免疫微球检测金黄色葡萄球菌与链球菌研究

目的建立一种新型、快速的检测病原菌方法。方法以金属鳌舍免疫化微球、醛基免疫磁性微球和氨基免疫化磁性微球为载体，利用金黄色葡萄球菌表面A蛋白、G群链球菌表面G蛋白与IgG分子特异性结合的原理，富集检测病原菌。蛄果制备的三种免疫磁性微球每克均可在2h内至少固定60rag人IgG，经SDS—PAGE和wester Blot分析，也均能在1h内鉴定出分离得到的金黄色葡萄球菌和G群链球菌，且以醛基化免疫磁性微球检测效果最好。结论以免疫微球检测金黄色葡萄球菌和链球菌操作稳定性，成本低，有望在临床检验以及微生物检测等方面得到广泛应用。     

免疫磁性微球快速分离检验金黄色葡萄球菌新技术的研究

目的对采用免疫磁性微球快速分离方法对金黄色葡萄球菌进行检测的方法和效果进行研究分析.方法采用制备得到的金属螯合免疫磁性微球对金黄色葡萄球菌A蛋白进行分离、对免疫印迹进行分析,并对金黄色葡萄球菌进行捕捉、进行灵敏度试验.结果在显微镜下制得的磁性微球的分散状态非常理想,其红外光谱检测结果显示,该类微球的表面存在螯合铜离子和羧基,该微球的结构蛋白为金黄色葡萄球菌A蛋白,可以对金黄色葡萄球菌进行成功捕获,检测的下限可以达到100CFU水平,该微球的活性一般情况下可以维持3个星期作用.结论采用免疫磁性微球快速分离方法对金黄色葡萄球菌进行检测的效果非常理想.     

模拟肺癌外周血微转移癌细胞富集检测方法的建立

目的 制备特异的纳米免疫磁性微球,结合免疫细胞化学技术研制肺癌细胞富集检测试剂盒,探讨在肺癌患者外周血中微转移癌细胞检测的可行性及灵敏度.方法 用反相微乳法制备纳米磁性微球,然后以碳二亚胺为交联剂将抗体与微球连接,制备纳米免疫磁性微球;将人肺腺癌细胞(A549)与PBMC及全血混匀建立癌细胞微转移模型,经纳米免疫磁性微球吸附和磁性分离后进行肺癌细胞的免疫细胞化学鉴定,检测此方法的特异性及灵敏度,建立癌细胞富集检测方法.结果 制备的纳米免疫磁性微球能够特异地与A549细胞结合并能将细胞磁性分离,当PBMC与A549比为5×106:1时可检测到癌细胞,并且能检测出1 ml外周血中1个癌细胞,未有假阳性.结论 制备的肺癌细胞富集检测试剂能有效的从外周血中分离和鉴定出微转移的癌细胞,具有较高的灵敏度,为临床提供了一种简便、快速、敏感的肿瘤微转移病灶检测技术,可提高肺癌转移及复发的诊断率. 匀建立癌细胞微转移模型,经纳米免疫磁性微球吸附和磁性分离后进行肺癌细胞的免疫细胞化学鉴定,检测此方法的特异性及灵敏度,建立癌细胞富集检测方法.结果 制备的纳米免疫磁性微球能够特异地与A549细胞结合并能将细胞磁性分离,当PBMC与A 49比为5×106:1时可检测到癌细胞,并且能检测出1 ml外周血中1个癌细胞,未有假阳性.结论 制备的肺癌细胞富集检测试剂能有效的从外周血中分离和鉴定出微转移的癌细胞,具有较高的灵敏度,为临床提供了一种简便、快速、敏感的肿瘤微转移病灶检测技术,可提高肺癌转移及复发的诊断率. 匀建立癌细胞微转移模型,经纳米免疫磁性微球吸附和磁性分离后进行肺癌细胞的免疫细胞化学鉴定,检测此方法的特异性及灵敏度,建立癌细胞富集检测方法.结果 制备的纳米免疫磁性     

