复苏囊胚和复苏D3胚胎行囊胚培养后移植的临床结局比较

目的探讨胚胎的形态学指标与囊胚形成的关系,并比较复苏囊胚移植和复苏第3天(D3)卵裂期胚胎行囊胚培养后移植的临床结局。方法回顾性分析囊胚培养的2139枚新鲜D3胚胎及968枚复苏D3胚胎的囊胚形成情况;分析353例囊胚移植周期的妊娠情况,其中复苏囊胚移植周期136例(A组)和复苏D3胚胎行囊胚培养后移植周期217例(B组),比较两组的临床妊娠率、胚胎种植率和早期流产率等妊娠结局。结果新鲜D3胚胎和复苏D3胚胎的I-II级胚胎囊胚形成率、可用囊胚形成率和优质囊胚形成率均极显著高于III、IV级胚胎(P0.01),两组间相同评分级别的囊胚形成率无显著性差异(P0.05)。A组与B组相比,两组的年龄、移植胚胎数、胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率、多胎率和异位妊娠率之间无显著的差异(P0.05),但后者的移植周期取消率远高于前者(P0.01)。结论高评分D3胚胎的囊胚形成率高于低评分胚胎,对一些形态学上认为无冷冻价值的非优质胚胎也可成功培养至囊胚,筛选出具有发育潜能的胚胎;复苏D3胚胎行囊胚培养后移植周期具有更高取消移植周期的风险,因此选择冷冻囊胚解冻移植更具有优势。     

胚胎的形态学指标与囊胚形成的相关性分析

目的研究胚胎的形态学指标与囊胚形成的关系。方法收集321对行辅助生殖技术助孕的夫妇D3移植和冷冻后剩余胚胎共1208枚,放入培养液中继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率和优质囊胚形成率。结果共形成囊胚210枚,囊胚形成率17.4%,优质囊胚62枚,优质囊胚形成率为5.1%。D3卵裂球数目为6-10细胞组囊胚形成率和优质囊胚形成率极显著高于其它组(P0.01)。不同胚胎碎片组比较差异不显著(P0.05)。胚胎发育迟缓组囊胚形成率和优质囊胚形成率比正常发育组低,差异极显著(P0.01),其中延时受精组、发育阻滞组的囊胚形成率极显著低于发育迟缓组(P0.01)。结论 D3剩余胚胎仍有继续发育成囊胚的潜能,D3细胞数和胚胎发育速度与囊胚形成密切相关。     

用低形态学评分D3胚胎建立人胚胎干细胞系

目的 寻找人胚胎干细胞(hESC)建系材料来源.方法 选用IVF低形态学评分的D3胚胎行序贯囊胚培养,用免疫外科的方法去除滋养细胞,将得到的内细胞团(ICM)接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)上培养5～8 d,每4～7 d传代1次,分别取不同代的hESC进行碱性磷酸酶(AKP)染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原(TRA)TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内外分化全能性鉴定.结果 130枚废弃的D3低形态学评分(评分＜16)的胚胎培养出囊胚19枚,获得原代克隆5个,成功培养出两株hESC系,它们具有hESC的共同的生物学特性.结论 部分低形态学评分的D3废弃胚胎可发育成囊胚.囊胚形成率与形态学评分相关,这些胚胎可作为建立hESC系的材料来源之一.     

废弃卵裂期胚胎囊胚培养的初步研究

目的探讨废弃卵裂期胚胎的继续发育潜力。方法将新鲜行囊胚培养的周期分别分为:(1)D3可用胚胎组和D3Ⅳ级胚胎组,(2)0PN组和1PN组,分别比较组间的囊胚形成率和可用囊胚形成率。结果Ⅳ级胚胎组的囊胚形成率和可用囊胚形成率均显著低于D3可用胚胎组,但仍有9.46%的可用囊胚形成率;0PN组的囊胚形成率和可用囊胚形成率均显著高于1PN组。结论Ⅳ级胚胎仍有一定利用价值;0PN胚胎比1PN胚胎具有更高的发育潜能。     

D3卵裂期优质胚胎与非优质胚胎培养形成囊胚率及临床应用价值

目的探讨D3卵裂期非优质胚胎与优质胚胎继续培养形成囊胚率及临床应用价值。方法收集本中心486个体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)治疗周期中受精后第3天(D3)移植、冷冻保存后剩余的404枚优质胚胎,528枚非优质胚胎继续囊胚培养,比较两种胚胎的囊胚形成率。玻璃化冷冻已形成的囊胚,如果患者新鲜周期移植妊娠失败,则在下一周期把囊胚解冻移植,比较两种冻融囊胚的种植率和临床妊娠率。结果 D3卵裂期优质胚胎囊胚形成率为88.37%,非优质胚胎囊胚形成率为42.42%(P0.01);其中优质胚胎的78枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为42.37%,妊娠率为63.53%;非优质胚胎的64枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为39.65%,妊娠率为58.78%,两组比较差异没有统计学意义(P0.05)。结论⑴D3优质胚胎继续囊胚培养形成率明显高于非优质胚胎。⑵卵裂期优质胚胎培养形成的囊胚与非优质胚胎形成的囊胚冻融后移植的种植率及临床妊娠率没有明显差异。     

