老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡及相关基因蛋白的表达

目的 探讨老年性白内障与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法透射电镜下观察老年性白内障晶状体上皮细胞的超微结构；Tunel法检测凋亡细胞百分率；并对其晶状体上皮细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳；免疫组化法检测P53、bcl-2在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达。结果 透射电镜下发现老年性白内障晶状体上皮细胞中有凋亡细胞；凋亡细胞百分率为8．4％～37．8％，琼脂糖凝胶电泳出现梯状条带；P53在老年白内障晶状体上皮细胞中蛋白表达率为16．9％～19．1％，bcl-2无蛋白表达。结论 老年性白内障的发生可能与其晶状体上皮细胞凋亡有关。     

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞凋亡与增殖特性的实验研究

目的观察糖尿病性白内障晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡、增殖特性的变化,探讨糖尿病性白内障发生的相关机制.方法采用四氧嘧啶诱发兔糖尿病性白内障模型,定期监测血糖和观察晶状体的变化.TUNEL技术标记凋亡的LECs,测定凋亡百分率和晶状体上皮细胞密度,并用免疫组化SABC法检测LECs中增殖细胞核抗原的表达及积分光密度(A)值.结果TUNEL染色显示模型组兔晶状体上皮细胞中有凋亡阳性细胞,糖尿病性白内障模型组与同期正常对照组比较,其LECs凋亡百分率显著升高(P＜0.01),且随观察期内时间推移和晶状体混浊程度的加重呈明显上升趋势;早期2组晶状体上皮细胞密度和增殖细胞核抗原积分光密度(A)值的变化无显著性,但随着观察期内高血糖持续时间的延长(8周后),2组间差异日趋显著(P＜0.01).结论糖尿病性白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡及增殖特性的改变有关.     

p53和 bcl-2在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的：研究p53,bcl-2基因在老年性白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达，探讨p53,bcl-2在老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡中的作用。方法：应用免疫组织化学方法，对30例老年性白内障及10例正常透明晶状体上皮细胞进行p53,bcl-2基因蛋白表达的检测，计算p53,bcl-2基因蛋白表达阳性细胞百分率，结果：p53在正常晶状体上皮细胞中无蛋白表达，在老年性白内障晶状体上皮细胞中蛋白表达率为16．9％－19．1％，bcl-2在2组中均无蛋白表达，结论：p53在老年性白内障晶状体上皮细胞中蛋白高表达，p53可能促进了老年性白内障中晶状体上皮细胞的凋亡。     

P53和bcl-2在老年性白内障晶体上皮细胞中蛋白表达的研究

目的：研究P53，Bcl-2基因在老年性白内障晶体上皮细胞中的蛋白表达。探讨P53，bcl-2在老年性白内障晶体上皮细胞凋亡中的作用。方法：应用免疫组织化学方法，对30例老年性白内障及10例正常透明晶体上皮细胞进行P53，bcl-2基因蛋白表达的检测，计算P53，bcl-2基因蛋白表达阳性细胞百分率。结果：P53在正常晶体上皮细胞中无蛋白表达，在老年性白内障晶体上皮细胞中蛋白表达率为16.9-19.1%,bcl-2在两组中均无蛋白表达。结论：P53在老年性白内障晶体上皮细胞中蛋白高表达，P53可能促进了老年性白内障中晶体上皮细胞的凋亡。     

老年性及先天性白内障晶状体上皮细胞凋亡及相关基因的表达

目的探讨老年性及先天性白内障患者晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及其相关基因表达的关系。方法采用原位末端标记及免疫组织化学的方法,对30例老年性白内障患者、15例先天性白内障患者及15例正常人LECs中的凋亡细胞及c-fos、c-jun等相关基因蛋白的表达进行检测。结果30例老年性白内障患者LECs凋亡率为15·10%±7·83%,正常对照组为0(P<0·01),先天性白内障组0·01%±0·028%(P>0·05)。老年性白内障组中c-fos及c-jun阳性表达的细胞率均明显高于对照组(P<0·01),与凋亡细胞率呈正相关(r=0·8660,0.4021);先天性白内障及正常组中均极少或未见相关基因的表达。结论LECs凋亡与老年性白内障密切相关,c-fos与c-jun蛋白的表达可能与LECs凋亡有关。     

