中药肝复乐治疗大鼠肝纤维化模型的效应研究

目的：探讨肝复乐防治免疫性肝纤维化的效果及机制。方法：猪血清腹腔内注射复制SD大鼠肝纤维化模型,肝复乐混悬液经口灌胃干预。行病理及生化监测。结果：(1)12周,肝复乐组与模型组比较,血清ALT、β-GT降低、ALB升高,肝组织MDA、HYP降低,GSH上升。肝贮脂细胞数目减少,纤维化分级减轻。(2)肝复乐组16周与12周比较,除贮脂细胞数目无明显变化外,余改变同以上指标。结论：肝复乐可参与抑制贮脂细胞激活,促进细胞外基质降解等多个环节而减轻肝纤维化,但不能阻断肝纤维化发展。     

汉防己甲素对大鼠实验性肝纤维化的防治作用

目的:汉防己甲素(Tet)为中药粉防己根的提取物。本研究的目的为评价其抗肝纤维作用。方法:用40％CCl_41.2ml/kg体重皮下注射,2次/周,共12周,诱发SD大鼠肝纤维化。于初次注射开始,用Tet(治疗组)或盐水(对照组)灌胃,隔日1次共12周。分别于4、8、12、14周处死动物测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、肝及血清透明质酸(HA)、胶原、储脂细胞(FSC)及其细胞器。结果:Tet可使血清PCⅢ、HA及肝HA降低,肝内胶原沉积减少。治疗结束时,血清PCⅢ为61.8±21.0ug/L,而对照组为270.2±46.1ug/L(P<0.01);血清HA分别为204.0±70.8ug/L与565.2±161.9ug/L(P<0.01);肝组织HA为86.9±15.3ug/g与186.5±46.2ug/g(P<0.01)。FSC及其内织网与线粒体受抑。结论:我们的实验结果显示Tet能抑制肝内胶原的沉积,可用于治疗慢性肝病之肝纤维化。     

肝贮脂细胞与肝纤维化

贮脂细胞是肝间质细胞中兼有肌细胞、成纤维细胞及脂肪细胞性质的细胞,它在肝纤维化中的地位日益瞩目,本文就贮脂细胞的性质及其与肝纤维化的关系综述如下。 一、贮脂细胞的一般性质及分离培养 肝脏贮脂细胞(Lipocyte,Fat-storing Cell,FSC)又称Ito细胞,VitA贮存细胞、窦膜(周皮)细胞(Pericyte)、窦状隙星形细胞等。最初由Ito等(1952)描述,Wake用金浸渗法将之与肝枯否氏细胞区别。肝贮脂细胞是机体贮存VitA的主要场所,体内90％的视黄醇类物质以视黄酯,主要是棕榈酸视黄酯脂滴的形式贮存于贮脂细胞,贮脂细胞亦富含细胞视黄醇结合     

细胞因子对贮脂细胞的肝纤维化

在肝纤维化的发病过程中，贮脂细胞发挥重要的作用。ＦＳＣ的增殖、活化及其合成细胞外基质等作用涉及到诸多因素的参与，其中细胞因子对其的调控作用可能最为重要。     

肝纤维化形成的机理

肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应,以细胞外基质(ECM)在肝内过量沉积为病理特征。肝细胞损伤后的再生以及间质细胞在炎症、毒素等刺激下产生某些免疫介质或称细胞因子,这些因子以旁分泌和自分泌方式作用于靶细胞特定受体发挥生物学效应,可引起肝脏ECM的过量沉积和肝窦毛细血管化,导致肝纤维化形成。 一、细胞因子的凋控作用 肝纤维化是各种致纤维化因素引起肝脏细胞异常代谢的结果,而细胞因子通过调节细胞的生理病理状态促进或抑制肝纤维化的形成和发展。肝细胞和间质细胞以及胆管上皮细胞、淋巴细胞、血小板等均能合成肝纤维化相关的细胞因子,如PDGF、TGF、FGF等促进因子和IFN等抑制因子。细胞因子作用于靶细胞的环节各异,PDGF、TGFα能刺激贮脂细胞增殖,TGFβ则增加贮脂细胞和肝细胞合成胶原。有些细胞因子对靶细胞表现为双向性调节,TGFβ抑制贮脂细胞生长,拮抗TGFα的促增殖作用,但明显抑制刺激贮脂细胞激活过程和ECM的合成,并且外源性TGFβ尚能诱导贮脂细胞表达TGFβ,促进肝纤维化形成而具有自分泌放大效     

