CD_1(HIT_(6-1,6-2))、CD_(38)(HIT_(1、2、3))和一个新单克隆抗体HIT_4的基础和应用研究(简报)

我室获得了一套抗人白细胞分化抗原单克隆抗体:HIT_1、HIT_2、HIT_3、HIT_4、HIT6-1和HIT6-2。其中HIT6-1和HIT6-2属于国际CD_1类单克隆抗体,识别的CD_1抗原是人类T淋巴细胞在胸腺内分化过程中的一个重要标记,也是郎格罕氏细胞(Langerhans)的特征性标记。最近发现CD_1抗原与HLA系统有关,是HLA系统中非第6对染色体编码的唯一抗原。在研究T淋巴细胞恶性增生、某些皮肤病的发病机制以及CD_1抗原复合体结构、特征、功能和HLA系统复杂性及基因多态性方面有较大意义。     

抗CD_3McAb鼠/人嵌合抗体可变区基因的克隆及序列测定(简报)

本研究表明,抗CD_3McAb具有双向调控T淋巴细胞的功能,对多种疾病,包括恶性肿瘤有明显的临床疗效,作者用DNA重组技术将鼠源抗CD_3McAb在基因水平改建为鼠/人嵌合抗体使之更适合临床应用时,用PCR法从HIT_(3a)(抗CD_3McAb)杂交瘤细胞株中分离出Ig重、轻链可变区基因,並分别克隆进了pGEM-7Zf(+),pGEM-3Zf(+)载体中,重组质粒DNA序列测定     

体外循环患者T细胞亚群及E花环形成的动态观察

抗人T细胞单克隆抗体(McAb)可识别人T细胞表面抗原决定簇。其中CD_3 McAb可与外周血全部成熟T细胞反应;CD_4 McAb可与T辅助/T诱导(TH/Ti)亚群反应;CD_8 McAb可与T杀伤/T抑制(Tc/Ts)     

类风湿性关节炎患者外周血淋巴细胞亚群的分析

应用抗人淋巴细胞单克隆抗体(McAb),以间接免疫荧光法(IFA),对32例类风湿性关节炎(RA)患者与32例健康人比较进行了外周血CD_3细胞(OKT_3,总T 细胞,CD_4细胞(OKT_4,T 辅助细胞,T_H),CD_3细胞(OKT_8,T 抑制细胞,T_s)和B 细胞的检测,其结果提示RA 患者的CD_3~+细胞和CD_8~+细胞显著低于健康人,其分别为P<0.001与P<0.05;CD_4~+细胞与CD_4~+:CD_8比值与健康人相似,其均为P>0.05;B 细胞显著高于健康人,为P<0.001。     

固相CD_3MCAb+IL_2诱导T杀伤细胞的实验研究

用人外周血单个核细胞(PBMC)与固相CD_3单克隆抗体(CD_3 McAb)和不同浓度的IL_2短期体外共同制备T杀伤细胞(T—activated killer,T-AK)。另以 PBMC与IL_2制备LAK细胞。经直接计数法MTT法及间接免疫荧光法检测比较此二种细胞的增殖、细胞毒活性及Tac受体的表达水平。结果表明,T-AK细胞优于LAK细胞在于增殖能力的增加而非细胞毒作用的增强,增殖的机理与IL_2/IL-2R途径有关,并提示T-AK较IL_2/LAK疗法更具有临床应用价值。     

参与IL-3信号传递细胞表面分子的特性(简报)

本实验室发现1个独特的能封闭IL-3与人靶细胞结合,并抑制造血细胞培养中IL-3克隆刺激活性的McAb HIM_1(又称HI98)。HIM_1 McAb从1个急性单核细胞性白血病(AML)细胞系上特异性地沉淀出分子量220 000的糖蛋白(gp220)。用FCM分析HIM_1染色的造血细胞,结果gp220仅在造血祖细胞,成熟粒细胞和单核细胞上表达,在红细胞样细胞、巨核细胞和淋巴细胞上阴性。McAb HIM_1和CD_(34)双标记显示,骨     

