黄种人与白种人正常皮肤痣和黑素瘤组织中优黑素和褪黑素含量比较

目的 比较一组黄种人和白种人正常和异学皮肤组织中褐黑素和优黑素含量。方法 采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）分析黄种人和白种人痣细胞痣、白种人发育不良性黑素细胞痣、恶性黑素瘤组织中优黑素和褐黑素含量。正常对照为痣周围皮肤组织。结果 黄种人正常皮肤和痣细胞痣组织中优黑素含量明显高于相应白种人皮肤组织（Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．０５）；而褐黑素含量则明显低于白种人皮肤组织（Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．０１）。本文进一     

不同肤色人种角层细胞黑素含量和形态的比较

目的 探讨种族间皮肤角层细胞黑素的差异。方法 用浅表角层细胞粘附技术和ＯｐｔｏｍａｘＶ计算机分析系统对一组黑种人（１０名）,白种人（２４名）和黄种人（１３名）黑光区和非黑光区皮肤浅表角层黑素细胞进行定量分析和观察。结果 ３个种族间皮肤浅表角层细胞黑素含量存在明显差异（暴光区Ｆ＝１２．４,Ｐ〈０．０１;非暴光区Ｆ＝９．８９,Ｐ〈０．０１）。３种皮肤浅表角层细胞黑素水平的高低与肤色深浅层黑素细胞进行定     

胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3在恶性黑素瘤及良性痣中的表达

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3(IMP3)在良性痣及黑素瘤组织中的表达,及其在恶性黑素瘤进展及诊断中的作用.方法 用IMP3抗体对28例恶性黑素瘤、8例Spitz痣、6例发育不良性痣和25例良性痣患者的标本组织进行免疫组化研究.结果 28例恶性黑素瘤组织标本中23例IMP3阳性,8例Spitz痣中4例阳性,6例发育不良性痣中2例阳性,25例良性痣均不表达.IMP3在黑素瘤中的表达明显高于Spitz痣及发育不良性痣(P<0.05),侵袭性黑素瘤表达明显高于原位黑素瘤(P<0.01).结论 IMP3可能是良性痣发展至恶性黑素瘤的一个生物学标志,在鉴别黑素瘤和良性痣之间存在一定的价值.     

肢端黑素瘤和黑素痣的AgNOR

应用银胶染色技术，对１９例良性黑素痣和１６例肢端黑素瘤的核仁组成区蛋白（ＡｇＮＯＲ）进行观察分析，采用两种方法计数细胞核内的银染颗粒，发现在良性黑素痣和肢端黑素瘤之间，每种方法ＡｇＮＯＲ均值的差异均有非常显著性意义。因此，ＡｇＮＯＲ染色技术的应用有助于黑素痣和肢端黑素瘤的鉴别。     

乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂2在恶性黑素瘤的表达

【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2（MMP2）和金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）蛋白在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义。方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、正常皮肤组织15例,分别采用免疫组化SP法检测皮损中乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白的表达。结果 恶性黑素瘤皮损乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 21.172,P < 0.01;χ22 = 27.805,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损MMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.817,P < 0.01;χ22 = 19.866,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损TIMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.200,P < 0.01;χ22 = 15.000,P < 0.01）。结论 乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达水平明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达水平。     

骨桥蛋白在黑素瘤中的表达

目的研究骨桥蛋白(OPN)的表达与黑素瘤浸润、转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测OPN在黑素瘤(30例)、黑素细胞痣(30例)、正常皮肤组织(15例)以及在黑素瘤A375细胞株和不同浓度乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染的裸鼠黑素瘤移植瘤中的表达。结果 OPN在黑素瘤、黑素细胞痣及正常皮肤组织中阳性表达率分别为86.67%(26/30),13.33%(4/30)和0(0/15),黑素瘤组与黑素细胞痣组及正常皮肤组OPN的阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.000)。3种不同浓度的乙酰肝素酶反义寡核苷酸在转染的裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中表达表现出不同程度的抑制作用,30μmol/L实验组的抑制作用最强。OPN在人黑素瘤A375细胞株中呈强阳性表达。结论 OPN在黑素瘤中的表达明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内黑素瘤移植瘤中OPN的表达有显著抑制作用;OPN在A375细胞株中呈强阳性表达。     

恶性黑素瘤与黑素干细胞

恶性黑素瘤是高度转移性肿瘤,对传统的治疗抵抗,黑素瘤的发生涉及遗传和环境因素。大多数黑素瘤为原发性,但部分黑素瘤从黑素细胞痣发展而来。以往认为,长期暴露于紫外线、皮肤黑素细胞逐渐积累致癌基因、肿瘤抑制基因发生突变导致了黑素细胞的增殖,并获得侵袭性和转移的能力,成为黑素瘤。另有假说认为,黑素瘤起源于毛囊外真皮黑素干细胞,紫外线诱导的突变可能会改变正常黑素干细胞自我更新、扩展和分化的过程,导致黑素瘤的形成。深入了解黑素瘤的发生机制,有利于寻求更好的治疗方案。     