不同类型年龄相关性白内障晶状体上皮细胞衰老标记蛋白30的表达及与细胞凋亡的关系

背景 随着人口的老龄化,白内障的发病率逐年上升,研究表明,衰老标记蛋白30( SMP-30)与白内障的发生发展关系密切. 目的 了解不同类型白内障晶状体上皮细胞( LECs)中SMP-30的表达及LECs的凋亡情况,探讨不同类型年龄相关性白内障的发病机制. 方法 收集2010年3-10月在武汉大学中南医院眼科行白内障超声乳化摘出术的年龄相关性皮质性白内障59例80眼和核性白内障53例70眼,2个组患者年龄匹配(P＞0.05).白内障手术中环形撕取晶状体前囊膜,应用免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应( real-time PCR)技术分别定性、定量检测SMP-30蛋白及其mRNA在2个组白内障LECs中的表达.用TUNEL标记法观察LECs的凋亡情况,对比分析两种类型白内障晶状体前囊膜中SMP-30的表达及细胞凋亡的差异.结果 免疫组织化学法检测表明,SMP-30主要表达于晶状体囊膜的细胞质中,在晶状体囊膜中央部表达较弱,越近周边表达越强,差异均有统计学意义(核性:45.21±2.79 vs 76.42±11.21,P=0.042;皮质性:108.32±4.32 vs 206.34±15.67,P=0.037).核性白内障LECs中SMP-30 mRNA的表达少于皮质性,差异有统计学意义(60.02±9.08 vs 157.33±13.01,P=0.034).TUNEL染色显示,2个组白内障LECs凋亡百分率中央部明显高于周边部,差异均有统计学意义(核性:19.34％±0.11％vs 8.32％±0.57％,P=0.025;皮质性:42.07％±0.86％vs 13.55％±0.64％,P=0.010),细胞凋亡百分率低于皮质性,差异有统计学意义(14.05％±0.22％vs 27.70％±0.81％,P=0.007). 结论 两种类型年龄相关性白内障的发生均与LECs凋亡有关,SMP-30的表达与其密切相关.     

P53蛋白及P21蛋白在视网膜母细胞瘤表达的研究

目的：探讨P53和P21在视网膜母细胞瘤发生中的作用,及其与预后的关系。方法：应用抗人P53,P21抗体,采用链霉素亲生物素蛋白一过氧化霉（SP）免疫组化方法。对30例RB常规石蜡标本进行P53和P21蛋白的测定,结果：P53和P21在RB中的阳性表达率分别为60％和80％,P53的表达与临床分期有关（P＜0．05）,P53和P21的表达均与生存时间有关,P53阳性组生存时间低于P53阴性组（P＜0．05）,P21阳性组生存时间高于P21阴性组（P＜0．01）,P53阳性组的2年生存率低于P53阴性组,而P21阳性组的2年生存率高于P21的阴性组,结论：在RB的发生中P53和P21起着重要的作用,P53和P21的表达可以作为临床预后的一个参考指标。     

衰老标记蛋白30在不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞中的表达变化

背景 衰老标记蛋白30（SM P30）是一种新型的钙调节蛋白,具有抗氧化、稳定钙离子、抗凋亡等保护作用,研究证实随着年龄的增长,SMP30在机体组织中的表达逐渐减少,但其与不同年龄白内障发生关系的研究少有报道. 目的 对SMP30在不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞（LECs）中的表达情况进行定性、定位和定量研究,探讨其与白内障发生的关系.方法 本研究经广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准,采用非随机对照临床研究设计.收集2011年9月至2012年12月在广西医科大学第一附属医院眼科行白内障手术的患者,根据患者的年龄不同分为儿童白内障组（1 ～18岁）、青年白内障组（19～ 45岁）、中年白内障组（46 ～ 60岁）和老年白内障组（＞60岁）,均于白内障摘出术中获取晶状体前囊膜,每组各12例,并收集同期获取的19～45岁正常角膜供体的晶状体前囊膜12例作为正常对照组.采用间接免疫荧光法检测各组晶状体囊膜LECs中SMP30的表达,按单位面积吸光度（A）值计算平均荧光强度值. 结果 SMP30在各组患者晶状体囊膜LECs中均呈阳性表达,FITC染色呈绿色荧光,主要表达于细胞质,细胞核内有少量表达.儿童白内障组、青年白内障组、中年白内障组和老年白内障组患者LECs中SMP30表达的荧光强度分别为0.185±0.020、0.181±0.034、0.207±0.018和0.126±0.027,均明显高于正常对照组的0.087±0.007,差异均有统计学意义（q=3.96、3.82、4.01、3.55,P＜0.01）,儿童白内障组、青年白内障组、中年白内障组间LECs中SMP30的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）,老年白内障组患者LECs中SMP30表达的荧光强度明显低于儿童白内障组、青年白内障组和中年白内障组,差异均有统计学意义（q=3.42、3.21、3.80,P＜0.05）.结论 SMP30在白内障患者中表达增高,可能是人LECs的保护性因子,老年患者LECs中其表达量的降低可能是年龄相关性白内障发生的原因之一.     

