JSI-124靶向性阻断STAT3通路对舌鳞癌Tca-8113细胞增殖抑制的研究

目的:观察选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖抑制以及胞质转录因子STAT3蛋白表达的影响。方法:用MTT、流式细胞仪分别检测Tca-8113细胞在不同浓度JSI-124及不同时间作用下,细胞增殖及凋亡的情况;Western Blot法检测作用后细胞中STAT3蛋白及其磷酸化蛋白表达的变化,并对所得结果进行统计分析。结果:JSI-124可以抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强;STAT3蛋白的表达无明显变化,而磷酸化激活状态的STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124可明显抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡。     

MG-132诱导Tca-8113细胞凋亡的机制探讨

目的:探讨内质网应激在蛋白酶抑制剂MG-132诱导人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞凋亡中的作用。方法:使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基常规培养Tca-8113细胞,实验分为5组,3个实验组分别加入MG-132,终浓度为10.0、20.0、30.0μmol/L;阳性对照组加入毒胡萝卜素,终浓度为5.0μmol/L;阴性对照组加入1640培养液。培养24h后,Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测GRP78 mRNA,Western印迹检测caspase-12蛋白的表达,ELISA法检测人泛素蛋白连接酶E3浓度。应用SPSS16.0软件包对结果进行统计学分析。结果:MG-132作用Tca-8113细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态;MG-132实验组细胞凋亡率随MG-132浓度升高而逐渐升高,存在浓度依赖性;MG-132组GRP78的mRNA及caspase-12蛋白表达增强;MG-132组人泛素连接酶E3的浓度分别为28.75±2.28、18.16±0.65、8.85±0.72。结论:MG-132可通过...     

载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒对人舌癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒(MSNs@DOX)对体外培养的人舌癌Tca-8113 细胞增殖及凋亡的作用。方法:透射电镜(TEM)和氮吸附法对介孔二氧化硅纳米粒(MSNs)进行表征;紫外分光光度计检测阿霉素(DOX)释放行为;MTT法检测细胞增殖抑制作用;Hochest33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布;Western blot检测P53、Bcl-2、Bax 和Caspase-3 蛋白表达。结果:MSNs形态规则,分布均一,平均粒径、介孔孔径、比表面积和孔容分别为约30 nm,19.59682 nm、193.4296 m²/g、0.947625 cm³/g;MSNs细胞相容性良好;与单独DOX相比,载药组的细胞增殖抑制率及凋亡率更显著,且呈一定MSNs浓度依赖性(P<0.05);细胞明显阻滞于G0/G1期; P53、Bax、Caspase-3 表达显著升高,Bcl-2表达显著降低。结论:该载药纳米传输系统有望用于舌癌治疗。     

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制.方法:用2～10 μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞.MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入...     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对口腔鳞癌细胞Tca-8113凋亡的研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对Tca-8113细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法：倒置显微镜、荧光显微镜观察Apicidin对Tca-8113细胞的影响;CCK-8法观察24h、48h、72h不同浓度Apicidin对Tca-8113细胞增殖的影响;DNA ladder检测细胞凋亡;流式细胞术检测凋亡率。结果：不同浓度的Apicidin对Tca-8113细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Apicidin能诱导Tca-8113细胞的凋亡且随着时间和剂量的延长越明显。结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin能抑制人口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

TGF-β_1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖和凋亡影响的研究

目的　研究TGF β1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖与凋亡的影响。方法　以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113诱导产生的耐药细胞系Tca8113/CDDP为研究对象。应用ELISA法检测转化生长因子TGF β1在Tca8113/CDDP细胞中的表达水平。另在体外用不同浓度的TGF β1对Tca8113/CDDP细胞进行作用 ,通过吉姆萨(Giemsa)染色、MTT比色法和DNA琼脂糖凝胶电泳 ,观察Tca8113/CDDP细胞的凋亡情况。结果　ELISA检测可知Tca8113/CDDP细胞内和无血清培养液中的TGF β1的表达水平均低于Tca8113(P <0 .0 1)。体外诱导凋亡实验 ,TGF β1的浓度高于 0 .1ng/ml时 ,Tca8113/CDDP即有显著的凋亡特征出现 ,细胞皱缩脱落。Geimsa染色可见凋亡小体形成 ;MTT法显示Tca8113/CDDP细胞的凋亡与TGF β1的浓度有一定的相关性 ;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯状条带。结论　Tca8113/CDDP自身的TGF β1的表达水平与其增殖状态有关 ;外源TGF β1(0 .1ng/ml)可以显著的诱导Tca8113/CDDP凋亡。     

Tca-8113细胞系单细胞体外增殖的实验观察

目的:观察舌鳞癌Tca-8113细胞系的单细胞体外增殖能力,寻找肿瘤干细胞存在的依据,从而为鉴定其表面标记物奠定理论基础。方法:采用有限稀释法对舌鳞癌Tca-8113细胞进行单细胞体外培养,了解舌鳞癌细胞(Tca-8113)的分裂、增殖特点。结果:单细胞培养8d后,舌鳞癌Tca-8113细胞株中具有持续增殖能力的细胞占肿瘤细胞的10.85%,12d后,继续分裂增殖的细胞比例为5.23%,16d后,仅有5.09%的细胞继续增殖。结论:舌鳞癌Tca-8113细胞具有异质性,仅有少量细胞具有持续增殖能力,而这部分细胞是否就是舌鳞癌Tca-8113细胞的肿瘤干细胞。还有待进一步的实验研究证实。     