免疫磁性微球快速分离检验金黄色葡萄球菌新技术的研究

目的建立一种新型、快速的检测金黄色葡萄球菌的方法。方法制备金属螯合免疫磁性微球,用显微照相仪直接观测磁性微球的大小及表面形态,用红外光谱仪检测磁性微球表面集团,测定其特征及吸收峰。制得的磁性微球用于分离SPA蛋白、免疫印迹分析,并捕捉金黄色葡萄球菌及其灵敏度实验,验证磁性微球的稳定性。结果磁性微球在显微镜下分散良好,直径介于5~15μm。微球的红外光谱图显示微球表面存在羧基和螯合铜离子。磁性微球结合的蛋白为SPA蛋白,能够成功地捕捉到金黄色葡萄球菌且检测下限可达100 CFU。磁性微球可保持活性达3周以上。结论此检测方法速度快、成本低,在临床检验以及微生物检测等方面具有广阔的应用前景。     

甘草的免疫学鉴定方法研究

目的 利用种属特异性蛋白建立一种生药甘草的免疫学鉴定方法。方法 选用生药甘草为实验对象，利用抗甘草总抗原血清并结合Western—blot的结果确定甘草种属特异性蛋白(RGP)。分离纯化该蛋白抗原并制备和生物素标记其特异性抗体，建立夹心式ELISA法用于甘草的分析鉴定。结果 该方法灵敏度高、专属性强，对不同产地及品种的甘草显示了良好的特异性，可以用于生药的鉴定和分析。结论 以甘草自身的特异性蛋白为指标的免疫学分析方法，将为生药甘草的品种鉴定及中药材的质量管理提供一条新的途径。     

抗人大肠癌免疫磁性白蛋白微球的抗癌效果

目的:观察自制丝裂霉素C免疫磁性白蛋白微球(MMC-IMAMS)体外及体内抗大肠癌效果。方法:将丝裂霉素C免疫磁性白蛋白微球(MMC-IMAMS)与丝裂霉素C磁性白蛋白微球(MMC-MAMS)、单纯丝裂霉素C(MMC)比较,MTT法分别检测其体外对大肠癌细胞株LoVo的杀伤作用,然后通过移植人大肠癌裸鼠模型检测体内的肿瘤抑制率。结果:体外实验丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球较单纯丝裂霉素磁性白蛋白微球有更强的肿瘤细胞抑制效率;裸鼠模型体内实验丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球组肿瘤抑制率较丝裂霉素磁性白蛋白微球组和单纯丝裂霉素组具有显著差异。且丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球是安全的,在体外磁场作用下可较长时间内沉积于靶区。结论:丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球安全性好,靶向性更强大,体内体外均有更强的抗癌效果。     

A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

[摘要] 目的 制备和鉴定A型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体,建立A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法,用于A型流感病毒感染的实验室早期诊断。方 法 利用杆状病毒系统表达A型流感病毒核衣壳蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用双抗体夹心ELISA捕获法建立检测A型流感病毒核衣壳蛋白的方法。 结果 获得8株、共识别4个A型流感病毒核衣壳蛋白不同抗原位点的单克隆抗体,选择以单抗2B8A11作为捕获抗体,以C16A15作为检测抗体为最佳抗体对,建立双抗体夹心ELISA捕获法。检测流感患者的当日采集和冻存的呼吸道标本,与病毒分离培养方法的符合率分别为100%和42.9%;与B型流感病毒和其他呼吸道病毒无交叉反应。检测流感患者当日采集的呼吸道标本敏感性高于德国Serion试剂盒（P＜0.001）,与RT-PCR方法比较差异无显著性（P=0.5）。结论 成功建立了灵敏度高、特异性强的A型流感病毒核衣壳蛋白抗原的ELISA捕获法,为A型流感病毒感染的实验室早期诊断提供技术方法。     

不同变异类型甘草中甘草苷及甘草酸量比较研究

目的 对人工栽培群体不同变异类型甘草中甘草苷及甘草酸的量进行分析，遴选优良的变异类型，为甘草优良品种选育提供理论依据。方法 采用HPLC法，以甘草苷、甘草酸量为检测指标，对变异类型甘草药材样品进行比较分析。结果 甘草苷、甘草酸量在各变异类型甘草药材中的量存在较大差异。绿茎茎光滑类型、绿茎叶片皱褶类型甘草中甘草苷及甘草酸量较高。结论 甘草表型的变异已经引起了化学成分的变化，可以通过遴选优良的变异类型，培育高产、优质的甘草栽培品种。     