用抗小鼠T细胞单克隆抗体和补体处理供体淋巴细胞预防移植物抗宿主反应

用抗小鼠T细胞单克隆抗体C⑩(McAb C⑩)和补体在体外预先处理供鼠淋巴细胞后再转输给异品系新生小鼠或相应F_1成年小鼠,能明显抑制或预防受鼠发生移植物抗宿主反应(GVHR),表现为脾指数和自发性~3H-dT掺入量接近阴性对照组。用McAb C⑩和补体预先处理亲代小鼠淋巴结细胞后与F_1小鼠细胞作混合淋巴细胞反应(MLR)时也出现明显抑制。体内外实验结果提示,移植前用抗全T细胞McAb和补体清除移植物中的T细胞能有效地预防GVHR。     

分泌抗人IgA及补体C_3成份McAb杂交瘤细胞株的初步建立

1.抗人IgA McAb的建立从人初乳中提纯IgA。免疫BALB/C鼠,将鼠脾细胞与鼠骨髓瘤细胞SP2/0-G融合,用间接ELISA法测定抗体,得到三株分泌抗人IgA的McAb杂交瘤细胞株。腹水滴度为1∶8,100,与正常人血清作免疫电泳可见较清晰的沉淀线。其中有2株细胞经过3次有限稀释,连续传代培养2个多月,仍能持续分泌抗体。后者究属何亚类尚待确定。2.抗人C_3成份McAb的建立从正常人血清中粗提补体C_3成份。免疫BALB/C鼠。将鼠脾细胞与NS-1或SP2/0细胞融合,用抗补体免疫酶法抗、补体免疫荧光法及C_3溶血     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗后T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平变化

目的分析慢性乙型肝炎患者在抗病毒治疗前后T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平变化。方法选取我院2017年1～12月感染科收治的慢性乙型肝炎患者52例作为观察组,同时选取同期健康体检人群30例作为对照组。分别于治疗前和治疗1、2个疗程后检测肝功能、T淋巴细胞亚群、补体C3及C4水平。结果治疗前,观察组患者肝功能各指标较对照组明显升高(P0.01),CD_3~+、CD_4~+细胞及CD_4~+/CD_8~+值、补体C3、C4水平较对照组明显降低(P0.01),而CD_8~+淋巴细胞明显升高(P0.01)。治疗1个疗程后,与治疗前相比,肝功能各指标明显下降(P0.01),CD_4~+细胞、CD_4~+/CD_8~+值及补体C3、C4水平均明显升高(P0.01),CD_8~+细胞明显下降(P0.01);治疗2个疗程后,肝功能各指标、T淋巴细胞亚群、补体C3及C4水平均进一步改善(P0.01),趋向于正常。同时,研究期间观察组患者并未出现与治疗药物相关的不良反应。结论慢性乙型肝炎患者处于免疫抑制状态,给予抗病毒治疗后,T淋巴细胞亚群及补体C3、C4水平得到改善,免疫功能恢复,有益于病毒清除和病情控制。     

抗猪游离E受体McAb的研究

人、猪E受体(即CD_2)有共同抗原性,E受体具有膜结合型及游离型两种形式.人血清中游离E受体的水平,与初生、老年、妊娠、头颈部肿瘤和免疫性疾病相关。该分子从细胞表面脱落后,可以再生,提示它参与T细胞的活化与增殖反应。这些结果与1984年Meuer等提出CD_2介导不依赖于特异抗原T细胞激活的一个旁路相一致。CD_2还能增加T细胞和抗原提呈细胞或靶细胞的粘附性和可塑性,藉其体内的天然配体LFA-3与多种细胞发生反应,在机体免疫调节中起重要作用. 为进一步探讨CD_2结构与功能,本实验应用细胞融合技术,建立了三株能持续分泌抗猪游离E受体McAb的杂交瘤细胞株,并对其性质进行了研究。     