四甲基吡嗪对肝纤维化大鼠肝组织中肌细胞增强因子2A表达的影响

目的:观察四甲基吡嗪对肝纤维化大鼠肝组织中肌细胞增强因子2A(myocyte enhancer factor2A,MEF2A)表达的影响.方法:以SD大鼠为实验对象,采用60%四氯化碳(CCl4)皮下注射(0.3ml/ 100g体重,每周两次),复制CCl4肝纤维化动物模型.四甲基吡嗪预防组和四甲基吡嗪治疗组分别自造模之日起和造模开始后第31天给予四甲基吡嗪(10mg/ 100g体重,灌胃,1次/d).实验第12周取肝组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组动物肝组织中MEF2A mRNA表达水平;用Western blot检测各期动物肝组织中MEF2A与α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle action,α-SMA)含量.结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠肝组织中的MEF2A mRNA和蛋白及α-SMA表达增高(P＜0.01),四甲基吡嗪预防组和四甲基吡嗪治疗组大鼠上述指标高于正常组,但均低于模型组(P＜0.01,P＜0.05);大鼠肝组织中MEF2A和α-SMA表达呈正相关.结论:MEF2A表达强弱与肝纤维化程度相关,四甲基吡嗪能有效减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化,有效抑制MEF2A的表达.     

实验性肝纤维化时贮脂细胞的变化及桃仁提取物对其影响

采用免疫组化法检测肝脏石蜡切片中的贮脂细胞(FSC),发现肝纤维化预防对照组和治疗对照组的阳性细胞均明显多于正常大鼠,且以前者为显著。这反映 CCl_4造模初期 FSC 活化后增殖相当明显;当 CCl_4刺激因素去除后,FSC 活化程度减低,增殖减少。桃仁预防组阳性细胞少于预防对照组,提示当 CCl_4刺激时,桃仁提取物在某种程度上抑制了 FSC 活化和增殖;桃仁治疗组各例切片中很难找到阳性细胞,提示桃仁提取物在 CCl_1刺激因素去除后,抑制了 FSC 进一步活化和增殖。推测桃仁提取物抗肝纤维化的作用机制与其对 FSC 的影响有关。     

低密度脂蛋白对大鼠肝贮脂细胞的调控作用

目的研究低密底脂蛋白（ＬＤＬ）对大鼠肝贮脂细胞（ＦＳＣ）的调控作用。方法采用放射配体结合法检测肝ＦＳＣ是否存在ＬＤＬ受体。通过噻唑蓝（ＭＴＴ）法、透明质酸（ＨＡ）放射免疫分析法及３Ｈ－脯氨酸掺入法测定ＬＤＬ对ＦＳＣ增殖、ＨＡ及胶原合成的影响。结果大鼠肝脏ＦＳＣ上存在特异性的、高度亲和性的及可饱和性的ＬＤＬ结合位点：ＬＤＬ能促进ＦＳＣ增殖、ＨＡ及胶原合成。结论ＬＤＬ参与ＦＳＣ增殖、转化和基质合成，并可能通过受体介导影响ＦＳＣ功能。     

强肝胶囊对大鼠实验性肝纤维化防治作用

目的 研究强胶囊对四氯化碳大鼠肝纤维化预防与防治作用。方法 以CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,造模前2周及结束后分别予强肝胶囊进行防治,各持续10周;测定肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,光镜、电镜观察肝脏病理形态变化。结果 强肝胶囊预防、治疗组Hyp显著降低（P＜0．05）,胶原沉积及脂肪变性明显减轻（P＜0．05）,电镜显示强肝胶囊预防组肝细胞内脂滴明显减少,狄氏间隙内胶原纤维增生明显减轻。结论 强肝胶囊对大鼠肝纤维化具有明确防治作用。     

苦参素对实验性大鼠肝纤维化的防治作用

目的 :研究苦参素在体内的抗肝纤维化作用。方法 :用 CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型 ,设正常对照组、模型组、苦参素预防组和治疗组 ,实验结束后分别测定肝功能 ,纤维化指标 : 型前胶原 (PC- )、层粘蛋白 (L N)、透明质酸 (HA) ,并作肝组织病理检查。结果 :苦参素可显著改善肝功能 ,降低 PC- 、L N、HA水平 ,组织学检查也显示具有抗肝纤维化作用。结论 :苦参素在体内具有抗肝纤维化作用 ,可望用于肝纤维化的防治。     

