氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡时泛素缀合酶和p53的表达

为研究氧化型低密度脂蛋白致U937细胞凋亡时泛素-蛋白酶体通路中泛素缀合酶、p53与泡沫细胞凋亡之间的关系，用氧化型低密度脂蛋白处理人单核细胞U937细胞，诱导其凋亡，采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测泛素缀合酶和p53的基因表达；流式细胞术分析泛素缀合酶、载脂蛋白B和P153的蛋白表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可以诱导U937细胞凋亡，在U937细胞凋亡过程中泛素缀合酶表达降低，p53表达增高，而且细胞内载脂蛋白B也增加。结果提示，泛素缀合酶的表达降低可能使P53和栽脂蛋白B经泛素-蛋白酶体通路的降解减慢．从而引起P53和载脂蛋白B在细胞内积聚．导致U937细胞凋亡。     

辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达

目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L) 辛伐他汀(1和10μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05)。辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。     

低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核细胞ABC1 mRNA表达的影响

为探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核巨噬细胞ABCl表达的影响，用40μg/L佛波酯作用48h，将单核细胞诱导成巨噬细胞，再分别与20mg/L、120mg/L的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白作用24h，提取细胞中总RNA，用逆转录聚合酶链反应法检测其ABCl mRNA的表达。结果发现，小剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可引起THP-1细胞ABClmRNA不同程度的表达增高，小剂量的高密度脂蛋白对ABCl表达无明显影响；而大剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可使THP-1细胞ABClmRNA的表达不同程度降低，其中高密度脂蛋白组轻微降低。结果提示，不同浓度脂蛋白和氧化型脂蛋白对血中单核细胞ABCl表达水平的影响可能在动脉粥样硬化的发生发展过程起重要作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞透明质酸表达的影响及机制

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人主动脉血管平滑肌细胞透明质酸(HA)合成的影响,并初步探究其分子机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞T/G HAVSMC,使用不同浓度(10、25、50、75、100 mg/L)ox-LDL对T/G HAVSMC细胞进行干预,使用CCK-8法检测细胞存活率,并进行分组分析。采用浓度为25和50 mg/L的ox-LDL干预T/G HAVSMC细胞48 h,并设置天然LDL(native-LDL,N-LDL)组(50 mg/L的N-LDL)和对照组,使用HPLC法测定HA含量,使用实时定量PCR检测透明质酸合成酶2(HAS2)和透明质酸合成酶3(HAS3)的mRNA表达,使用Western blot法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、氧化脂蛋白的清道夫受体(SR-PSOX)以及脂肪酸转位酶(CD36)的表达。结果低于100 mg/L的ox-LDL对T/G HAVSMC细胞无明显细胞毒性。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组HA含量、HAS2和HAS3的mRNA表达量明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),N-LDL组与对照组组间差异无显著性(P0.05)。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组LOX-1表达明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),而LRP-1、SR-PSOX和CD36表达无明显变化(P0.05)。结论 ox-LDL能够诱导人主动脉平滑肌细胞中HA的合成,其机制可能与结合LOX-1有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导肝窦内皮细胞植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达

目的：探讨植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）受体1（LOX-1）在肝窦内皮细胞（HSECs）中的表达和ox-LDL对其表达的调控作用。方法使用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法从基因和蛋白水平检测未经处理HSECs 中LOX-1的表达。应用不同浓度ox-LDL（0、20、40、60、80和100 mg/L）对HSECs作用24 h并应用80 mg/L ox-LDL对HSECs作用不同时间（0、12、24和48 h）,作用后实时定量PCR检测HSECs内LOX-1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测细胞内LOX-1蛋白表达。给予80 mg/L ox-LDL干预组多聚肌苷酸250 mg/L作用24 h后,测定LOX-1 mRNA和蛋白的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。结果 LOX-1 mRNA和蛋白在HSECs中均有表达。20～80 mg/L ox-LDL组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达水平随ox-LDL剂量增加而升高,与剂量有明显相关性（F＝38.7、3.43,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,100 mg/L ox-LDL 组 LOX-1 mRNA、蛋白表达下降,差异有统计学意义（ t ＝23.75、18.26, P ＜0.05）。80 mg/L ox-LDL对HSECs作用时间在0～24 h时,随着时间延长,LOX-1 mRNA、蛋白表达递增,与ox-LDL作用时间有明显相关性（F＝2.36、0.33,均P＜0.05）。与作用24 h相比,作用48 h组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达下降（t＝69.21、36.27,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,多聚肌苷酸组中LOX-1 mRNA和蛋白表达降低,两组差异均有统计学意义（ t＝54.93、28.19,均P＜0.05）。结论LOX-1存在于HSECs。在一定浓度和时间范围内,ox-LDL对HSECs LOX-1的调控作用具有时间和浓度依赖性,而多聚肌苷酸可部分抑制这种效应。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1介导氧化型低密度脂蛋白促进血管平滑肌细胞表达白细胞介素6