麻疹患儿急性期机体的免疫状态观察

本文观察了64例麻疹患儿急性期的T淋巴细胞亚群、红细胞免疫和免疫球蛋白的变化,结果患儿的成熟T细胞(CD_3~+)、辅助/诱导T细胞(CD_4~+)明显降低,杀伤/抑制性T细胞(CD_8~+)增高;红细胞免疫中,患儿的免疫复合物花环率增高,C3b受体花环率降低;免疫球蛋白水平无明显变化。分析发现,麻疹患儿急性期免疫功能的降低以细胞免疫为主。64例患儿中12例有麻疹疫苗接种史,其临床表现较轻,但与无麻疹疫苗接种史的患儿比较,所测免疫学指标无明显差异。     

急性甲型肝炎T细胞亚群的变化

应用流式细胞仪和OKT McAb分析了30例急性甲型肝炎外周血T细胞亚群变化,并观察其中5例的动态变化。结果表明,病程极期患者CD_4亚群百分率明显降低;CD_6亚群百分率升高;CD_4/CD__8比值明显降低。这些变化可能与HAV侵害淋巴系统及应激性免疫调动有关。     

抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的 分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,Id3)是重要的细胞生长调控分子,在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用.文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人Id3蛋白,制备抗人Id3单克隆抗体(McAb),以进一步研究Id3的生物学功能及其临床应用.方法 将重组表达载体Id3/pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化菌表达Id3重组融合蛋白(Trx-His-hId3),通过镍亲和层析柱纯化Trx-His-hId3.以纯化的Id3重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备Id3 McAb,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot进行抗体鉴定.结果 经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤,筛选出2株分泌抗人Id3 McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为McAb 6G7和6G9,免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1亚类.Western blot分析表明,McAb 6G7和6G9能与重组人Id3蛋白特异性结合.间接ELISA法检测2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为1∶ 1000、1∶ 5000.结论 成功制备了抗人Id3 McAb,为研究该蛋白的功能提供了有利工具.     

血吸虫病患者外周血IL-2水平、T细胞亚群和抑制性T细胞功能的改变

检测了各期血吸虫病患者外周血单个核细胞体外诱生IL-2的水平、T细胞亚群和抑制性T细胞(Ts)功能。急性组由血吸虫抗原诱生出高水平的IL-2,CD_3~+、CD_4~+和CD_8~+T细胞百分比均显著升高,其中IL-2水平与CD_4~+T细胞百分比呈正相关;慢性和晚期组由血吸虫抗原诱生的IL-2水平显著低于急性组,但明显比对照组高,CD_3~+T细胞百分比和CD_4~+/CD_8~+比值降低,CD_8~+T细胞百分比和Ts功能升高,IL-2水平与CD_8~+T细胞百分比和Ts功能呈负相关,其中晚期组由PHA诱生的IL-2水平明显降低。     

小儿反复呼吸道感染T细胞亚群的变化及治疗观察

目的:探讨小儿反复呼吸道感染(RRTI)T细胞亚群的变化及应用胸腺肽治疗的疗效。方法:采用间接荧光法测定40例RRTI患儿T细胞亚群(CD_3、CD_4、CD_6、CD_4/CD_8);并应用胸腺肽5mg肌肉注射,每周2次,病情稳定后改为每周1次,6周为1疗程。结果:RRTI患儿CD_3、CD_4、CD_4/CD_8明显低于对照组(P<0.01),CD_8高于对照组(P<0.01)应用胸腺肽治疗后CD_3、CD_4明显高于治疗前(P<0.01),CD_8虽然高于治疗前,但无统计学意义(P>0.5)。近期总有效率92.5％。结论:RRTI患儿T细胞免疫功能低下,应用胸腺肽治疗有效。     

T细胞亚群检测的临床意义

<正>根据T细胞表面分化抗原将成熟T细胞分为CD_4和CD_8两大亚群,CD_4为辅助/诱导T细胞,CD_8为抑制/杀伤T细胞,CD_3代表全部T细胞。T细胞亚群的检测是判断细胞免疫功能的一项重要指标,被广泛地应用于临床,下面就其临床意义作一简要综述。     