错配修复基因hMLH_1和hMSH_2蛋白在正常皮肤黑素细胞痣和皮肤恶性黑素瘤中的检测

目的检测DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白在正常皮肤、黑素细胞痣和皮肤恶性黑素瘤(CMM)中的水平,探讨其在皮肤黑素瘤发生、发展中的可能作用。方法用免疫组化SP法检测20例正常皮肤、30例黑素细胞痣和57例原发性CMM中hMLH1和hMSH2蛋白的水平。结果①正常皮肤的表皮、皮肤附属器和黑素细胞痣的细胞核中,hMLH1和hMSH2蛋白强阳性,这两种蛋白在正常皮肤和黑素细胞痣无显著性差异(P>0.05);②在57例CMM中,hMLH1蛋白阳性35例(61.40%),hMSH2蛋白阳性32例(56.14%),这两种错配修复蛋白在CMM中的阳性率和阳性强度显著低于其在正常皮肤和黑素细胞痣中的水平(P均<0.005);③在CMM中,随Clark分级升高,hMLH1和hMSH2蛋白的阳性率和阳性强度逐渐降低。结论错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白在维护正常皮肤和皮肤附属器细胞基因组稳定性中可能发挥了重要作用,其异常可能参与了CMM发生和发展的过程。     

乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达

目的探讨乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达及意义。方法选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、恶性黑素瘤A375细胞株及15例正常皮肤组织,分别采用原位杂交、免疫组化法检测皮损及细胞株中乙酰肝素酶mRNA及蛋白的表达。结果A375细胞株及19例(19/30,63.33%)恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶mRNA呈阳性表达,2例(2/30,6.67%)黑素细胞痣皮损中乙酰肝素酶mRNA表达阳性,正常皮肤组织中无1例呈阳性表达;恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常对照组相比,差异均有显著性意义(χ12=19.200,P=0.000;χ22=25.714,P=0.000)。乙酰肝素酶蛋白在恶性黑素瘤、恶性黑素瘤A375细胞株、黑素细胞痣及正常皮肤组织的表达情况与mRNA相一致。结论乙酰肝素酶mRNA和蛋白的高表达可能与恶性黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点。     

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 mRNA在良恶性黑素细胞肿瘤中的表达

目的探讨组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(HINT1)mRNA在恶性黑素瘤和痣细胞痣中的表达.方法采用半定量RT-PCR方法检测了25例痣细胞痣和25例恶性黑素瘤中HINT1 mRNA的表达,包括新鲜标本和存档石蜡标本.结果相同标本经过10%甲醛固定、石蜡包埋后提取RNA进行半定量RT-PCR的结果与新鲜冻存组织提取RNA的结果高度一致,痣细胞痣组织中HINT1 mRNA的表达水平为0.49±0.04,恶性黑素瘤组织中HINT1 mRNA的表达水平下降为0.31±0.07,差异有统计学意义(P＜0.05).结论HINT1 mRNA表达下降可能与恶性黑素瘤发病有关.     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

FAK在良性和恶性黑素细胞肿瘤中的表达

目的:检测FAK在良性和恶性黑素细胞肿瘤中的表达.方法:用RT- PCR和免疫组化的方法检测25例恶性黑素瘤和25例痣细胞痣和9例发育不良痣中局部黏附斑激酶(FAK)mR州A和蛋白的表达.结果:恶性黑素瘤组织中FAK mRNA和蛋白均表达增高,与痣细胞痣和发育不良痣有明显差异,而后两者间表达水平无明显差异.结论:FAK表达增高发生于肿瘤的早期,可作为细胞恶性转化的标志,发育不良痣不代表一种癌前病变状态.     

积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的探讨积雪草甙外用脱色素的作用机制.方法体外观察积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性的作用并进行酶促反应动力学分析.进一步以系列浓度的积雪草甙作用于体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率.结果积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性,酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂.进一步研究发现,积雪草甙能抑制体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,但对细胞增殖无明显影响.与氢醌相比,积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌.结论积雪草甙可直接作用于黑素细胞,抑制黑素合成,是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂.     

色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中色素上皮衍生因子的表达

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测正常人皮肤组织、正常人色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布.用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF的表达与分布.用RTPCR法检测正常黑素细胞及A375中PEDF mRNA的表达.结果 ①PEDF在正常皮肤组织、正常人色素痣及恶性黑素瘤组织中的表达逐渐降低,三组间差异有统计学意义(P<0.05).②PEDF在正常黑素细胞中表达,而在恶性黑素瘤细胞株缺失.③PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达量明显低于正常黑素细胞.结论 PEDF的表达降低在恶性黑素瘤的发病机制中可能起一定作用.     

