人血清中青霉素抗体的酶联免疫吸附测定

目的: 建立检测青霉素抗体的ELISA法,并探讨其临床意义。方法: 以氨苄西林用SPDP法与兔血清白蛋白交联,用此交联物为包被抗原,HRP-抗人IgG为酶标抗体,建立检测青霉素抗体的ELISA法,并对部分临床标本进行青霉素抗体检测。结果: 建立的方法其批内、批间变异系数分别为6.8%、8.4%。氨苄西林-兔白蛋白交联物免疫家兔获得兔抗氨苄西林的抗体,以此抗体作阻断试验,抑制HRP-抗人IgG的显色。临床标本检测结果表明,不同疾病患者青霉素抗体的阳性率不同。结论: ELISA可用于临床对青霉素抗体的检测,具有较好的特异性、敏感性和重复性。     

辣根过氧化物酶标葡萄球A蛋白组化法快速诊断流行性出血热

本文报告辣报过氧化物酶标葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA) 间接组化法检测EHF特异性IgG抗体,并与IFA法进行了比较。结果表明HRP—SPA组化法和IFA一样,具有相同的特异性而且敏感性更高,其血清抗体滴度为IFA法2～4倍。     

酶标SpA免疫酶法检测宫颈癌患者血清中单纯疱疹病毒抗体

许多报告认为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染与宫颈癌的发生有关。应用免疫酶法和免疫荧光法检测 HSV/IgG 抗体已有报道。前者需用荧光显微镜,应用受到限制。免疫酶法检测患者体液中病毒特异性抗体比其它方法简便易行,且敏感性和特异性较好,应用日广。用它检测病毒 IgG 抗体,通常以酶标抗人 IgG(简称酶标抗体)作为第二抗体。本文将辣根过氧化物酶标记葡萄球菌 A 蛋白(简称酶标 SpA)用于免疫酶法     

酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色法在炭疽快速诊断中的应用——一、快速检测炭疽病人荚膜抗体的实验研究

本文介绍了酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色检测炭疽荚膜抗体的方法,并与荧光抗体染色法作了比较。检测16例47份炭疽病人血清荚膜抗体,三种方法的阳性率分别为78.8％、78.8％和80.9％,相差不显著(P>0.05)。系统地观察7例病人荚膜抗体动态变化,提示多数炭疽病人的荚膜抗体可能维持9个月左右,并进一步证实检测该抗体可作为炭疽病的临床追溯诊断和流行病学调查的有力证据。本实验证明上述三种方法的敏感性和特异性均相似,而两种酶标染色法,尤其是酶标葡萄球菌A蛋白染色法的优点更多,更便于推广使用。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。     

钩端螺旋体病人血清抗体的SPA-ELISA检测法

用酶标葡萄球菌A 蛋白作ELISA 检测临床确诊、显凝试验为阳性的钩端螺旋体病人血清59份,同时用40份健康人血清与酶标抗体作ELISA进行比较。两种方法都有较高的敏感性和特异性,而酶标葡萄球菌A 蛋白具有制备简单,标记步骤简便,比较稳定和易被推广等优点,可替代酶标抗体在ELISA中应用。     

快速斑点酶标法检测抗丝聚蛋白抗体

目的 建立一种快速、简便的抗丝聚蛋白抗体(anti-filaggrin antibody,AFA)的检测方法。方法 采用快速斑点酶标法(Rapid-Dot-ELISA,R-Dot-ELISA)检测15份AFA阳性的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和15份AFA阴性的正常健康者血清的AFA。检测中采用不同浓度的丝聚蛋白、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体,摸索检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA和ELISA法检测100例RA患者和150例包括系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎等非RA的自身免疫病患者和50例健康者血清的AFA,比较两种方法检测AFA的一致性,并判断R-Dot-ELISA检测AFA对RA的诊断价值。结果 丝聚蛋白浓度为40~160 μg/mL,封闭液为含1%BSA和10%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320是较合适的检测条件。R-Dot-ELISA与ELISA法检测AFA,结果一致率为98％(r=0.947,P＜0.05),对RA诊断的敏感度、特异度等统计学指标无差异。结论 R-Dot-ELISA检测AFA快速、简便,且对RA的诊断具有较高的敏感性及特异性,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。     