川芎嗪诱导急性胰腺炎胰腺细胞凋亡及其机制的初步研究

目的研究川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对大鼠急性胰腺炎（acutepancreatitis,AP）的治疗作用,并探讨川TMP治疗AP的机理。方法采用腹腔内注射蛙皮素制备急性水肿型胰腺炎（acuteedematouspancreatitis,AEP）模型,腹腔内注射TMP,端口标记法（triphosphate-biotinnick-endlabeling,TUNEL）检测胰腺腺泡细胞凋亡,免疫组化法检测Bax基因表达,同时观察IL-6、TNF-α、CRP、AMY等变化,并进行胰腺组织形态学检查。结果采用蛙皮素腹腔注射造成AEP,发现AEP胰腺存在明显细胞凋亡。TMP可以抑制IL-6、TNF-α、CRP等表达,上调促凋亡基因Bax的表达,诱导AEP胰腺细胞凋亡。结论TMP对AEP有明显疗效,其机制与降低IL-6、TNF-α含量,抑制CRP等表达,上调促凋亡基因Bax表达,促进胰腺细胞凋亡有关。     

急性胰腺炎大鼠胰腺细胞膜流动性、钙泵活性的变化及四甲基吡嗪的影响

目的：观察大鼠急性胰腺炎（ＡＰ）时胰腺细胞膜流动性、钙泵活性的变化及四甲基吡嗪对其的影响。方法：动态测定大鼠急性胰腺炎用四甲基吡嗪治疗前后胰腺细胞膜荧光偏振度、钙泵活性、丙二醛含量、淀粉酶崐活性，并测定胰组织钙离子含量。结果：四甲基吡嗪治疗组，钙泵活性较非治疗组增高，荧光偏振度、丙二醛含量、淀粉酶活性和钙离子含量则降低。在ＡＰ非治疗组，相关分析显示荧光偏振度的增高与膜悬液中丙二醛含量，钙离子含量则成负相关，Ｐ＜０．０５．结论：用四甲基吡嗪能提高ＡＰ大鼠胰腺细胞的钙泵活性，降低膜荧光偏振崐度，减轻细胞内钙超载，从而提高了细胞膜的流动性，减轻过氧化反应。     

铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制研究

目的探讨铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制。方法随机将39只SD大鼠分为模型组和空白对照组,采用二甲基亚硝胺(DMN,10μL·kg-1)腹腔注射,制作大鼠肝纤维化模型。造模大鼠在注射DMN 1 w后,再将模型大鼠随机分为模型组(15只)和去铁铵组(12只)。两组大鼠分别自第3 w开始腹腔注射生理盐水或100 mg·kg-1去铁铵,3次/w,2 w后处死动物。取肝组织分别行HE染色、Masson染色、普鲁士蓝染色;采用免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;采用火焰原子吸收光谱法(FAAS)测定大鼠肝组织铁浓度(HIC);采用ELISA法检测大鼠血清铁蛋白、转铁蛋白;使用全自动生化分析仪检测肝功能、血清铁水平;采用PCR法检测肝组织转化生长因子(TGF)-β1 m RNA水平。结果肝组织病理学检查显示,伴随着胶原纤维的沉积、肝细胞变性坏死和肝星状细胞(HSC)大量活化,模型组大鼠铁负载显著增加;铁沿纤维间隔分布,主要沉积于库普弗细胞(KC)和HSC;模型组肝组织铁浓度为(0.778±0.098)mg/g,空白对照组为(0.436±0.043)mg/g,两组差别有统计学意义(LSD-t=5.15,P0.01);去铁铵组为(0.595±0.146)mg/g,显著低于模型组(LSD-t=-2.76,P0.05);模型组血清铁蛋白和转铁蛋白分别为(47.657±27.851)ng/m L和(0.322±0.099)mg/m L,空白对照组分别为(24.166±27.626)ng/m L和(0.653±0.170)mg/m L,去铁铵组分别为(10.261±12.466)ng/m L和(0.584±0.180)mg/m L,说明模型组铁蛋白明显增加,血清转铁蛋白明显减少,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(LSD-t=2.21和-4.78,P0.05和P0.01);去铁铵能明显降低血清铁蛋白水平,增加血清转铁蛋白水平,与模型组比较差异有统计学意义(LSD-t=-3.52和3.77,P0.05和P=0.01);模型组肝组织TGF-β1m RNA水平为(11.896±0.63),空白对照组为(2.292±0.222),两组差别有统计学意义(LSD-t=25.95,P0.01),去铁铵组为(7.481±0.745),显著低于模型组(LSD-t=-11.95,P0.01)。结论铁沉积对肝纤维化的发生发展起到重要作用,其机制可能与铁沉积于KC和HSC并促进HSC活化有关。     