观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞白细胞介素 6表达的影响及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在其中的作用。人脐带动脉平滑肌细胞体外原代培养 ,传至 4～ 5代。氧化型低密度脂蛋白干预 ,观察不同时间点白细胞介素 6mRNA表达 ,及不同浓度氧化型低密度脂蛋白对白细胞介素 6和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达的影响。并观察血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1抑制剂多聚肌酐酸对白细胞介素 6mRNA表达的影响。结果发现 ,(1)氧化型低密度脂蛋白作用后 ,白细胞介素 6mRNA表达显著升高 ,作用 6h出现峰值。随着氧化型低密度脂蛋白浓度升高 ,白细胞介素 6mRNA和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达均明显升高 ,后两者呈正相关 (r=0 .94 3,P <0 .0 1)。 (2 )多聚肌酐酸抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1后 ,白细胞介素 6mRNA表达明显下降。以上表明氧化型低密度脂蛋白明显促进血管平滑肌细胞白细胞介素 6的表达 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在此过程中起重要介导作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡及Bcl-2、BaX、P53和Caspase-3蛋白表达的影响

目的：研究沥水调脂胶囊抑制内皮细胞凋亡的机制。以氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，观察Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达。方法：用流式细胞术检测细胞凋亡并进行周期分析；用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达水平。结果：沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。在此过程中沥水调脂胶囊上调了Bcl-2蛋白表达水平，对Bax蛋白表达未见明显影响，同时下调了P53和Caspase-3蛋白表达水平。结论：推测沥水调脂胶囊可能是通过上调Bcl-2蛋白表达，下调P53和Caspase-3蛋白表达抑制内皮细胞凋亡的。     

动脉粥样硬化兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达及雷米普利的干预作用

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法以家兔动脉粥样硬化模型为研究对象,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应方法评价动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达及口服雷米普利的干预效应。结果高脂组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达均显著增加,雷米普利组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达水平较高脂组显著下降(P均<0.05)。结论结果提示,服用雷米普利可明显抑制动脉粥样硬化病变血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达,从而可能在动脉粥样硬化的预防中起重要作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源性生长因子B mRNA表达的影响

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 预实验筛选出氧化型低密度脂蛋白对血小板源性生长因子B表达适宜的处理浓度(50 mg/L)与时间(24 h).实验分为5组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组和三个不同剂量(0.1、1.0和10.0 μmol/L)氨氯地平组,用RT-PCR检测血小板源性生长因子B mRNA的表达.结果 以50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激HUVEC-12内皮细胞24 h.随着预处理氨氯地平浓度增加,细胞血小板源性生长因子B mRNA的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性,当浓度为10.0 μmol/L时作用更明显.结论 氧化型低密度脂蛋白可影响HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达,氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达.     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响,以进一步探讨氨氯地平对动脉粥样硬化的作用机制。方法用不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0和10.0μmol/L)预孵育平滑肌细胞1h后,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育,逆转录聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达,而氨氯地平预处理可上调亲环素A的表达。结论氨氯地平可逆转氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素A表达的作用。     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞CD40表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中白细胞分化抗原CD40表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制。方法实验分为6组:对照组、10.0μmol/L氨氯地平单独处理组、ox-LDL组、0.1、1.0及10.0μmol/L氨氯地平预先处理细胞1 h后加入50 mg/L ox-LDL共同孵育24 h组。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40 mRNA的表达,W estern b lot检测CD40蛋白的表达。结果随着氨氯地平浓度增加,细胞CD40的mRNA和蛋白表达逐渐降低,当浓度为10.0μmol/L时作用更明显。结论氨氯地平对ox-LDL诱导的HUVEC-12细胞CD40的表达具有抑制作用。     

相关炎症因子与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一组主要累及全身大、中型弹力型动脉的血管硬化性疾病,以主动脉、冠状动脉和脑动脉多见,其特征是动脉内膜的脂质沉积和粥样斑块形成,且发病机制与高血压、血脂紊乱及血管内皮损伤等因素密切相关。近年来,各种细胞炎症因子与动脉粥样硬化的关系引起愈来愈多研究者的重视,现谨就择要作综述。     

