大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的：探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1 cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验，以及其在牙胚发育过程中的表达。方法：实验于2003-05／08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只，利用核心结合因子1 cDNA克隆产物，自行制备核心结合因子1 cDNA探针，并对同笼后11d（蕾状期）、14d（帽状期）、17d（钟状早期）及出生后1d和9d（钟状晚期）4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验，观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果：①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果，其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调，而成釉细胞呈阳性表达。结论：核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性，在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达，表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。     

牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点

目的:观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。方法:实验于2002-02/04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿(产妇知情同意),截取上、下颌骨,常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体,对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针,对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。结果:①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达,分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期,新形成的牙釉质染色阳性;成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白,在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉蛋白,呈弱阳性,前期牙本质中呈弱阳性染色;上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色,新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒,呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示,成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达,表达部位与免疫组织化学结果一致。结论:内釉上皮首先表达成釉蛋白,之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。     

牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点

目的：观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。 方法：实验于2002—02／04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿（产妇知情同意），截取上、下颌骨，常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体，对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针，对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。 结果：①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达，分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期，新形成的牙釉质染色阳性；成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白。在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉噩白，呈弱阳性，前期牙本质中呈弱阳性染色；上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色，新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒，呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示，成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达，表达部位与免疫组织化学结果一致。 结论：内釉上皮首先表达成釉蛋白，之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。     

腭裂小鼠牙胚发育中β-连环蛋白的表达

背景:牙齿发育生物学中信号传导是热点问题,β-连环蛋白是Wnt信号传导通路中的关键效应因子,其在发育的牙胚中有普遍表达,并且在内釉上皮、釉结、星网状层、中间层的表达有时空变化。目的:通过苏木精-伊红染色和免疫组化技术,观察牙胚在维甲酸诱导腭裂发生中的形态学变化及β-连环蛋白的表达变化。方法:选取C57BL/6J近交系小鼠,按雌雄比2:1于晚8时合笼,次日8时检查雌鼠,发现阴栓视为妊娠,定为E0d。18只孕鼠随机分为3组:在E10d,实验组以维甲酸100mg/kg对孕鼠行一次性灌胃,制备腭裂动物模型;植物油对照组给予10mL/kg橄榄油灌胃;空白对照组不做任何处理。结果与结论:β-连环蛋白在空白对照组E13d牙胚蕾状期、E14d帽状期、E16d钟状期上皮内均有表达,且空白对照组的表达随着牙胚发育的成熟而逐渐增加,实验组的变化趋势与空白对照组相同。3个时期的实验组β-连环蛋白在牙胚中的表达水平均高于空白对照组,植物油对照组和空白对照组表达无明显差异。提示维甲酸在诱导腭裂发生过程中,可能通过干扰上皮-间充质间的相互作用,上调β-连环蛋白在牙胚中的表达,使牙胚发育受阻。     

牙胚细胞体外培养过程中成牙基因的表达

背景：多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用,共同促进牙胚发育。 目的：观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。 方法：对体外培养后第1,3,6天的牙胚细胞提取RNA,反转录后采用实时定量PCR的方法检测牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1mRNA相对表达水平的变化。 结果与结论：牙胚细胞中牙本质基质蛋白1、成釉蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达随培养时间的延长而增加,在培养3 d时达到峰值（P 〈 0.05）,而同源异型盒基因1 mRNA的表达随培养时间的延长而下降（P 〈 0.05）。     

小鼠牙胚体外发育过程中组织形态学变化的观察

目的:建立小鼠牙胚体外立体培养的模型,组织学观察牙胚在体外培养条件下的发育过程。方法:采用Trowell培养系统对17d小鼠胚胎的牙胚进行培养,取不同的时间段的组织苏木精-伊红染色,观察牙胚在体外的发育过程。结果:体外牙胚可进一步发育,间质细胞分化为成牙本质细胞和形成前期牙本质。结论:Trowell培养系统可以维持小鼠牙胚的体外发育。     

TGF-β1 mRNA和CTGF mRNA在大鼠原代培养肺成纤维细胞中的表达

目的检测原代培养大鼠肺纤维化的成纤维细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA和结缔组织生长因子(CTGF)m RNA的表达。方法 12只Wistar大鼠,随机分为28 d正常组(生理盐水组)和28 d模型组(博莱霉素A2组),于实验第28天将大鼠处死,行HE和VG染色。分离大鼠肺组织用于体外原代培养成纤维细胞,传代后的成纤维细胞通过细胞爬片核酸原位杂交检测TGF-β1 m RNA和CTGF m RNA的表达情况。结果 HE染色显示28 d模型组肺泡结构破坏并伴有成纤维细胞灶形成,VG染色示28 d模型组肺间质可见大量红色的胶原纤维沉积。波形蛋白(vimentin)免疫组化鉴定所培养细胞为成纤维细胞。TGF-β1 m RNA和CTGF m RNA细胞爬片原位杂交结果显示,28 d模型组大鼠肺成纤维细胞胞质中可见棕黄色颗粒,两种因子均呈阳性表达,28 d正常组胞质内几乎未见黄色颗粒,两种因子均呈阴性表达。结论原代培养大鼠肺成纤维细胞中TGF-β1 m RNA和CTGF m RNA均在28 d模型组呈阳性表达,提示TGF-β1和CTGF参与了肺纤维化的发病过程。     