使用磁性亲和载体纯化rhIFNα

目的：合成可用于分离基因重组干扰素－α的α－ｇａｒｏｓｅ－单克隆抗体磁性微球，并建立一套磁性亲和载体分离蛋白质的方法．方法：使用物理包埋法制备磁性ａｇａｒｏｓｅ载体，使用ＣＮＢｒ法将抗体连接在磁性微球上制备磁性亲和载体．结果：通过优化合成条件，确定单抗的合成条件为ＣＮＢｒ活化用量为２００ｇ／Ｌ磁性载体，单抗的最大偶联量为１５．１ｇ／Ｌ磁性载体．使用磁性单抗载体进行一步纯化，纯化后ＩＦＮ－α的比活性为１．０ｘ１０１１ＩＵ／ｇ，电泳后使用考马斯亮兰染色其纯度为８８％，活性回收率７０％．结论：磁性亲和技术是一个简单、快速分离蛋白质的好方法．     

从甘草中提取甘草次酸的工艺及研究

目的:考察不同制备方法对甘草中甘草次酸含量的影响。方法:同一批甘草药材分别采用煎煮法、超声波法、纤维素酶-超声波联用提取工艺。结果:不同工艺对甘草中甘草次酸含量的影响不同。纤维素酶-超声波联用提取工艺较佳。结论:联用法提取率高,方法简便,利于工业化生产。     

量子点快速检测弓形虫IgG抗体方法的建立及初步应用

目的 建立一种简便、快速的人弓形虫(Toxoplasma,TOXO)IgG抗体检测新方法,并在临床初步应用.方法 应用TOXO抗原包被羧基磁珠作为固相载体,量子点标记羊抗人IgG作为检测抗体,建它TOXO IgG检测方法,同时优化检测条件;对255份临床血清标本进行了检测,并与意大利DiaSorin TOXO IgG ELISA试剂进行比较.结果 检测最佳条件为:抗原包被浓度100 μg/ml,量子点标记二抗工作浓度为1∶200,待测血清稀释度为1∶100.本方法的诊断敏感性、特异性分别为93.3%、96.7%,与进口试剂盒的总符合率为96.5%.结论 基于量子点标记及免疫磁珠技术检测TOXOIgG,操作简便、快速,具有较高的特异性、敏感性和有较好的临床应用价值.     

粉甘草去除栓皮的净制加工合理性研究和探讨

目的：对比甘草Glycyrrhizae Radix et Rhizoma栓皮与未去栓皮甘草中的化学成分,探讨粉甘草净制加工中去除栓皮的合理性。方法：采用TLC法,分析甘草栓皮与未去栓皮甘草中化学成分的差异,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）为展开剂,10%硫酸乙醇溶液显色,在紫外灯（365nm）下检视。结果：甘草栓皮供试品色谱中,在与未去栓皮甘草供试品色谱和甘草对照药材色谱相应的位置上,均未显相同颜色和大小的荧光斑点。结论：甘草栓皮与未去栓皮甘草中的化学成分有较明显的不同,推测粉甘草在净制加工中去除栓皮是有一定原因的。     

经方中甘草运用撷英

考据《伤寒杂病论》原文,从用量用法、主治证候、配伍应用3个方面,考查相关经方中甘草的运用规律。发现:经方中甘草的用量以27.8 g居多,最多可用至69.5 g,最小用至3.5 g;生甘草多用于热证、疔毒、疮疡、饮证等,而炙甘草多用于表证、中焦虚弱、脾胃虚寒、中气不足、营卫不和等证;经方中未标注用法的甘草并非一定是生甘草,应根据病因、病机、病证以及甘草在方中的作用而定;经方中的炙甘草应当是“炒甘草”,而非蜜炙甘草;甘草能调和诸药,在不同的方剂(可用于散剂、攻剂、温剂、清剂、毒剂)中发挥不同的功效,当方中甘草用量较大或与方中其他药物等量时又可明显体现出主治作用,如治疗肺系疾病、心悸、羸瘦、产后虚等,并能很好地缓解躁、急、痛等症状;甘草常与麻黄、桂枝、大黄、桔梗、芍药、干姜、小麦、大枣等配伍,功效显著。     