非优质胚胎继续囊胚培养与冻融囊胚移植的临床应用价值

目的探讨将非优质胚胎继续囊胚培养与冻融囊胚移植的临床应用价值。方法收集生殖中心235个体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)治疗周期中受精后第3天(D3)移植、冷冻保存后剩余的1026枚非优质胚胎继续囊胚培养,观察优质囊胚的形成情况,并玻璃化冷冻保存,若患者在新鲜移植周期妊娠失败,则在下一周期把囊胚解冻移植,比较冻融囊胚与同时期冻融卵裂胚的种植率和临床妊娠率。结果 D3非优质胚胎的优质囊胚形成率为36.6%,其中有43名患者的77枚优质囊胚在下一周期解冻移植,胚胎种植率(41.6%)和临床妊娠率(65.1%)显著高于同时期100名患者的202枚卵裂胚解冻后移植的胚胎种植率(25.3%)和临床妊娠率(43.6%)(P0.05),流产率无显著性差异(P0.05)。结论 1继续囊胚培养能有效筛选出非优质胚胎中具有发育潜能的胚胎,提高其利用率;2冻融囊胚移植能提高胚胎种植率和临床妊娠率。     

人类辅助生殖技术中DAY3胚胎质量与囊胚形成相关性分析

目的探讨人类辅助生殖技术中,day3胚胎质量与囊胚形成的相关性。方法将符合纳入标准的130例患者day3胚胎移植后剩余胚胎进行囊胚培养至day6,分析患者年龄、day3胚胎分级、day3胚胎细胞数及培养时间与囊胚形成的关系。结果患者年龄与囊胚形成无明显相关;囊胚形成率与day3胚胎质量评分和细胞数呈显著正相关,day3评分为Ⅰ-Ⅱ级胚胎囊胚形成率明显高于Ⅲ-Ⅳ级胚胎,day3细胞数≥6的胚胎囊胚形成率明显高于≤5的胚胎囊胚形成率。综合分析day3胚胎分级、细胞数、培养时间与囊胚形成率的关系,囊胚形成率最高的是≥6细胞Ⅰ-Ⅱ级胚胎,其次是≥6细胞Ⅲ-Ⅳ级胚胎,≤5细胞的其他两组囊胚形成很低,各组胚胎day6囊胚形成率均明显高于day5。结论 day3胚胎的细胞数、质量分级及囊胚的培养天数都能够影响囊胚的形成,其中day3胚胎的细胞数更为重要,培养至day6使day3胚胎质量较差和发育迟缓的胚胎有机会形成囊胚,有效地筛选和保存了有一定发育潜能的胚胎。     

胚胎动态分裂模式:胚胎质量评估和移植胚胎选择的重要指标

目的采用时差胚胎培养监测系统(Time-lapse)探讨胚胎动态分裂模式与胚胎体外发育效率和种植潜力的关系,为胚胎质量评估和移植胚胎筛选提供新依据。方法回顾性分析372个采用Time-lapse系统培养的体外受精治疗周期,根据胚胎分裂模式分为分裂正常组和分裂异常组,同时分裂异常组根据异常分裂类型分为8个亚组,比较不同分组胚胎体外发育质量和囊胚形成效率,另外进一步比较分裂正常组和分裂异常组胚胎移植后的临床妊娠结局。结果①分裂异常组的优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率和可冻囊胚率显著低于正常组,且差异均有统计学意义(P0.05)。②根据胚胎的异常分裂类型分为8个亚组,AC1组、AC2组、RC组、CC组、Mn组、FC组、A1组、Mix组(包含两种及以上的异常分裂模式),与N组(正常组)相比,仅FC组对胚胎发育潜能没有显著影响,其余分裂异常组囊胚形成效率均降低,且差异具有统计学意义(P0.05)。③根据移植胚胎的情况分为三组:A组,移植两个分裂模式正常的优质胚胎;B组,移植一个分裂模式正常和一个分裂模式异常的优质胚胎;C组,移植两个分裂模式异常的优质胚胎。三组病人基线资料差异均无统计学意义(P0.05),B组和C组的临床妊娠率及种植率均显著低于A组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Timelapse系统监测胚胎动态分裂模式是预测胚胎体外发育效率和种植潜力的重要指标,在胚胎质量评估和移植胚胎选择中具有临床应用价值。     