视网膜母细胞瘤裸小鼠移植瘤中细胞增生凋亡及相关基因的表达

目的研究视网膜母细胞瘤(RB)细胞的增殖与凋亡平衡的改变及其细胞凋亡的分子调控机制.方法应用细胞凋亡原位检测及免疫组织化学法检测20例裸小鼠玻璃体腔RB移植瘤中细胞增生指数(PI),细胞凋亡指数(AI)及其比值;凋亡相关基因p53,bcl-2,bax,c-myc的表达状况及与AI的关系.结果RB移植瘤PI为48.32,AI为3.92,与对照组相比差异显著(P＜0.01).RB移植瘤AI/PI为0.081,与对照组相比差异显著(P＜0.01).RB移植瘤中p53,bcl-2,bax及c-myc蛋白表达阳性细胞数分别为45.32±0.18,＜10%,40.32±0.15,45.76±0.27.AI与bax表达正相关,与p53,c-myc表达无关.结论RB移植瘤细胞增殖的增加和细胞凋亡的抑制共同参与了RB移植瘤的发生和发展过程.RB移植瘤中的细胞凋亡是p53非依赖性的由bax的过表达所致.突变型p53蛋白所致的凋亡抑制及其抑制c-myc表达所致的细胞凋亡效应,可能是RB移植瘤中细胞凋亡受抑制的分子调控机制.     

低氧条件下大鼠视网膜HIF-1α及P53的表达及相关分析

目的:探讨低氧条件下HIF-1α及P53在大鼠视网膜的表达及相关性。方法:将大鼠56只随机分为2组,每组各28只,分别饲养于常氧和50mL/L低氧仓。于饲养后0,2,6,8,12,24,48h各处死4只,分别进行光镜,电镜,免疫组化(SABC)测定HIF-1α及P53表达,并进行相关性分析。结果:HIF-1α在缺氧后2h开始表达,8h达到高峰,12～24h持续强表达,48h表达明显下降。P53在缺氧后2h开始表达,以后表达逐渐升高,24h后表达达到高峰,48h表达明显下降。HIF-1α及P53在大鼠视网膜表达呈明显正相关(R=0.902495)。电镜结果显示在视网膜缺氧6h视网膜超微结构开始变化,24h凋亡达到高峰。结论:低氧条件下HIF-1α及P53在大鼠视网膜均有表达,随着HIF-1α的表达达到高峰后P53的表达达到高峰,两者呈明显正相关。P53表达达到高峰时电镜结果显示凋亡达到高峰。     

多药耐药相关基因在眼眶腺样囊性癌中的表达

目的 了解P53、GST-π、P170和鼠抗人MDR相关蛋白（MRP）在眼眶腺样囊性癌（ACC）组织中的表达情况.方法 免疫组织化学法检测51例眼眶ACC标本和10例正常眼眶组织中P53、GST-π、P170和MRP的表达状况.结果 P53、GST-π和P170在眼眶ACC组织中表达阳性率分别为52.94%、100%和82.35%,与眼眶正常组织相比差异有统计学意义.P53和P170在实体型ACC中的表达率明显高于其在腺样-管状型中的表达率;P53在复发组中的表达率明显高于其在初发组中的表达率;各指标之间在表达上无相关性.结论 眼眶ACC的多药耐药性与P53、GST-π和P170的过表达有关,但作用机制不尽相同,各指标的检测对于判断预后有参考价值.     