新疆、甘肃地区甘草质量评价研究

目的 比较新疆与甘肃地区甘草的性状、鉴别特征和有效成分含量,研究在不同生长条件下我国甘草主产区的药材和饮片质量,为甘草的后续开发与利用提供理论依据。方法 采用性状鉴别法对性状进行描述,采用显微鉴别法展现甘草粉末和切片的结构特征,采用高效液相色谱法测定有效成分含量。结果 在性状方面,新疆甘草药材比甘肃甘草药材平均直径略大;在显微方面,两个产地具有基本相同的结构,但新疆家种甘草的淀粉粒数量略多,且平均粒径也略大;在含量方面,新疆甘草中甘草酸平均含量约为甘肃甘草酸平均含量的1.5倍。结论 新疆、甘肃地区甘草的鉴别和质量评价为甘草药材的质量标准研究及甘草药材的后续开发提供理论依据。     

甘草不同器官RNA提取方法研究

目的优选从甘草不同器官中提取高质量RNA的方法,为研究甘草药用成分合成酶基因克隆和基因表达奠定基础。方法比较异硫氰酸胍法、柠檬酸钠法所提取的甘草根木质部、根皮部、根茎、叶中RNA的纯度和得率。结果异硫氰酸胍法能从根的木质部、根皮部和根茎中提取出质量较好的RNA,但不能从甘草叶片中提出RNA;柠檬酸钠法能从叶片中提取出质量较高的RNA。结论异硫氰酸胍法和柠檬酸钠法分别是提取甘草根木质部、根皮部和根茎及叶片中RNA的有效方法。     

粉甘草去除栓皮的净制加工合理性研究和探讨

目的:对比甘草Glycyrrhizae Radix et Rhizoma栓皮与未去栓皮甘草中的化学成分,探讨粉甘草净制加工中去除栓皮的合理性。方法:采用TLC法,分析甘草栓皮与未去栓皮甘草中化学成分的差异,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液显色,在紫外灯(365nm)下检视。结果:甘草栓皮供试品色谱中,在与未去栓皮甘草供试品色谱和甘草对照药材色谱相应的位置上,均未显相同颜色和大小的荧光斑点。结论:甘草栓皮与未去栓皮甘草中的化学成分有较明显的不同,推测粉甘草在净制加工中去除栓皮是有一定原因的。     

蒿甲醚、甘草对实验性弓形虫病的疗效

小鼠腹腔接种１万个速殖子，２ｈ后分别灌胃给予：甘草３２ｇ／ｋｇ、甘草１６ｇ／ｋｇ、蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ、蒿甲醚１００ｍｇ／ｋｇ、乙胺嘧啶５０ｍｇ／ｋｇ及５％淀粉溶液（对照组），连续１４ｄ。甘草各组与对照组小鼠死亡天数无差异。蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ组的疗效与乙胺嘧啶组接近。图象分析表明：蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ组的虫体，其周长、面积、体积均数大于对照组说明虫体有肿胀。在透射电镜下，速殖子的核膜消失，染色质减少，对类锥体、棒状体等细胞器无影响。作者首次在实验弓形虫病中证明蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ的疗效与乙胺嘧啶５０ｍｇ／ｋｇ接近，并探讨了其作用机理。     

科学利用甘草,保护我国生态环境和药材资源

甘草不仅是我国最常用的药材之一,而且在制药、食品、化工和印染等方面都有广泛应用。同时甘草也是我国西北地区重要的固沙和绿化植物,有重要的生态价值。为引起人们对甘草生态价值的重视,同时指导人们正确利用甘草资源,本文对甘草的生态价值、资源状况和药用特点进行了简要论述,并对甘草的使用和替代药物的研究提出建议,以促进科学利用甘草,保护我国西北地区脆弱的生态环境和药材资源,实现甘草资源的可持续利用。     

不同产地甘草的聚类分析

目的对不同产地甘草Glycyrrhizauralensis的HPLC指纹图谱进行研究,并对HPLC指纹图谱结果进行聚类分析,以探讨产地对甘草药材活性成分积累的影响。方法以甘草药材所含活性成分为分析对象,选择适宜的HPLC条件,建立了甘草指纹图谱分析方法,并对该方法进行了考察。以甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素5个活性成分峰面积的标准化结果对17批样品进行了聚类分析。结果方法学考察结果表明,本研究建立的分析方法有较好的重现性,不同产地甘草中甘草酸和甘草黄酮的量存在较大差别。结论甘草活性成分的积累与产地有一定的相关性。