螺旋藻阻断实验性大鼠肝纤维化机制的研究

研究螺旋藻阻断实验性大鼠肝纤维化的机制。实验分正常对照组、四氯化碳组、螺旋藻组 (均n =8)。后两组分别用 4 0 %四氯化碳橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型 ,螺旋藻组给予含螺旋藻精粉的指状饲料条 ,共12w。测定血清层粘连蛋白 (LN) ,Ⅲ型前胶原 (PC -Ⅲ ) ,Ⅳ型胶原 (Ⅳ -C) ,透明质酸 (HA) ,肿瘤坏死因子 (TNF -α) ,血小板源生长因子 (PDGF) ,肝组织羟脯氨酸 (HYP)含量。螺旋藻组肝纤维化程度明显轻于四氯化碳组 ,螺旋藻组LN、Ⅳ -C低于四氯化碳组 (P <0 0 5 ) ,螺旋藻组PC -Ⅲ、HA ,TNF -α ,PDGF明显低于四氯化碳组 (P <0 0 1) ,肝HYP含量亦显著低于四氯化碳组 (P <0 0 5 )。螺旋藻对实验性大鼠肝纤维化有阻断作用。其机制可能是通过抑制炎性介质的形成而发挥作用     

舒肝颗粒对大鼠酒精性肝纤维化的防治作用

目的：应用酒精性肝纤维化（ALF）大鼠模型，探讨舒肝颗粒对ALF的防治作用及其机制。方法：用乙醇灌胃的方法制备ALF大鼠模型。将雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、酒精组和舒肝颗粒干预组。实验24周末观测生化及病理指标。结果：酒精组大鼠血清层粘连蛋白、透明质酸、Ⅳ型胶原明显高于干预组和正常对照组（P〈0．01）。Masson胶原染色酒精组大鼠肝脏纤维化程度较重，干预组则无明显纤维化。SABC法免疫组化显示酒精组大鼠肝窦周围及汇管区结蛋白明显增多，而对照组和干预组仅在汇管区周围有少量结蛋白。结论：舒肝颗粒具有艮好的防治大鼠ALF的作用，其作用机制与抑制肝星状细胞激活转化、减少胶原合成有关。     

川芎嗪对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和迁移的影响

目的 探讨中药川芎有效成分川芎嗪（TMP）对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和转移的影响。方法 取对数生长期的HepG-2细胞,分别给予50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP和未加药物的阴性对照处理,采用基质粘附实验、Transwell小室迁移和侵袭实验测定HepG-2细胞活动能力,使用流式细胞仪检测HepG-2细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP2）蛋白表达情况,并计算MMP-2/TIMP2比值。结果 随着TMP浓度的加大,HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移数逐渐降低, 50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP处理组HepG-2细胞粘附率分别为（56.2±5.1）%、（36.9±4.2）%、（22.1±3.2）%,明显低于阴性对照组的【（89.4±4.6）%,P<0.05】; 100 mg/L和200 mg/L TMP 处理组HepG-2细胞迁移细胞数分别为（196.6±10.6）个/视野、（182.2±12.4）个/视野,明显低于阴性对照组的（234.6±8.7）个/视野（P<0.05）;100 mg/L和200 mg/L TMP组HepG-2细胞侵袭细胞数分别为（145.9±9.8）个/视野和（123.5±9.3）个/视野,明显低于阴性对照组的（166.3±10.2）个/视野（P<0.05）;随着TMP浓度的加大,细胞MMP-2蛋白表达量逐渐降低,而TIMP2蛋白表达量逐渐升高,与阴性对照组比,实验组细胞MMP-2蛋白表达量和MMP-2/TIMP2比值明显降低,而TIMP2蛋白表达量明显升高（P<0.05）。结论 TMP可有效抑制肝癌HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其能明显下调细胞MMP-2而上调TIMP2蛋白表达有关。     

舒肝颗粒对酒精性肝纤维化的疗效及其机制的实验研究

[目的]探讨舒肝颗粒对酒精性肝纤维化的防治作用及其机制。[方法]用乙醇灌胃的方法制备酒精性肝纤维化大鼠模型。雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、酒精组和舒肝颗粒干预组。实验24周末观察生化和病理改变。[结果]酒精组血清白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平与干预组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。酒精组Masson胶原染色纤维化较重，而干预组无明显纤维化。24周末，酒精组肝组织中丙二醛与正常组、干预组比较，明显升高（P〈0．01）；酒精组及干预组肝组织中超氧化物歧化酶活性，明显高于正常组（P〈0．05）。SABC免疫组化染色显示24周酒精组肝窦周围及汇管区结蛋白染色阳性物质明显增多，而正常组和干预组仅在汇管区周围有少量阳性物质。[结论]舒肝颗粒具有良好防治大鼠酒精性肝纤维化的作用，其作用机制可能与降低脂质过氧化、抑制肝星状细胞激活转化有关。