用酶联免疫印渍技术检测精神分裂症抗脑蛋白抗体的探讨

应用酶联免疫印渍技术对60例临床诊断为精神分裂症患者血清中的特异性抗脑蛋白IgG抗体进行了检测分析,同时采用了40例正常人的血清作对照,实验结果证明,精神分裂症病人血清中的IgG抗体与人脑多种蛋白质有明显的特异反应,特异反应区带绝大部表现在67～94kd蛋白分子量范围,4～5条反应区带数的占病人总数的21.6-23.3％,病人血清中抗人脑蛋白TgG抗体特异性有显著差异,提示精神分裂症病人血清中抗脑抗体的存在,且具有一定的特异性。本方法具有特异性强,敏感性高和重复性较好的特点,并能对非特异性交叉反应的抗体加以区分,这对精神分裂症的临床诊断和及其免疫病因研究有一定的意义。     

兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备

目的制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

HRP-SPA免疫组织细胞化学法检测抗核抗体

用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA),在酶标记免疫组织细胞化学法中,代替酶标记第二抗体(马抗人IgG)。以鼠肝印片作为抗原基质,检测32例病人血清中的抗核抗体,并与免疫荧光间接法、酶标记抗体(HRP—IgG)免疫组织细胞化学法,检测抗核抗体比较,三者在敏感性和特异性方面基本相符。HRP—SPA免疫组织细胞化学法,HRP—IgG免疫组织细胞化学法,都可在光学显微镜下观察,标本可长期保存。但是HRP—SPA试剂较HRP—lgG试剂稳定,为检测抗核抗体提供了更便于推广的一种新方法。     

量子点快速检测弓形虫IgG抗体方法的建立及初步应用

目的 建立一种简便、快速的人弓形虫(Toxoplasma,TOXO)IgG抗体检测新方法,并在临床初步应用.方法 应用TOXO抗原包被羧基磁珠作为固相载体,量子点标记羊抗人IgG作为检测抗体,建它TOXO IgG检测方法,同时优化检测条件;对255份临床血清标本进行了检测,并与意大利DiaSorin TOXO IgG ELISA试剂进行比较.结果 检测最佳条件为:抗原包被浓度100 μg/ml,量子点标记二抗工作浓度为1∶200,待测血清稀释度为1∶100.本方法的诊断敏感性、特异性分别为93.3%、96.7%,与进口试剂盒的总符合率为96.5%.结论 基于量子点标记及免疫磁珠技术检测TOXOIgG,操作简便、快速,具有较高的特异性、敏感性和有较好的临床应用价值.     

酶联免疫吸附试验检测乙脑IgM,IgG抗体的研究

本文报导了间接微量酶联免疫吸附试验检测乙脑病毒抗体的实验条件和方法。抗元系用乙脑病毒感染的幼鼠脑,经鱼精蛋白和聚乙二醇处理的半提纯抗元,将抗元包被于国产聚苯乙烯微量塑料板,应用马抗人IgG辣根过氧化物酶结合物和马抗人IgM辣根过氧化物酶结合物检测人血清中乙脑病毒特异性IgM IgG抗体;与HI、CF试验比铰,三种方法结果基本一致,有一定相关性。经阻断试验,取代试验等ELISA结果是特异性的。ELISA和HI试验检测IgG抗体敏感性相近;ELISA检测IgM抗体比2ME—HI试验的敏感性稍高,是一种帮助乙脑早期诊断比较理想方法。ELISA检测病人血清较HI、CF试验快速、简便、节省材料、而且被检血清不需事先处理等优点,有可能代替HI、CF试验供检测乙脑病毒抗体,作为常规诊断之用。     

