亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化实验

亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化实验赵永良项晓琼金璀珍吴德昌（北京放射医学研究所，北京１００８５０）本研究利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究了已知致癌剂亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并进行了定量实验．结果表明：ＥＧＶ集落是ＲＴＥ细胞体外转化...     

硫嘌呤甲基转移酶分子机制研究进展

硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）在硫嘌呤类药物的体内代谢中起着关键作用，其活性水平与药物效应及毒副作用密切相关。TPMT活性具有遗传多态性和种族差异。TPMT酶活性降低或缺乏与其基因突变密切相关。对TPMT遗传多态性分子基础的研究具有重要意义。本文综述有关TPMT基因表达调控和TPMT基因突变的分子机制的研究进展。     

甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定vero细胞DNA体外复制的保真度

利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ′－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ）诱发的遗传不稳定（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ）ｖｅｒｏ细胞胞浆抽提物中进行ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ复制，发现经过体外复制的ｐＺ１８９质粒中ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变率高出对照组５－８倍（Ｐ＜０．０５），证实该细胞ＤＮＡ复制系统的复制保真度明显降低     

甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定vero细胞DNA体外复制的保真度

利用在猴肾vero细胞抽提物中建立的DNA体外复制系统，对穿梭质粒pZ189 DNA进行有效的复制后，将复制产物转化至E.coli MBM7070，观察pZ189质粒DNA中突变靶基因supF tRNA基因突变的情况．在烷化剂甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine)诱发的遗传不稳定(genetic instability) vero细胞胞浆抽提物中进行pZ189质粒DNA复制, 发现经过体外复制的pZ189质粒中supF tRNA基因突变率高出对照组5-8倍(P<0.05)，证实该细胞DNA复制系统的复制保真度明显降低.     

亚硝基胍对含XylE基因的pESnx／FL穿梭质粒克隆细胞的致突变作用

用诱变剂MNNG对含EB病毒类穿梭质粒的pESnx/FL克隆细胞进行致突变研究,MNNG对FL细胞的IC_(50)为1.25μg/ml,对以XylE为靶基因的克险细胞的诱发突变率为2～7×10~(-3),至少是克隆细胞自发突变率的27.8倍。随着MNNG的诱变剂量的增加,转化子数减少,突变子数增加,诱发突变率增加,诱变剂量与诱发突变率呈正相关剂量反应趋势。突变子的Cracking gel快速鉴定法表明,通过两次穿梭,质粒DNA仍能完整存在,且分子量无明显改变。因此,在DNA水平上,MNNG对靶基因XylE无大片段改变。     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化及细胞遗传学改变

利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究．结果表明：增殖旺盛细胞（ＥＧＶ）集落是ＲＴＥ细胞体外转化最早期的特征，ＥＧＶ转化频率与ＭＮＮＧ剂量呈明显的剂量反应关系．从０．３ｍｇＬ－１ＭＮＮＧ剂量组分离到２个ＥＧＶ集落，经消化，传代形成了永生化的细胞系（ＲＴＥＳ１，ＲＴＥＳ２），ＲＴＥＳ１为多倍体核型，２号和７号染色体数目增加至４个且呈高频发生（１００％）；ＲＴＥＳ２呈二倍体核型．电镜结果证实转化细胞来自大鼠气管上皮组织．以上结果提示，原代ＲＴＥ细胞体外培养模型是研究致癌物定量及致癌机理的理想模型系统．     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞蛋白酪氨酸磷酸化改变

为了研究细胞信号转导通路在致突变物 N-甲基 - N′-硝基 - N-亚硝基胍 ( MNNG)致非定标性突变作用中的地位 ,猴肾 vero细胞在 MNNG处理后 0 ,6,1 2 h制备全细胞抽提液 ,用 Western印迹法观察细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的变化 .结果发现 0 .2μmol· L-1MNNG处理 2 .5h后再经 0 h和 1 2 h,45ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强 ,经 6h时还有62 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强 ,1 mg·L-1蛋白合成抑制剂环己米特 ( CHM)处理 vero细胞 1 2 h也可引起 45ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强 .提示 MNNG处理可能诱发应激相关信号转导通路的激活 .     

川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea，MNU)致大鼠视网膜损伤的作用。方法 大鼠生后47 d，腹腔注射不同剂量的川芎嗪注射液；50 d注射MNU 60 mg·kg^-1。测量视网膜总厚度；TUNEL和RT-PCR法分别检测细胞凋亡、c-jun和c-fos的表达。结果川芎嗪注射液可剂量依赖性地增加周边视网膜总厚度和降低凋亡指数，并抑制MNU诱导的即早基因表达。结论川芎嗪通过下调基因c-jun和c-fos的表达，抑制光感受器细胞凋亡，从而部分保护MNU引起的视网膜损伤。     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化及细胞遗传学改变

利用原代大鼠气管上皮(RTE)细胞研究N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究. 结果表明：增殖旺盛细胞(EGV)集落是RTE细胞体外转化最早期的特征，EGV转化频率与MNNG剂量呈明显的剂量反应关系. 从0.3 mg·L^-1 MNNG剂量组分离到2个EGV集落，经消化，传代形成了永生化的细胞系(RTES1,RTES2)，RTES1为多倍体核型，2号和7号染色体数目增加至4个且呈高频发生(100%); RTES2呈二倍体核型. 电镜结果证实转化细胞来自大鼠气管上皮组织. 以上结果提示，原代RTE细胞体外培养模型是研究致癌物定量及致癌机理的理想模型系统.     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞蛋白酪氨酸磷酸化改变

为了研究细胞信号转导通路在致突变物N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致非定标性突变作用中的地位,猴肾vero细胞在MNNG处理后0,6,12 h制备全细胞抽提液,用Western印迹法观察细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的变化.结果发现0.2 μmol·L^-1 MNNG处理2.5 h后再经0 h和12 h,45 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强,经6 h时还有62 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强,1 mg·L^-1蛋白合成抑制剂环己米特(CHM)处理vero细胞12 h也可引起45 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强.提示MNNG处理可能诱发应激相关信号转导通路的激活.     

505例唇腭裂患儿血常规检测结果分析

目的通过对唇腭裂患儿血象进行回顾性分析,探讨其血常规检测参数的变化,为选择麻醉方法和手术时机提供依据。方法对2011年5月～2012年8月住院治疗的505例唇腭裂患儿血常规检测结果进行调查统计分析,按畸形和治疗程度不同分为唇裂（A组）、腭裂组（B组）和唇腭裂组（C组）;以1岁以内正常婴儿（D组）、1～5岁正常儿童组（E组）共计180名作为对照。检测白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）和淋巴细胞百分率（L%）。同时跟踪调查36例唇腭裂患儿唇裂修复前后的血象变化。结果与同一年龄段正常儿童比较,A、B、C3组的WBC和L%均显著高于正常儿,A、C组的RBC显著低于正常儿,A、1岁以内单纯腭裂未经修复（B1组）、C组的HGB显著低于正常儿,A、B1、1岁以内唇腭裂已进行唇裂修复但未经腭裂修复的患儿（B2组）、C组的PLT高于正常儿。36例跟踪调查的唇腭裂患者在唇裂修复后WBC、PLT有显著性降低,RBC、HGB有显著性提高,淋巴细胞百分率无显著性变化。结论唇腭裂患儿更易发生病毒感染或急慢性炎症,表现为某些血象指标的异常,对麻醉和手术可能有一定影响,应该慎重选择手术适应证。唇裂合并腭裂患儿在唇裂修复后,血象指标可能趋于正常。     

超声诊断胎儿唇腭裂23例分析

目的 分析二维超声和实时三维超声诊断技术对胎儿唇腭裂显像的优劣。方法 对生育唇腭裂患儿的23例孕妇，对照其产前行二维超声检查以及实时三维超声检查的结果，进行系统的分析。结果 二维超声和实时三维超声诊断技术，在观察胎儿唇腭裂时．图像各有优劣。二维超声成像快速、手法易掌握，实时三维超声诊断要获取理想的图像，在操作方法上有一定的技巧和经验积累，懂得这些技巧和方法、运用该技术行临床诊断将会更得心应手，可以用最短的检查时间、取得最理想的目的图像。结论 产前超声检查时，实时三维超声与二维超声联合应用．配合完善，可为产科临床提供更可靠的技术保证。     

压舌法在腭裂术后舌根音发音矫正中的应用

目的在腭裂术后语音不清的患者中运用压舌法矫正舌根音异常,探讨提高腭裂术后舌根音清晰度的方法。方法进行常规语音训练的基础上,在舌根音训练中加入行为治疗压舌法,采用压舌尖后推的训练方法对20例腭裂术后语音异常的患者进行3个月内每周3～4次训练,然后对收集的语音资料进行舌根音语音清晰度评估。结果患者语音清晰度从训练前的(40±8)%提高到训练后(83±6)%,平均提高(43±8)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论运用压舌法在矫正腭裂术后舌根音异常可达到提高语音清晰度,改善语音功能的目的 。     

2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin induces a proteomic pattern that defines cleft palate formation in mice

Objective

To identify the differential protein pattern in 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) induced cleft palates using a proteomic approach.

Methods

At gestation day (GD) 12, TCDD (64 g/kg; n = 30) or corn oil control (n = 30) was given to time-pregnant C57BL/6J mice by gavage. The anatomical, histological, proteomic changes in the palates of the fetal mice were studied on GD18. Total protein was extracted from the palate tissue and examined by 2-dimensional gel electrophoresis (2-DE). Spots differentially expressed between the two groups were selected for analysis by matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). The proteins were identified by data searching in the Mascot database.