α-硫辛酸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中P53和Bax表达的影响

目的:观察α-硫辛酸在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中对P53和Bax表达的影响。方法:将SD大鼠72只随机分成正常组、视网膜缺血再灌注组和α-硫辛酸干预组。同时后两组根据再灌注的时间不同分成6,24,48和72h组。通过前房灌注加压的方法制成RIRI动物模型,采用Western-blot与免疫组织化学法测定在大鼠RIRI模型中的P53和Bax表达的变化。结果:P53和Bax在正常视网膜组织中几乎不表达,在缺血灌注6h开始表达,24h达到高峰,48h开始下降,72h后表达已经明显减弱。α-硫辛酸干预组各观察指标变化趋势基本与缺血再灌注组相似,但表达明显减弱,两组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:α-硫辛酸可抑制P53和Bax的表达,对大鼠RIRI有保护作用。     

SYBR Green I荧光定量PCR检测大鼠外伤性视神经损伤后P53、bax和caspase 3基因表达

目的 应用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测外伤性视神经损伤后P53、bax和caspase 3基因mRNA表达的变化.方法 应用液压颅脑损伤仪建立大鼠外伤性视神经损伤动物模型,伤后1、3、5、7、9、14、28d处死,以Trizol法提取新鲜视网膜组织的总RNA,以Oligo (dt) 18 为引物逆转录合成cDNA 并进行扩增,以T/A克隆法将纯化的目的 片断与T/A克隆载体(pTZ57R/T)连接成重组质粒并转化入E.coli DH5α.采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白斑筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果 由pTZ57R/T与目的 基因所构建的标准曲线的线性关系良好、灵敏度高、特异性强、准确可靠.P53和bax均在视神经损伤后3d mRNA表达明显增加,5d时达到高峰,7d后开始下降;伤后5d caspase 3 mRNA表达明显增加,9d时达到高峰,14d后开始下降.三者表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 促凋亡基因P53、bax和caspase 3在视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡发生中起到重要作用.     

眼睑恶性肿瘤组织中P53蛋白及增殖细胞核抗原表达的研究

目的 探讨Ｐ５３基因突变与眼睑恶性肿瘤发生的关系。方法 采用链霉卵白素－生物素（ＬＳＡＢ）免疫组化方法检测１０２例眼睑恶性肿瘤组织Ｐ５３蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达情况。结果 在正常眼睑皮肤、睑板腺及轻度不典型增生眼睑上皮中,未见Ｐ５３蛋白表达,而中、重度不典型增生,原位癌,浸润癌中,Ｐ５３蛋白阳性表达率逐渐增高,其ＰＣＮＡ指数也有增加趋势。３０／５３例基底细胞癌（ＢＣＣ）、１６／３２例鳞     

Expression of p53 and Ki-67 proteins in patients with increasing severity and duration of pterygium

Purpose:Pterygium is a triangular fibrovascular subepithelial ingrowth of degenerative bulbar conjunctival tissue over the cornea. It is now considered to be a result of uncontrolled cellular proliferation as overexpression of p53 protein and Ki-67 nuclear protein was found in the epithelium. This study was done to find the expression of p53 and Ki-67 with the severity and duration of the pterygium to explain the etiopathogenesis.Methods:Data were analyzed from 43 Indian participants of all age groups. All patients were divided according to the severity of pterygium (mild, moderate, and severe groups) and according to the duration of pterygium (<4 years and >4 years). The samples were studied by immunohistochemistry by using antibodies against p53 and Ki-67 proteins considering >5% expression as significant.Results:Of 43 cases, p53 and Ki-67 expression were positive in 33 cases. In mild, moderate, and severe cases p53 positivity was 33.3%, 78.4%, 100%, respectively. P53 expression increased with duration, 79.3% positive in <4 years, and 92.9% positive in >4 years. With increasing severity of pterygium, mild, moderate, and severe cases, Ki-67 positivity was 66.7%, 78.37%, 66.7%, respectively. Ki-67 expression with duration, 79.3% positive in <4 years, and 85.7% positive in >4 years of the duration of pterygium with no statistical significance.Conclusion:Our study revealed that with increasing duration and severity of pterygium, p53 expression was observed to be increasing. Ki-67 expression increased with the duration of pterygium but not with the severity.     

泪腺多形性腺瘤或癌DNA含量和P^53基因产物表达的定量分析

应用流式细胞计量术和免疫荧光染色技术，对１８例多形性腺瘤和６例多形性腺癌细胞的ＤＮＡ含量及Ｐ５３基因产物表达进行定量测定，探讨其在该肿瘤病理学诊断中的意义。结果表明，多形性腺瘤具有正常泪腺细胞的ＤＮＡ二倍体含量；多形性腺癌以ＤＮＡ异倍体为特征；Ｐ５３...