双抗体夹心法检测冠心病患者血清中肺炎衣原体循环免疫复合物的方法学建立

目的 建立一种敏感而特异的双抗体夹心法检测血液中循环免疫复合物(CIC),并探讨血液中肺炎衣原体(Cpn)CIC与冠心病的关系。方法 包被已知特异性鼠抗人CpnTW183IgG,加入用7％PEG6000,从冠心病患者血清中提取的CpnCIC,再加入酶标二抗与CIC中的抗体结合,通过底物显色检测患者CpnCIC阳性率。结果 冠心病组CpnCIC的阳性率(63.8％)高于对照组(40.0％),差异有显著性意义(X~2=7.78,P<0.05)。结论 建立的双抗体夹心法检测CpnCIC有较高的敏感性和特异性,可用于批量临床标本的检测,血清中中分子量CpnCIC的存在与冠心病之间有密切关系。     

McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

用酶联葡萄球菌A蛋白检测流行性出血热特异性抗原抗体

<正> 笔者用酶联葡萄球菌A 蛋白(HRP-SPA)对120例流行性出血热(EHF)病人血清IgG进行了检测,总阳性率为118/120(98.3%);60例双血血清的恢复期血清抗体滴度均升高4倍或4倍以上;用已知EHF 抗血清对四种病毒抗原进行了检查,结果EHF 抗血清除与EHFV 抗原呈强阳性反应外,与其他三株病毒抗原均呈阴性反应。本法与间接免疫荧光法(IFA)进行了比较,效果相同。     

斑点酶联免疫吸附试验检测伤寒特异性抗体

目的　验证斑点酶联免疫吸附试验 (Dot -ELISA)检测伤寒抗体的敏感性和特异性。方法　采用Dot -ELISA测定伤寒沙门菌包膜抗原V、菌体抗原O和鞭毛抗原Hd 的特异性抗体 ,并与肥达氏反应相比较。结果　肥达氏反应均为阴性 ,而经Dot -ELISA试验 ,疑似伤寒患者血清中检出 3种抗体阳性 1例 ,非伤寒发热病人血清中检出单项Hd 抗体阳性1例。Dot -ELISA法比肥达氏反应敏感 10倍以上 ,且无交叉反应。结论　该法有较高的特异性和敏感性 ,且操作简单、快速、无需特殊设备 ,宜于临床推广应用。     

免疫酶标电泳技术检测结核菌特异抗体研究

近十年来研究检测结核病人血清中特异抗体的方法引起国内外重视,已报道都以酶联免疫吸附试验(ELISA)法包被不同抗原,间接检测相应抗体,其操作较复杂,检测时间均需24小时以上。本文首先在国内应用免疫酶标电泳技术(IELEP)检测血清中结核菌特异抗体,无需复杂昂贵设备,具有操作简便、快速,兼具特异性、灵敏度、稳定性优于LISA法的优点。IELEP法检测血清中结核菌特异抗体将酶标记抗原(聚合OT为抗原)和血清标本分别置于阴、阳极端,在电泳作用下直接相遇形成初级免疫复合物,经酶促反     

酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗核抗体的研究——鼠肝印片作为抗原基质

用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase.HRP)标记马抗人IgG抗体,用鼠肝印片作为抗原基质,测定30例病人血清中的抗核抗体,并与免疫荧光间接法测定抗核抗体相比较,两者在敏感性和特异性方面无明显差别。ELISA测定抗核抗体,可在光学显微镜下观察,标本片可长期保存以供复查。为测定抗核抗体提供了一种新方法。     

ELISA与IgG两种测定囊虫抗体方法结果对照

ELISA法检测囊虫抗体具有很高的敏感性和特异性,是用于诊断囊虫病的最好方法之一.囊虫抗体IgG胶体金标诊断试剂盒是以纯化的囊虫抗原固定于纤维膜表面,使用时加入待测血清,如样品中含有抗囊虫特异性抗体,则可与膜表面的相应抗原结合,形成紫红色复合物,颜色的深浅与样品中存在的抗囊虫特异性抗体lgG的量成正比.我们用两种不同的方法对300例门诊有疑似囊虫病的人进行对照检测,现报道如下: