛋白表达的影响

目的:研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法:以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型,作用于HL-60细胞的穿心莲内酯设3.125、6.25、12.5μg/ml三个受试浓度,实验分为溶媒对照组、穿心莲内酯3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml四个组。采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率、流式细胞术结合荧光染色检测穿心莲内酯对细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响。结果:穿心莲内酯能促进HL-60细胞凋亡,且呈剂量依赖性。穿心莲内酯作用HL-60细胞24h,Cyt C蛋白表达增加,12.5μg/ml作用浓度与溶媒对照相比有统计学意义(P0.05)。结论:穿心莲内酯能诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能与Cyt C释放的增加、线粒体通路有关。     

甲基原薯蓣皂苷对心肌细胞内钙及ATP酶功能的影响及其机制

目的:研究甲基原薯蓣皂苷(MPD)对大鼠心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的活动及细胞膜ATP酶功能的影响,并分析其机制。方法:将乳鼠心肌细胞悬液随机分为对照组、MPD组、地尔硫卓(Dil)组,荧光分光光度计法观察心肌细胞[Ca2+]i的变化。将培养的乳鼠心肌细胞分为对照组和MPD组,分别检测心肌细胞膜ATP酶活性,并观察肌浆网钙ATP酶SERCA2a基因的mRNA表达水平。结果:在静息状态下,各组的心肌细胞[Ca2+]i均无显著性差异。但在KCl刺激下,MPD和Dil组与对照组相比,荧光信号峰值和[Ca2+]i浓度均低于对照组(P0.001)。在心肌细胞膜ATP酶的活性中,MPD组的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性显著高于对照组(P0.05,P0.01),而Mg2+-ATP酶的活性在2组间的比较无差异性。MPD组与对照组2组SERCA2a的mRNA表达量也无差异性。结论:MPD在一定程度上可以抑制细胞膜上电压依赖型钙通道开放,减少钙离子内流。MPD还可以通过提高心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境。