骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析

正在临床病理外检工作中,骨髓组织由于含有大量的钙盐而比较坚硬,需经过脱钙处理后才能进行常规制片,脱钙不全或脱钙过度均影响骨髓HE染色及免疫组化染色效果,降低病理诊断的准确率。作者在长期的骨髓制片工作中,摸索出一种适合骨髓组织的改良EDTA脱钙液,提高了骨髓制片质量和染色效果。本文现就骨髓活检标本固定及取材、脱钙、制片和染色等环节进行总结,供广大同仁分析交流,共同提高骨髓活检组织制片和染色质量。     

216例骨髓脱钙时间的探讨

骨髓活检不仅关系到造血系统疾病的诊断 ,而且影响治疗及预后 ,由于骨组织是由无机钙盐构成 ,骨盐主要是羟基磷灰石的结晶 ,即磷酸钙和碳酸钙。致组织质硬 ,难以直接制片。必须经过脱钙处理后 ,才能进行常规HE制片、特染及免疫组化检查。然而 ,在临床实践中常因脱钙不全或脱钙过度等原因 ,制作不出良好的组织切片而影响病理诊断。为此 ,笔者对 2 16例骨髓活检标本脱钙时间加以总结 ,并进行改良方法以寻求最佳的制片效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　骨髓活检标本 ,4 %盐酸脱钙液 ,70 %乙醇 ,密闭容器。1.2　方法　标本签收后立即…     

骨髓活检标本脱钙方法的比较

在病理外检制片和科研工作中,血液科送检较多的是骨髓活检标本,也是较难制片的组织之一。骨髓石蜡切片需经完全脱钙,才能制成理想的石蜡切片。如何合理有效地选择脱钙液,这对于制片的完整,保存骨髓细胞结构使ＨＥ染色清晰,提高骨髓制片质量是非常重要的。我科从１９９７年初开始采用混合脱钙液代替传统的５％硝酸用于骨髓活检标本脱钙,经实际应用效果良好。１　　材料与方法①　混合脱钙液［１］：甲醛１００　ｍｌ,甲酸８０　ｍｌ,盐酸７０　ｍｌ,三氯化铝６０　ｇ,冰醋酸２５　ｍｌ,生理盐水１００　ｍｌ。②　经１０％甲醛固…     

四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景：由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的：选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法：将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论：14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸水溶液> 14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

盐酸脱钙液后脱钙在骨髓组织活检中的应用及体会

正骨髓组织活检是明确骨髓病变最主要的方法之一,但由于骨髓组织中含有大量的磷酸钙和碳酸钙,在常规制片中易致切片破碎、刀痕严重等问题,因此对骨髓组织进行充分的脱钙也显得格外重要[1-2]。目前在临床工作中,我们常使用的脱钙液有酸类脱钙液、电解质脱钙液、螯合剂脱钙液、离子交换树脂脱钙液等[2-3]。这些脱钙液作用机制不同,效果各有千秋[4]。在实际临床工作中我们对脱钙液选择的标准应该是效果强、时间短、对组织细胞形态以及对抗原影响小等[5]。本实     

改良EDTA脱钙液在骨髓活检组织中染色效果观察

正骨髓活检结合免疫组化染色对于血液系统疾病诊断、判断临床预后具有重要意义~([1])。骨髓组织细胞种类多和组织学形态丰富,部分病例需结合免疫组化染色以明确诊断~([2])。骨髓组织质地较硬,需脱钙后才能进行常规制片和免疫组化染色~([3])。其中最常用的酸类脱钙液易造成组织细胞表面抗原破坏或丢失,影响免疫组化染色结果~([4])。EDTA的脱钙作用优于酸性脱钙液~([5]),但脱钙速度慢、脱钙后组织会稍微变硬~([6])。本实验通过比较改良EDTA脱钙液脱钙骨髓与混合酸脱钙液脱钙及不脱钙骨髓的HE染色和免疫组化染色效     

