琼脂糖凝胶中DNA的回收

用冻结压榨法、玻璃粉吸附洗脱法和透析袋电洗脱法，分别从琼脂糖凝胶中回收日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，经ＢａｍＨ Ｉ及ＥｃｏＲ Ｉ双酶切的线状质粒载体ｐＴｒｃＨｉｓ Ａ，以及碱裂解法制备的质粒载体，均取得较为满意的回收率。冻结压榨法适于回收少量的ＤＮＡ，透析袋电洗脱法适于回收较大量ＤＮＡ，玻璃粉吸附洗脱法则应用范围较宽。     

分离乳酸脱氢酶同工酶的琼脂糖凝胶电泳法改进

作者改进了琼脂糖凝胶电泳法用以分离乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶，可以提高电泳分离的效果，避免胶层开裂或脱落，提高扫描曲线的分辨率。     

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡,开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法问题,作者从凋亡细胞的特性性核ＤＮＡ片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核ＤＮＡ片段检测方法以及近年来的一些新进展。     

琼脂糖凝胶电泳法快速筛选轮状病毒

本文用琼脂糖凝胶电泳检测轮状病毒RNA,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果相比较,结果43份聚丙烯酰胺凝胶电泳阳性的标本,琼脂糖凝胶电泳亦均为阳性。两种方法检测轮状病毒RNA的敏感度一致,而琼脂糖电泳省时、简便、经济。可作为一种快速方法用于轮状病毒感染的筛选和快速诊断。     

尿蛋白琼脂糖凝胶电泳及临床应用

1997年底我们引进了法国 Sebia公司的全自动电泳扫描系统 ,建立了尿蛋白琼脂糖凝胶电泳技术并应用于临床。现报告如下。1　仪器、试剂与方法1.1　 Hydrasys自动程控电泳系统 ,Hyrys光密度仪购自法国 Sebia公司 ;琼脂糖凝胶板、浓缩电泳缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品预染液购自 Sebia公司 ;15 %醋酸脱色液、15 %甘油贮存液自配。1.2　方法1.2 .1　尿蛋白定量 :磺基水杨酸—硫酸钠浊度法。1.2 .2　尿蛋白电泳 :收集 2 4小时新鲜尿液 ,蛋白浓度控制在 2 g/ L以内 ,尿液经预染液预染后 ,加 5μl样品于凝胶片加样槽中 ,扩散 10 m in,将加样端…     

尿蛋白琼脂糖凝胶电泳分析及临床应用

电泳法分离鉴定尿蛋白具有重要的临床意义。目前临床常用醋酸纤维素薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定尿蛋白。前一种电泳法虽操作简单,但敏感度低,后一种电泳法虽分辩率高,但操作繁琐。我们采用薄层平板琼脂糖凝胶电泳分离鉴定尿蛋白,既克服上述两种电泳法的缺点,又取得较好的效果,易于在一般实验室推广应用。     

乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳的改良

临床实验室测定乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）同工酶的方法目前分为二类，一类是应用免疫抑制法在自动生化分析仪上测定，另一类是做各种载体的电泳来分离区带。我们对醋酸纤维膜和琼脂糖两种载体进行实验，改良了琼脂糖凝胶电泳的方...     

谈琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法

本文详细介绍了琼脂粮凝胶电泳标本的拍摄方法，并提出获得高质量图片的具体措施。     

琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

目的：对琼脂糖凝胶电脉法同时测定血清极密度脂蛋白（VLDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）和脂蛋白（a)Lp(a）的胆固 即VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C含量的方法进行评价。方法：采用Helena REP全自动快速电泳系统分离血清VLDL,LDL,HDL和Lp(a),然后结合胆固醇染色法同时测定VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C的含量,分别了该法的精密度,准确度和干扰因素,并将该法与传统方法如测定HDL－C的磷钨酸－镁沉淀法（PTA－Mg2 )法,测定LDL－C的聚乙烯硫酸沉淀法（PVS法）及测定Lp(a)的免疫秀射比浊法（ITA法）进行比较,结果：电泳法测定VLDL－C,LDL－C和HLD－C批内CV分别为5．16％－7．46％,1.26％－3．28%,3．78－5．86％;批间CV分别为8．35％－11．25％,2．78％－4．08％,4．23％－6．36％。检测线性范围总胆固醇为94．3％和89．6。电泳法与传统法测定LDL－C,HDL－C的相关系数（r)分别为0．9609,0．9557,电泳法测定Lp(a)-C与ITA法测定Lq(a)的r为9235,以该法检测北京地区98例健康人,HDL－C,VLDL－C,LDL－C,Lp(a)－C参考范围分别为0．95－2．10mmol/L,0.07-0.46mmol/L,1.77-2.87mmol/L,0-0.22mmol/L。结论：电泳法测定值与传统法一致,电泳法操作简便,快速经济,可同时测定4种脂蛋白胆固醇,适合于临床常规及研究使用。     

提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件

目的　确定提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件 .方法　回收的基本步骤遵循试剂盒附带的厂家说明 ,在此基础上 ,改变其中所用试剂的剂量 ,或者添加原试剂盒中没有的试剂 ,并在不同条件组合下分别进行 DNA回收 .电泳后 ,通过比较条带的亮度来比较不同条件下 DNA回收效率的大小 ,逐步确定最佳的胶回收条件 .结果　提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件为 :切胶要尽量的小 ;每 l g胶用 6 0 0 μL的 S1;溶胶时间 :5 5℃ ,10 min;沉淀时加入 3/ 5总体积的异丙醇和 1/ 10总体积的乙酸钠 (3mol· L- 1 ,p H5 .2 ) ;沉淀时间 2 0 m in;沉淀温度为 2 5℃ (室温 ) ;用 T1液溶解效率高于用水溶 ;溶解时间为 2 0 m in (5 5℃ ) .这些最佳条件中 ,大部分都对原来的条件进行了改良 .结论　应用了改良后的胶回收条件后 ,胶回收的效率提高到原来的3～ 4倍     