人废弃胚胎体外培养成囊胚的实验室结局

背景：有报道称可以利用废弃胚胎建立人类胚胎干细胞系,对形态发育滞后的胚胎冻融后移植仍有再利用的医学价值。 目的：观察人废弃胚胎在体外继续培养形成囊胚的潜能。 方法：收集接受体外受精-胚胎移植或卵胞浆内单精子注射患者治疗后第3天废弃的胚胎404枚,进行囊胚序贯培养。 结果与结论：①废弃胚胎404枚,形成囊胚 65枚,总囊胚形成率为16.1%。②囊胚形成与患者的病因分类、年龄、受精方式无相关性(P > 0.05)。③胚胎来源于≥三原核(3PN)的(6~8)细胞组的囊胚形成率最高(P < 0.05)。卵裂球数随细胞数的增加,囊胚率也增高,但>8细胞囊胚率反而下降、与<3细胞组的结果相近。④Ⅰ,Ⅱ胚胎形成囊胚速度快,形成率显著高于Ⅲ,Ⅳ胚胎(P < 0.05)。⑤有囊胚形成患者的临床妊娠率显著高于无囊胚形成患者(P < 0.05)。提示囊胚形成与患者病因分类、年龄、受精方式无相关性。优质胚胎与(6~8)细胞的胚胎囊胚形成率高,多原核胚胎形成囊胚的价值应引起关注。废弃胚胎再利用能预测临床结局,为人类胚胎干细胞提供有利资源。 关键词：人废弃胚胎;胚胎培养;囊胚形成;结局分析;胚胎干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.05.038     

小鼠胚胎体外培养方法的改良

目的改进胚胎培养系统以进一步提高胚胎质量与发育潜能。方法采用内径0.21mm、外径0.28mm的塑料毛细管培养胚胎,将吸有胚胎的毛细管浸在盛有蒸馏水的烧杯内,再将烧杯放置在培养箱里的磁力搅拌器上,允许胚胎在微小的空间内发育并伴随着水的旋转而摆动,更好地模拟了胚胎在输卵管中的运动环境。结果分别对85枚、82枚2-细胞胚胎进行毛细管及微滴培养,其中毛细管培养胚胎的囊胚率以及胚胎细胞数(85.4%,57.0)显著高于微滴培养(36.5%,20.6),囊胚率差异显著(P0.05)。且接种在Matrigel基底膜上形成的内细胞团集落显著增大。结论小鼠胚胎体外培养方法的改良——毛细管培养,促进小鼠植入前胚胎的体外发育。     

Phenotype of triploid embryos

The phenotypes of triploid fetuses and placentae are now well established and known to correlate with parental origin of the extra haploid set of chromosomes. In fetuses, it is not clear whether there is a direct parent of origin effect on the fetus itself or if the phenotypes are the result of growth differences influenced by abnormalities in growth and function of the placenta. Examining the phenotype of triploid embryos at an earlier stage in gestation, when the placenta effects may be less pronounced, could help clarify this question. A phenotype characteristic of triploidy in the embryonic period has been described; however, parental origin was not determined in these embryonic cases. In the present study, a population of triploid embryos is assessed to determine if there is a correlation between parental origin and phenotype. Parental origin was determined in 27 first trimester miscarriages. Digyny accounted for 19 cases and diandry for eight cases. Assessment of embryonic phenotype with parental origin showed no correlation between the phenotype of the embryo and parental origin of the extra haploid set. While there may be subtle effects of imprinting on embryonic development, they are not as obvious as they are in the mouse, consistent with the general trend of fewer imprinted genes in human beings compared with the mouse.     

Gene transfer into mammalian embryos

Transgenic mice provide a unique system fusing classical genetics with molecular biology. They enable the dissection of molecular mechanisms underlying the control of growth and differentiation, issues we only dreamed of 20 years ago. The transgenic technology can be expected to be applied also in areas like eugenetics of animal production systems as well as genetic farming. The technology does not give an acceptable alternative for the direct treatment of human disease. However it provides unique possibilities to study genetic defects in a genetically well-defined mammalian model system. The years to come will teach us which of these expectations will come true.     

Tagging embryos of multiparous animals

Bulletin of Experimental Biology and Medicine -     

Avian embryos in hypoxic environments

Avian embryos at high altitude do not benefit of the maternal protection against hypoxia as in mammals. Nevertheless, avian embryos are known to hatch successfully at altitudes between 4000 and 6500 m. This review considers some of the processes that bring about the outstanding modifications in the pressure differences between the environment and mitochondria of avian embryos in hypoxic environments. Among species, some maintain normal levels of oxygen consumption ( ) have a high oxygen carrying capacity, lower the air cell-arterial pressure difference (P_AO2−P_aO2) with a constant pH. Other species decrease , increase only slightly the oxygen carrying capacity, have a higher P_AO2−P_aO2 difference than sea-level embryos and lower the P_CO2 and pH. High altitude embryos, and those exposed to hypoxia have an accelerated decline of erythrocyte ATP levels during development and an earlier stimulation of 2,3-BPG synthesis. A higher Bohr effect may ensure high tissue P_O2 in the presence of the high-affinity hemoglobin. Independently of the strategy used, they serve together to promote suitable rates of development and successful hatching of high altitude birds in hypoxic environments.     

The cryopreservation of human embryos

Figrue 3 from the above paper was wrongly attribute to J.Morris,personal communication. The figure should have been creditedto Peter Mazur, Cryobiology, 14, 251–272; copyright ©1977 by Academic Press, Inc. Reprinted by permission of thePublisher.