骨髓活检标本石蜡包埋制片方法

塑料包埋技术用于骨髓活检有许多优点，但目前还未能完全满足病理诊断需要。经过聚合后的骨髓组织，虽然能制成较薄的切片，但如需作免疫组织化学染色就相当困难。我们经过用多种脱钙液反复试验比较，最后选用“Formical-4”脱钙液用于骨髓活检标本脱钙，不论HE或免疫组织化学染色均收到良好效果。现将108例骨髓活检标本石蜡包埋制片方法介绍如下。     

塑料包埋制片技术在骨髓诊断中的应用

塑料包埋制片技术在骨髓诊断中的应用周荣妹骨髓活检标本常用传统的石蜡包埋及ＨＥ染色法，经脱钙和长时间的固定，常使细胞形态失真和某些物质的丧失，从而影响了结果判定。至８０年代初，国外用塑料包埋薄切片技术处理骨髓活检标本，细胞收缩小，能切出１～２μｍ的满意...     

两种脱钙液对骨髓穿刺组织DNA质量的影响比较

<正>骨髓穿刺组织是病理科常见的标本,随着精准医学的发展和个体化治疗需求的增加,除了进行常规HE染色和免疫组化检测外,还需辅助分子生物学检测。良好的DNA质量是分子生物学检测的前提,脱钙液的选择对DNA质量有重要影响^[1],因此进行分子生物学检测前需要评估脱钙后骨髓穿刺组织DNA质量。混合酸脱钙液和EDTA脱钙液是本科室两种常用的骨髓穿刺组织脱钙液,在常规组织学染色方面已经取得良好的效果,但其对DNA质量的影响尚不清楚。本实验通过提取两种脱钙液脱钙骨髓穿刺组织的DNA,从浓度、纯度、片段长度及RT-PCR检测Ct值比较两种脱钙液对DNA质量的影响,取得较好效果,现报道如下。     

加热式磁力搅拌器在骨组织脱钙中应用

骨组织脱钙制片是临床病理诊断中常用的一种手段 ,而选择适当的脱钙液、脱钙方法以及掌握脱钙的时间往往与骨组织的制片质量密切相关。为了了解经脱钙后的骨组织能否应用于免疫组化和特殊染色 ,进行必要的鉴别诊断 ,我们在实践工作中特对需要脱钙的骨组织进行了实验比较 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料和仪器　收集临床手术切除的骨肿瘤、病变骨以及钙化组织标本共 5 0例 ,不同的标本根据制片要求用骨锯或骨锉处理成薄片备用。用于脱钙的磁力加热搅拌器为江苏省金坛医疗仪器厂生产的金怡牌 78 1型。1 2　方法　将准备脱钙的标本…     

石蜡包埋全喉大切片的制备及特殊染色

我们参考王德田等[1] 的方法 ,采用石蜡包埋、普通轮转式切片机 ,制成全喉大切片 ,并对其进行特殊染色。得到较好的效果。一、材料与方法1 把尸检切取的全喉和手术切除的喉癌标本根据需要在水平、冠状和矢状三个方向切开 ,选用 5 4%的甲醛固定。2 取材时应用刀锋锐利的解剖用刀 ,对已有钙化的甲状软骨用 5 %的硝酸水溶液进行脱钙 ,限 72ｈ为宜 ,脱钙后流水充分冲洗去除脱钙液。3 切片过程 :( 1)制片 :将切取的全喉组织放在适当有盖容器内依次进行脱水、透明和浸蜡。 75 %、85 %乙醇各脱水12ｈ ;95 %乙醇和 2次无水乙醇各脱水 12ｈ ;3次二…     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

甲状腺组织脱钙方式对HE染色、免疫组织化学检测结果及核酸质量的影响

目的探讨对组织蛋白与核酸损伤较小的合适的甲状腺脱钙方法。方法甲状腺钙化标本30例分成6组,每组5例,首先分析比较常规10%硝酸溶液过夜脱钙与表面脱钙之后,标本在伊红-苏木精(HE)染色、免疫组织化学、核酸质量及荧光聚合酶链反应(PCR)检测几个层面的区别;第二,比较多种脱钙液(10%硝酸、20%甲酸-盐酸、PLANK液、氯化钠盐酸甲醛液等)表面脱钙的效果是否不同。结果与过夜脱钙相比,表面脱钙之后各组HE染色质量、细胞角蛋白(CK)7免疫组织化学结果差异未见统计学意义(P>0.05),而甲状腺转录因子1(TTF1)免疫组织化学着色效果、DNA浓度与质量均明显提升(P<0.05)。各表面脱钙液之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于有免疫组织化学和分子病理检测需求的甲状腺钙化标本,表面脱钙可能是一种值得推荐的脱钙方式。     

石蜡包埋块中钙化组织的脱钙方法

石蜡包埋块中钙化组织的脱钙方法梁化印郭瑞峰杜双存刘颖成伟在常规病理切片中，骨组织的制片需在组织充分固定后，于脱水前用适宜的脱钙液脱钙。常规脱钙液品种较多，而脱钙方法并不多，且均耗时较长。特别是当被切制蜡块的软组织中有较大钙化灶时，极易损伤刀刃影响制片...     

三种骨组织脱钙方法的比较

骨组织制片是一重要环节,也是技术的一个难点。如果骨组织脱钙方法不当,会直接妨碍制片切片以及染色结果。作者对目前科研常用三种不同的脱钙方法进行了比较,从中筛选出一种较好的脱钙方法。认为10%甲酸-中性缓冲福尔马林脱钙液处理骨组织标本是一种较为理想的脱钙方法,具有很好的应用价值和推广作用。     

骨髓活检标本的透射电镜样品制备

在骨髓活检标本的透射电镜样品制备中,对固定与脱钙问题进行了实验研究,结果表明,标本先经固定、再同时固定并脱钙所制备的样品,超薄切片顺利,细胞微细结构优良。     

介绍一种骨组织快速制片法

为了提高骨组织的制片速度,以满足临床急诊的需要,我们总结出一套骨组织的快速制片法,现介绍如下: 1 脱钙液的配制先将氯化钠(10g)溶解于蒸馏水(100ml)中,再加入蚁酸(10ml)和纯盐酸(10ml)混合均匀,即可使用。2 操作方法2.1 送检的骨组织经固定后取材(厚0.3～0.5cm)常规脱水,透明、浸蜡,包埋。     

一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用

临床病理检查经常遇到骨及钙化组织标本,常规处理方法是先固定,待充分固定后进行脱钙处理,然后进入常规制片程序,到完成病理诊断需要较长的时间。如何在较短时间内完成固定、脱钙处理,其速度快、效果好,同时制成的切片又和常规处理的不含骨组织的切片一样,不影响对病变组织     

电镜制片技术在骨组织免疫组化中的应用

骨组织的电镜制片技术对组织固定与脱钙要求均远高于常规染色与免疫组化,其固定液和脱钙液与其他方法相比均有较大差别,本实验引用该方法对骨组织进行常规固定、脱钙处理,并进行骨组织免疫组化染色,取得了较理想的效果,现报道如下。1材料与方法1.1材料健康成年日本大耳白兔60只,体重2.5±0.25kg,由武汉大学动物实验中心提供,♀♂不限,根据实验要求分为实验组与对照组。一抗为鼠抗兔VEGF单克隆抗体(美国Neo Markers公司,Ab-3,JH121);二抗为超敏SP试剂盒(福州迈新公司,Kit-9701,S-P Mouse)。1.2固定液配制2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液:…     

三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果的比较

<正>骨组织是一种致密的结缔组织，细胞基质含有大量钙盐沉积，质地坚硬^[1]。骨组织必须进行脱钙处理才能制片，而脱钙过度会导致骨组织的结构被破坏，相关细胞表面抗原丢失，严重影响HE染色制片和免疫组化制片效果，影响病理诊断^[2]。脱钙液种类繁多，且尚未有相关文献报道各种脱钙液表面脱钙效果的优劣。本实验拟采用临床工作中常用的三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果进行比较，为病理医师选用合适的表面脱钙液提供参考。