ADP-核糖聚合酶、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮患者病情活动度的关系

目的探讨ADP-核糖聚合酶(PARP)、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮(SLE)患者病情活动度的关系。方法选取2014年10月至2015年10月上海中医药大学附属曙光医院收治的84例SLE患者为SLE组,另选取同期80例正常体检者为对照组,应用蛋白印迹法测定PARP水平,散射比浊法测定补体C3水平,免疫荧光法测定外周血CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞百分率、叉头蛋白P3抗体(FoxP3~+)调节性T细胞,应用酶联免疫吸附测定检测白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平。结果 SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于对照组[(11.09±1.24)%比(6.23±1.01)%、(21.77±2.36)mg/L比(12.98±2.02)mg/L],而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于对照组[(5.24±1.02)mg/L比(7.84±2.11)mg/L、(0.84±0.22)g/L比(1.26±0.36)g/L、(3.21±0.34)%比(5.83±0.58)%、(3.62±0.52)ng/L比(4.89±1.56)ng/L,P<0.05]。重度活动性SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于轻中度组及稳定组,而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于轻中度组及稳定组(P<0.05)。SLE合并肾功能损害者FoxP3~+调节性T细胞高于SLE肾功能正常者[(12.60±0.48)%比(10.08±0.50)%],而补体C3水平、PARP、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞显著低于SLE肾功能正常者[(0.72±0.24)g/L比(0.94±0.32)g/L、(4.22±0.78)mg/L比(5.94±0.82)mg/L、(2.48±0.34)%比(3.69±0.26)%,P<0.05]。FoxP3~+调节性T细胞、IL-10与SLE活动指数呈正相关(r=0.458,0.725,P<0.05),而PARP、CD_4CD_(25)调节性T细胞、补体C3、TGF-β_1水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.412,-0.522,-0.623,-0.522,P<0.05)。结论 PARP、补体C3及调节性T细胞与SLE活动度有密切的关系,可作为SLE病情发生及进展的评价指标。     

旋毛虫幼虫单克隆抗体制备和鉴定

本实验用旋毛虫幼虫可溶性抗原,免疫BALB/c小鼠的脾细胞,与NS_1鼠骨髓瘤细胞融合后,选择4株连续分泌抗旋毛虫幼虫McAb的杂交瘤细胞。经ELISA、IFA鉴定分析,证明这4株细胞能分泌高效价特异性McAb。McAb亚类鉴定结果为IgG_3和IgG_1。是抗幼虫表面抗原,虫体抗原和虫体及囊液不同部位的特异性McAb。     

一株分泌抗淋巴细胞McAb的淋巴细胞杂交瘤的建立

本文应用人的B淋巴细胞株uc729-6做为抗原,获得一株鼠的抗正常人T和B淋巴细胞杂交瘤,命名为uc 319 McAb,该McAb对KG-1、HL60、HEL、K562及正常人骨髓细胞、粒细胞、红细胞、血小板、单核细胞均呈阴性反应。而对来源于淋巴系的细胞株uc729-6、Nalm-1、Jarkt和3例急性淋巴细胞性白血病病人的白血病细胞呈明显阳性反应。     

应用国外引进OKT系列细胞株制备抗人T淋巴细胞单克隆抗体

本文报道应用由美国ATCC引入的OKT系列细胞株,经过复苏、克隆、鉴定及制备腹水等过程产生OKT3、OKT4和OKT8抗人T细胞McAb。经鉴定OKT3为小鼠IgG2a,与87％E~+细胞和69％PBM反应;OKT4为IgG2b,与57％E~+细胞和49％PBM反应;OKT8为IgG2a,与34％E~+细胞和23％PBM反应,这与应用国外商品O(?)McAb测定的结果基本一致。故所制备的OKT3、OKT4和OKT8具备T细胞和T细胞亚群特异性。