Results

In TCDD group, the incidence of cleft palate was 100%. Ten differential protein spots with the largest fold change were selected for further identification by mass spectrometry, 7 showed significantly higher volumes and 3 showed significantly lower volumes in TCDD palates than the control palates (all p < 0.05). Peroxiredoxin-1 were robustly up-regulated in the cleft palate group, as well proteins linked to energy metabolism, cell migration, and apoptosis.

Conclusions

Peroxiredoxin-1 protein may be associated with cleft palate in mice induced by TCDD. The embryo mouse palate tissues energy metabolism cells migration/apoptosis related proteins have the disorder.     

影响腭裂术后语音效果的相关因素分析

目的 观察腭裂术后语音效果，分析影响因素。方法 对100例腭裂术后患者通过观察软腭后退程度、悬雍垂形态与愈合情况、语音清晰度等综合进行评定。结果 100例患者通过综合评定，语音效果优良率为78％。结论 早期手术，术后配合正确的语音训练，将进一步提高腭裂术后的语音效果。     

Common differentially expressed proteins were found in mouse cleft palate models induced by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and retinoic acid

Cleft palate(CP) is a widely studied congenital malformation. However, its etiology and pathogenesis still remain unclear. Proteins are fundamental molecules that participate in every biological process within cells. In this study, we established CP mouse models induced by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and retinoic acid (RA), using proteomics technology isobaric tags for relative and absolute quantitation (iTRAQ) to investigate the key proteins in the formation of CP. Pregnant mice were given a gavage of TCDD 28μg/kg or retinoic acid 80mg/kg of body weight or equivalent corn oil at gestational day 10.5(GD10.5) and sacrificed at GD 17.5. Foetal mice were recorded and collected for further detection. Western blot was performed to verify the iTRAQ results. Eventually, we obtained 18 common differentially expressed proteins in TCDD group and RA group compared with normal control, 17 up-regulated and 1 down-regulated. 14-3-3sigma and Annexin A1 were up-regulated in experimental groups at GD17.5, which was consistent with Western blot. We speculated that the common differentially expressed proteins might be one of the molecular mechanisms in the formation of cleft palate.     

小儿唇腭裂术后系列护理效果的临床观察

目的观察小儿唇腭裂术后系列护理治疗的临床效果。方法对行唇腭裂修复术的小儿术后进行心电监护、吸氧、饮食指导、超声雾化、口腔清洁以及抗生素滴鼻液滴鼻等系列护理治疗。结果 248例唇腭裂手术患儿均痊愈出院,其中12例在术后恢复期出现发热;出院时28例伤口红肿,9例轻度糜烂,均在出院后正常愈合。结论通过对唇腭裂修复术患儿进行系列护理治疗,可减少术后并发症的发生,增加手术成功率,值得临床推广。     

腭裂患儿听力检查的临床研究

目的分析腭裂患儿鼓室图、镫骨肌声反射和听性脑干反应（auditory brainstem besponse,ABR）检查的特点,探讨听力学检查对腭裂患儿的临床应用价值。方法采用中耳分析仪和听觉诱发电位仪测试,对40例（80耳）腭裂患儿进行听力学检查。结果鼓室图：B型37耳（46.25%）,C型10耳（12.5%）,A型22耳（27.5%）,As型11耳（13.75%）。镫骨肌声反射：64耳（80%）消失,16耳（20%）存在。ABR结果：听力损失41耳（51.25%）,均伴有V波潜伏期延长,其中鼓室图呈B型25耳（60.98%）,C型9耳（21.95%）。此41耳中轻度听力损失21耳（51.22%）,中度听力损失20耳（48.78%）,无重度和极重度听力损失。80耳中V波潜伏期延长58耳（72.5%）。结论腭裂的解剖生理特点决定了患儿中耳炎的发病率较高。当鼓室图呈B型或C型曲线,同时出现ABR中V波听阈呈轻中度下降且V波潜伏期延长时,应高度警惕发生分泌性中耳炎,否则会严重影响患儿生活和学习。     

Lower concentrations of receptor for advanced glycation end products and epiregulin in amniotic fluid correlate to chemically induced cleft palate in mice

This study investigated the correlation between differentially expressed proteins in amniotic fluid (AF) and cleft palate induced by all-trans retinoic acid (atRA), and 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) in mice. Seven proteins were differentially expressed at embryonic day (E) 16.5 in atRA and control groups as revealed by label-based mouse antibody array. Enzyme-linked immunosorbent assay was further used to detect the expression levels of these proteins in AF from E13.5 to E16.5 in atRA, TCDD, and control groups. The cleft palate groups showed lower concentrations of receptor for advanced glycation end products (RAGE) and epiregulin at E16.5. RAGE immunostaining obviously decreased in palatal tissue sections obtained from E14.5 to E16.5 in the cleft palate groups as revealed by immunohistochemistry. These findings indicate that reduced levels of RAGE and epiregulin in AF are correlated to chemically induced cleft palate in mice.