琼脂糖凝胶电泳法的探讨

琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化 DNA或 RNA片段常用的方法。传统的琼脂糖凝胶电泳方法不但倒胶繁琐、费时 ,而且时有 DNA扩散等非特异现象。笔者为此进行改良并应用于 32种探针的鉴定和纯化 ,结果报告如下。1　材料与方法1.1　材料　标准分子量的 DNA及待测探针 32种。仪器 :稳压稳流电泳仪 (DYY 型 ,上海医用分析仪器厂 ) ;琼脂糖电泳仪 (FD2 0 1型 ,北京六一仪器厂 ) ;紫外线核酸检测仪 (2 DJ型 ,上海顾村电光仪器厂 )。试剂的配制见参考文献 [1,2 ]。1.2　方法　 (1)用胶带将电泳床两端开口封好 ,形成一模 ,水平放置台面 (用…     

琼脂糖凝胶区带电泳应用于蛋白尿的分析

目的：运用琼脂糖凝胶区带电泳进行蛋白尿的分析。方法：采用血清琼脂糖凝胶区带电泳技术分析未经处理和处理后的蛋白尿样本。结果：通过对95例临床尿蛋白阳性标本进行琼脂糖凝胶区带电泳，可粗略区分出溢出性蛋白尿2例、选择性蛋白尿30例、非选择性蛋白尿63例，5例健康组未检出蛋白峰。结论：该法简便快速，在蛋白浓度较高时有很好的重复性，可用于尿蛋白的分析，经透析浓缩处理后的样本电泳效果更好。     

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择

目的 比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考。方法 用24 mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色。后2种配合不同的显色剂显色。结果 前2种未显色,0.1%及0.2%硝酸银可显色。结论 0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有最高的灵敏度;0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有最佳的显像效果。     

应用单细胞凝胶电泳技术检测K562细胞 DNA损伤的研究

目的用单细胞凝胶电泳技术来探讨一种能方便检测细胞DNA损伤的方法。方法在Singh等人的方法的基础上，加入过氧化氢作为DNA致突变剂来观察K562细胞的DNA损伤。结果在培养K562细胞的过程中，加入了下同浓度的过氧化氢，我们发现了DNA损伤与过氧化氢剂量之间存在着线性相关关系。结论这种在本实验室建立起来的用于检测细胞DNA损伤的方法易于操作，结果令人满意，并更具实用性。     

单细胞电泳观察双氢青蒿素对K562细胞DNA的损伤作用

【目的】研究双氢青蒿素对人红白血病K562细胞DNA的损伤作用。【方法】体外培养人红白血病K562细胞,加不同浓度双氢青蒿素处理24 h后,MTT法测定IC50;用单细胞凝胶电泳技术观察双氢青蒿素对K562细胞DNA的损伤情况。【结果】双氢青蒿素处理细胞后,MTT检测IC50为8×10^-5mol/L;单细胞凝胶电泳显示双氢青蒿素作用24 h后可见明显的彗星状拖尾,而对照组细胞呈现明亮圆点。【结论】双氢青蒿素可抑制K562细胞的生长,对其DNA有致损效应。     

单细胞凝胶电泳技术研究兔牙髓细胞核DNA降解的时间效应

目的研究DNA降解变化与死亡时间关系,探讨兔死后牙髓细胞核DNA的降解机理及寻找灵敏、实用的DNA降解监测指标,为死亡时间的法医学研究提供一种新的方法和技术。方法利用快速、灵敏的检测细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳(SCG)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,以"彗星样"细胞出现率(计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例)、头半径、尾长度、头/尾DNA含量比例、Oliver矩、尾矩、头面积和尾面积来评价死后兔牙髓细胞核DNA的降解程度。结果在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径,头DNA含量比例,头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程(P<0.001),具有显著的统计学意义。结论应用单细胞凝胶电泳技术,监测机体死后牙髓细胞核DNA降解变化,将会成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

单细胞电泳检测放射诱导人淋巴细胞DNA损伤

单细胞电泳(SCG)具有快速、灵敏和简便等优点,并可检测出单个细胞DNA的损伤程度,这对研究具有高度组织和细胞特异性的肿瘤方面有特殊意义。通过延长SCG技术的标准碱化时间,可以检测出更低剂量放射诱导的人淋巴细胞DNA单链断裂和碱基损伤,使这一技术更加敏感,在低剂量放射作用研究方面有应用价值。     

单细胞凝胶电泳法检测双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤

目的 采用单细胞凝胶电泳法研究双酚A对小鼠睾丸细胞DNA的影响.方法 制备小鼠生殖细胞悬液,用不同浓度的双酚A染毒1 h后,应用单细胞凝胶电泳法检测睾丸细胞DNA损伤情况.结果 与对照组比较,除10-10 mol/L组外,其他各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P＜0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P＜0.05),在10-5 mol/L和10-6 mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论 双酚A体外染毒可造成小鼠睾丸细胞DNA损伤,且随着剂量的增加有加重的趋势.