bach1和bach2在斑马鱼早期发育中的表达分析

目的研究bach1和bach2基因在斑马鱼早期发育中的表达规律。方法以不同发育时期的野生型斑马鱼胚胎和幼体为材料,采用地高辛标记的反义RNA探针以及整体原位杂交技术确定两个基因在斑马鱼早期发育中的表达特征。结果在斑马鱼早期胚胎发育过程中bach1,和bach2基因在整个胚胎都有表达,48hpf后其表达区域则主要集中到头部和内脏。结论bach1和bach2基因可能在斑马鱼的早期发育以及脑部和肝脏形成中发挥作用。     

核心结合因子α1在SD大鼠胫骨骨折愈合过程中的表达

目的:观察核心结合因子α1在SD大鼠胫骨骨折愈合过程中表达的变化,探讨核心结合因子α1在骨折修复中的作用。方法:实验于2003-10/2005-02在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。①将48只6个月龄雌性SD大鼠左侧胫骨制成相同的骨折模型,采用克氏针行髓腔内固定。②于骨折术后7,14,21,28d分批处死动物,采用X射线、组织学及免疫组织化学、半定量反转录-聚合酶链反应方法观察核心结合因子α1在骨折愈合过程中不同时期表达情况。结果:①X射线显示胫骨骨折断端无移位。②组织学切片显示骨折愈合过程中可同时见纤维性骨痂和软骨性骨痂形成。③核心结合因子α1免疫组织化学染色显示骨折术后第7天及14天时在增殖的间充质细胞及软骨细胞中见强阳性反应,从第21天起,核心结合因子α1染色阳性细胞数及阳性反应程度明显下降,7,14,21,28d各时间点免疫组织化学染色的平均吸光度值分别为0.568±0.013,0.534±0.016,0.313±0.011,0.277±0.008。④反转录-聚合酶链反应结果表明骨折术后第7天及14天时核心结合因子α1mRNA表达量较高,第21天及28天时,核心结合因子α1mRNA表达下调,各时间点基因表达的相对强度均值分别为1.935±0.231,2.103±0.264,0.956±0.045,0.527±0.038。结论:在SD大鼠胫骨骨折髓腔内内固定模型中,骨愈合主要表现为二期愈合方式,核心结合因子α1集中表达在骨痂形成的早期,说明核心结合因子α1是骨折愈合的启动调节因子之一。     

腺病毒介导RNA干扰抑制核心结合因子α1表达阻断软骨细胞的肥大分化

背景:软骨细胞肥大分化是软骨内骨化启动的标志,也是软骨内骨化必不可少的步骤,它是一种级联反应,一旦启动就很难阻断,最终结果是形成骨骼结构。RNA干扰技术是一种转录后水平的基因沉默,相关研究显示采用RNA干扰技术阻断核心结合因子α1表达能够有效地抑制异位骨化形成。目的:利用RNA干扰技术抑制核心结合因子α1表达,从而阻断大鼠软骨细胞肥大分化。方法:构建沉默SD大鼠核心结合因子基因的腺病毒Ad-Cbfa1-si RNA。利用维甲酸及白细胞介素1α促进软骨细胞肥大分化,观察Ad-Cbfa1-si RNA对核心结合因子α1表达的抑制作用。利用核心结合因子α1免疫组化方法比较各组核心结合因子α1的表达从而分析软骨细胞的肥大分化情况。结果与结论:经维甲酸和白细胞介素1α诱导后,阴性对照病毒组软骨细胞出现肥大分化,核心结合因子α1的表达呈阳性反应;Ad-Cbfa1-si RNA组软骨细胞中未见核心结合因子α1明显表达。提示利用RNA干扰技术能够明显抑制核心结合因子α1的表达,从而阻断软骨细胞的肥大分化。     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

精神疾病患者家属教育的情况分析

目的：通过对精神疾病患者家属教育的调查，探讨家属教育的内容和教育方式。方法：采用自拟问卷对参加系列教育的家属进行调查分析。结果：患者和家属接受教育次数越多，对疾病知识了解越多；在患者的亲属中患者的父母参加教育比率较大。结论：家属教育对治疗疾病起着积极的作用，应更具有针对性，同时还应该注意教育方式。