STAT3与Cyclin D1在恶性黑素瘤中的表达和意义

为了检测STAT3和Cyclin D1在恶性黑素细胞瘤中的表达及其相关性.应用免疫组化SP染色法对20例恶性黑素细胞瘤组织及20例正常皮肤组织石蜡切片进行STAT3和Cyclin D1染色,在光镜下观察并采用计算机图像分析系统计算其灰度值.STAT3和Cyclin D1在正常皮肤组织中均呈弱阳性表达,在恶性黑素细胞瘤组织中呈强阳性表达(P＜0.05);STAT3和Cyclin D1在恶性黑素细胞瘤组织中的表达呈显著正相关.在恶性黑素细胞瘤中过度表达的STAT3和Cyclin D1可能参与肿瘤细胞的增殖过程.     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

胎盘中提取的黑素生成素有效成分分析及动物实验

目的 分析黑素生成素中的活性成分及其对豚鼠表皮中黑素细胞的影响。方法 利用放免法及比色法分别测定黑素生成素中内皮素和唾液酸的含量;用黑素生成素外搽豚鼠背部皮肤加红外线照射,5周后,对搽药的皮肤和对照皮肤进行活检,分别制备透射电镜超薄切片及不同的特殊染色的病理切片。统计搽药表皮病理切片中黑素细胞数目及黑素含量的变化并进行超微结构观察。结果 测定黑素生成素中内皮素含量为210.5±30.1pg/mL,唾液酸含量为147.9±12.1μg/mL。用黑素生成素外搽动物表皮后黑素细胞数目明显增加;含有黑素颗粒的角质形成细胞数、黑素含量指数(MCI-1、2)均有明显提高。结论 黑素生成素中含有能促进黑素细胞增殖的内皮素及增强细胞间识别与粘附的糖和糖脂类物质,作用于动物表皮具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。     

恶性黑素瘤和皮肤色素减退

恶性黑素瘤可伴有多种皮肤色素减退的表现,其发病率高于普通人群,伴发者的预后相对较好.机制可能是对同时存在于正常黑素细胞和黑素瘤细胞上的黑素共同抗原免疫反应的结果,或是一种抗肿瘤药物样反应.色素痣周围或远处突然出现白癜风样皮损、晕痣等皮肤色素减退,有助于普通人群早期发现恶性黑素瘤和已患有恶性黑素瘤者早期发现转移.     

恶性黑素瘤Survivin和C-erbB-2的检测及其意义

目的检测恶性黑素瘤的Survivin和CerbB2及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测72例恶性黑素瘤、61例瘤旁组织、22例黑色素细胞痣和20例正常皮肤组织中Survivin和CerbB2蛋白。结果恶性黑素瘤Survivin蛋白阳性率为59.7%,明显高于瘤旁组织3.3%,黑色素细胞痣4.5%和正常皮肤组织0%(P均<0.01)。Survivin阳性与转移状况和组织学分级有显著相关性。恶性黑素瘤无转移组和Ⅰ级分别明显低于转移组和Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级(P均<0.05)。恶性黑素瘤CerbB2蛋白阳性率为68.1%,明显高于瘤旁组织8.3%,黑色素细胞痣5.6%和正常皮肤组织2.8%(P均<0.01),CerbB2阳性与临床病理特征无明显相关性。Survivin在CerbB2阳性和阴性患者中阳性率分别为69.4%和39.1%,两者间有显著性差异(P<0.05)。结论Survivin和CerbB2蛋白在恶性黑素瘤组织中水平上调,提示两者对恶性黑素瘤发生发展起重要作用。恶性黑素瘤中Survivin蛋白水平与肿瘤转移和组织学分级有关,Survivin可能为临床判断恶性黑素瘤转移和评估预后的有用指标。     

黑素生成素诱导小鼠成黑素细胞增殖和分化的研究

目的 观察从胎盘中提取的黑素生成素对小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5增殖和分化的影响，从诱导成黑素细胞增殖和分化的角度，探讨其治疗白癜风的可能机制。方法 NCCmelb4M5细胞的增殖应用常规MTT法检测；倒置显微镜直接观察黑素生成素作用后细胞形态的变化。RT－PCR检测不同浓度黑素生成素作用后细胞表面分子表达的变化。结果 50，100，200 μg/mL的黑素生成素均可促进NCCmelb4M5细胞的增殖（P < 0.001），100 μg/mL作用效果最为明显；50，100 μg/mL黑素生成素可以刺激表面分子c-Kit和酪氨酸酶在NCCmelb4M5细胞中的表达由阴性转为阳性，并增加小眼畸形相关转录因子（MITF）在细胞内的表达。100 μg/mL的黑素生成素可明显诱导NCCmelb4M5细胞的形态从成黑素细胞向黑素细胞改变。结论 从胎盘中提取的黑素生长素可诱导NCCmelb4M5细胞由成黑素细胞向黑素细胞分化，这种诱导作用可能是使白斑复色的途径之一。