加热对Tca8113细胞UPA mRNA表达的影响

目的研究加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogenactivator,UPA)mRNA表达的影响。方法根据不同加热温度分为37℃、40min;40℃、40min;43℃、40min;45℃、40min4组。按上述分组在不同加热剂量下加热人舌癌Tca8113细胞,采用原位杂交方法检测Tca8113细胞UPAmRNA的表达,并用Spot及IPP图像采集分析系统处理原位杂交染色结果。结果Tca8113细胞UPAmRNA阳性表达呈紫蓝色,定位于细胞浆。40℃、43℃组UPAmRNA染色的光密度值均小于37℃组(P<0.05);45℃组与37℃组相比,UPAmRNA染色的光密度值统计学上无显著性差异。结论40℃、40min和43℃、40min加热,可抑制人舌癌Tca8113细胞UPAmRNA的表达。提示:口腔癌热疗的常用加热剂量43℃、40min加热人舌癌Tca8113细胞后,不但没有促进Tca8113细胞UPAmRNA的表达,而且还抑制其表达。     

Nrf2、HO-1在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨在口腔鳞癌(Oral squamous cell carcinomas,OSCC)的发生发展过程中核因子E2/ 相关因子 2(Nuclear related factor-E2-factor,Nrf2) 、HO-1(Heme oxygenase-1)可能存在的作用。方法:采用超敏免疫组化法Super Vision(SV)检测Nrf2、HO-1在23例癌旁正常组织和54例口腔鳞癌组织中的表达情况,并讨论两者表达是否具有相关性以及与口腔鳞癌患者的不同临床病理因素之间的关系。结果:在OSCC组织中Nrf2、HO-1的阳性表达率较癌旁正常组织高(P＜0.05);Nrf2、HO-1的阳性率与OSCC组织的性别,年龄,TNM分期,pT分期,部位,吸烟指数无明显相关性(P>0.05),Nrf2的阳性率与组织学分化程度,淋巴结转移不相关(P>0.05);HO-1的阳性率与组织学分化程度,淋巴结转移相关(P＜0.05); Nrf2、HO-1在OSCC组织中的阳性表达率呈正相关(r=0.295,P=0.032)。结论:Nrf2、HO-1对OSCC的发生发展有重要意义。     

利用RNAi技术抑制人舌癌Tca－8113细胞增殖的实验

目的：通过转染可抑制Tca-8113细胞tankyrase1表达的siRNA,达到抑制Tca-8113细胞增殖的目的。方法：采用体外转录合成方法,合成针对tankyrase1的siRNA,并进行Cy-3荧光标记,用脂质体转染至Tea-8113细胞,荧光显微镜观察判断转染效果。应用噻唑蓝（MrIrr）法和流式细胞仪检测siRNA的作用效果;应用Westernblot方法鉴定siRNA抑制tankyrase1表达效果。结果：tankyrase1siRNA组与空白对照组、脂质体对照组相比．可诱导11ca-8113细胞tankyrase1表达下调,Westernblot结果分析显示,转染siRNA后可下调tankyrase1表达量的1／2,并抑制Tca-8113细胞的增殖（P〈0．05）,同时改变了细胞周期各时相的细胞分布。结论：tankyrase1siRNA在体外实验中可沉默目的基因以及抑制Tca-8113细胞增殖。     

Tca8113细胞系耐药性的实验研究

目的：建立耐顺铂（CDDP）人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP,对其耐药特性进行研究,方法：应用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续透导培养方法,获得Tca8113耐药细胞,采用MTT法,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞增增时间、裸鼠成瘤性、化疗药敏感性,P-gp和GST－π蛋白表达进行研究。结果：初步建成耐CCDP的人舌鳞癌细胞系（Tca8113／CDDP）,其耐CDDP浓度为10μmol/L。该细胞同时对卫猛（Vm-26)、博来霉素（BLM）、长春地辛、（VDS）、表阿霉素（E－ADM）、泰素（Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代1月后,倍增时间从29．9h降至16．7h,具有裸鼠成瘤性,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,耐药细胞Tca8113／CDDP则无。P－gp（P－糖蛋白）及GST－π表达量升高,表明MDR－1mRNA表达水平增高,结论：CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113／CDDP细胞系具有多药耐药特性,GSH／GST解毒系统可能与Tca8113／CDDP耐药性的产生。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的：探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白（P-glycoprotein,P—gP）、多药耐药相关蛋白1（muhidrug resistance associate protein 1,MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π（glutathione S—tranferase π,GST-π）表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA细胞在放疗后4hP—gP,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24h耐药蛋白的表达明显升高（P〈0．01）,Tca8113细胞的耐药蛋白表达在4h和24h时均有明显上升（P〈0．01）。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降。结论：放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。     

稀土离子镧与镨对人舌癌细胞的抑制作用

目的:观察稀土离子镧与镨(LaCl3、PrCl3)对体外培养的人舌癌Tca8113细胞的影响及两种稀土离子作用的差别。方法:!用三种浓度的LaCl3、PrCl3处理体外培养的人舌癌Tca8113细胞并测定细胞生长曲线、用MTT法检测细胞增殖活性、以琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:!Tca8113细胞经镧与镨离子作用后细胞增殖活性明显下降并出现明显的细胞凋亡;镧与镨对细胞的抑制作用比较差异无显著性。结论:稀土离子镧与镨对人舌癌Tca8113细胞有生长抑制作用,且作用呈剂量依赖性和时间依赖性;二者均能引起细胞凋亡,细胞凋亡率也呈剂量依赖性。两种稀土离子的细胞抑制作用差异无显著性。