白细胞介素10对血管内皮细胞E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的研究白细胞介素10对人血管内皮细胞表面黏附分子E选择素、细胞间黏附分子1及血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响,探讨白细胞介素10抗动脉粥样硬化可能的机制。方法将人脐静脉内皮细胞随机分为四组进行不同处理24 h:即空白对照组、氧化型低密度脂蛋白组、白细胞介素10组和白细胞介素10与氧化型低密度脂蛋白联合刺激组。采用流式细胞术检测细胞表面黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1表达的变化;采用实时定量PCR和Western Blotting分别检测血凝素样低密度脂蛋白受体1的mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组比较,细胞经氧化型低密度脂蛋白刺激24 h后,其表面的黏附分子E选择素表达量显著增加了20%,血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量也显著增加了25%,而同时加入白细胞介素10联合刺激组E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量与氧化型低密度脂蛋白组比较均出现显著下降(分别为20%和40%),回到基线水平。而单独使用白细胞介素10对E选择素及血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达没有影响;本实验未能检测到氧化型低密度脂蛋白对细胞间黏附分子1表达的影响。结论抗炎因子白细胞介素10能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑...     

氧化型低密度脂蛋白及阿托伐他汀对培养的人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对人血管内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法用正常人新鲜血浆制备氧化型低密度脂蛋白,人脐静脉内皮细胞株复苏、传代后取生长良好3~6代用于实验。分为空白对照组、不同浓度氧化型低密度脂蛋白组(终浓度分别为20、40及80 mg/L)、不同浓度阿托伐他汀组(1、5和10μmol/L)、不同时间组(40 mg/L氧化型低密度脂蛋白和5μmol/L阿托伐他汀分别刺激6、12和24 h及混合刺激组(5μmol/L阿托伐他汀 40 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激24 h)。提取细胞总RNA及蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管紧张素转化酶2 mRNA的表达,免疫印迹法检测血管紧张素转化酶2蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA及蛋白的表达。与空白对照组比较,不同浓度氧化型低密度脂蛋白组血管紧张素转化酶2 mRNA的表达分别降低为73%、51%和33%,蛋白的表达降低为81%、50%及32%,不同浓度组间比较差异亦有显著性(P>0.01);氧化型低密度脂蛋白培养6、12和24 h时间组血管紧张素转化酶2 mRNA与对照组比较分别减少为66%、55%和50%,蛋白的表达与对照组比较降低为63%、53%及49%(P>0.01)。不同浓度阿托伐他汀及其培养不同时间组血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义。阿托伐他汀能抑制氧化型低密度脂蛋白对血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白表达的下调,mRNA表达增加为1.63倍,蛋白表达增加为1.60倍(P>0.01)。结论氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达,阿托伐他汀能抑制这种作用。     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1与糖尿病大血管病变

糖尿病患者倾向于早期发生广泛弥漫的动脉粥样硬化,而其确切机制尚未完全阐明.有研究提示低密度脂蛋白的氧化加速了糖尿病大血管病变的进程,凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1是一种新型氧化型低密度脂蛋白受体,糖尿病中血管内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1呈表达上调状态,而且可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1有可能成为血管性疾病的生物学指标.多项研究提示治疗2型糖尿病的相关药物可抑制凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达.本文就凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1在糖尿病大血管病变中的作用、调节机制及干预措施作一综述.     

氨氯地平拮抗ox-LDL损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成及机制

目的探索氨氯地平拮抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC)血管样结构形成及其作用机制。方法实验分为对照组、ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL)和氨氯地平组(50 mg/L ox-LDL+0.5μmol/L氨氯地平)。差异贴壁法培养分离EPC,ac-LDL摄取和结合UEA-1鉴定EPC,Transwell测定细胞迁移,Matrigel法测血管生成,Western blot和RT-PCR分别检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平和mRNA表达情况,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,Griess法测定一氧化氮(NO)含量。结果 EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞的迁移能力下降近3倍,血管样结构形成能力明显下降,用0.5μmol/L氨氯地平干预可部分恢复EPC的迁移能力,并显著恢复EPC的血管样结构形成能力(P0.05)。机制研究发现,ox-LDL下调EPC e NOS mRNA和蛋白表达水平,显著减少NO的含量(P0.01),氨氯地平显著拮抗ox-LDL的上述作用;EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞内ROS含量显著增加(P0.01),氨氯地平显著减少胞内ROS的水平(P0.05)。结论氨氯地平对ox-LDL损伤EPC血管样结构的形成有显著拮抗作用,其作用与上调e NOS表达和降低细胞内ROS水平有关。     

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中CD36表达的影响

为研究抑癌基因Rb基因在U937细胞泡沫化过程中的表达，应用重组腺病毒载体导入外源性Rb基因。采用逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中清道夫受体CD36和Rb基因的表达和外源性Rb基因导入U937细胞后CD36和Rb基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中，Rb mRNA和蛋白的表达随作用时间延长呈下调趋势，CD36 mRNA和蛋白的表达则呈上调趋势；随着外源性Rb导入U937细胞并表达，CD36表达呈下调趋势。结果提示，外源性Rb基因的导入可以下调清道夫受体CD36的表达。