AG1478与顺铂合用对人脑多形性胶质母细胞瘤的疗效分析

目的评估表皮生长因子（EGFR）抑制剂AG1478与顺铂（CDDP）联合应用对人脑多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme,GBM）裸小鼠脑原位移植瘤的疗效。方法人脑GBM裸小鼠脑内原位移植模型建立后第3天,将40只小鼠随机分为4组,每组10只,各组小鼠每次分别应用AG1478（25mg/kg）、CDDP（3mg/kg）、AG1478＋CDDP（25mg/kg＋3mg/kg）及PBS（0.1ml/只）。上述药物均腹腔注射,每2天1次,共4次,用药后观察各组荷瘤鼠生存期。重复上述实验步骤,肿瘤移植后14d处死各组小鼠取脑,HE染色后观察各组移植瘤形态及体积变化;EnVision法检测移植瘤中EGFRⅧ、磷酸化EGFRⅧ（P-EGFRⅧ）的表达及增殖活性变化;TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡变化。结果与对照组[（19.4±0.6）d]比较,单用CDDP或AG1478荷瘤鼠生存期分别为（20.7±0.4）d和（20.8±0.6）d（P〉0.05）,而CDDP＋AG1478组荷瘤鼠生存期为（33.6±0.9）d（P〈0.05）;CDDP＋AG1478能明显减小移植瘤体积,降低增殖活性及促进肿瘤细胞凋亡,而单独用药对此效果不明显。结论AG1478与CDDP联合应用有协同的抗肿瘤疗效,这为EGFR抑制剂和常规化疗药物联合治疗恶性胶质瘤提供了实验依据。     

多形性胶质母细胞瘤生长活性的实验研究

目的　探讨多形性胶质母细胞瘤(GBM)的生长活性。方法　观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤及U2 5 1细胞株的形态学变化,绘制生长曲线,并采用免疫组化SABC法检测PCNA的表达。结果　5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤及U2 5 1细胞株其生长曲线各不相同。GBM细胞形态多样,增长最快的细胞系常显示较多的形态一致性和PCNA的高表达。结论　细胞形态、生长曲线和PCNA的表达可以较好的反映GBM的增殖活性。     

胶质母细胞瘤干细胞研究进展及其在胶质瘤治疗中的作用

胶质母细胞瘤是中枢神经系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤,患者生存期仅1年左右.胶质母细胞瘤干细胞(GSC)是最早分离确认的实体瘤干细胞之一,在分子标记和生物学功能等方面与正常干细胞相似,具有自我更新、分化为多种细胞,以及少量细胞就可在免疫缺陷鼠成瘤的能力.GSC是肿瘤发生、发展、复发及转移的关键因素,具有易在体外长期培养并维持其遗传学、基因表达谱等特征,在肿瘤干细胞研究中具有重要示范意义.因此本文对GSC的研究进展及其在胶质瘤治疗中的作用等进行综述.     

人脑胶质母细胞瘤肿瘤干细胞的分离鉴定研究

目的 从人脑胶质母细胞瘤中分离出肿瘤干细胞.体外培养并鉴定其生物学特性.方法 获取5例人脑胶质母细胞瘤肿瘤细胞,通过无血清培养基和悬浮培养法,观察肿瘤干细胞克隆球的形成.利用免疫荧光技术检测原代肿瘤细胞和克隆球细胞中CD133阳性细胞的比例,分析克隆球细胞的抗原表达和多向分化能力.观察肿瘤干细胞子代分化细胞在无血清培养基中的逆向分化现象.结果 成功获取人脑胶质母细胞瘤肿瘤细胞,研究发现部分细胞具有克隆形成能力,在无血清培养基中呈悬浮球状生长,并可稳定增殖、传代.免疫荧光检测显示原代肿瘤细胞及克隆球细胞中均有CD133阳性细胞.克隆球细胞在含血清培养基中具有多向分化能力,其分化的子代细胞在无血清培养基中可逆向分化.结论 培养获得人脑胶质母细胞瘤肿瘤干细胞,证实其在体外具有自我更新、无限增殖、多向分化和逆向分化的生物学特性,为下一步研究奠定基础.     

胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究

目的 明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响.方法 观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,与U251MG和U373MG细胞系进行比较.结果 GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤形态,核型分析显示多条染色体均有扩增,其中EGF受体所在的7号染色体数目增加较为明显(4条7号染色体).GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达.EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达.结论 GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤理想的细胞平台.该细胞系的生物学特性与EGF受体有紧密关系.     

胶质母细胞瘤干细胞的分离、培养及其生物学特性

目的：从人胶质母细胞瘤SC 326和SC 189细胞株分离培养干细胞,研究其自我更新、增殖和分化等生物学特性。方法：用无血清培养基培养人胶质母细胞瘤SC 326和SC 189细胞,检测细胞形成神经球的能力。对培养3代以上的细胞(GSC)进行神经球细胞单细胞克隆形成率实验;用第3代和第7代的细胞评价神经球单细胞克隆形成率;免疫荧光染色法检测神经球细胞的干细胞标记物表达及多向分化能力。结果：无血清培养基培养24 h时SC 326、SC 189
形成神经球样细胞团,1周时神经球内细胞可达数百个,3代内神经球细胞SC 326的增殖率为(2.10±4.33)%、(4.03±4.14)%和(6.91±5.12)%,SC 189为(12.79±2.32)%、(15.78±3.25)%和(37.91±4.58)%;单细胞克隆形成率GSC 326和GSC 189分别为5.56%和8.33%,次级单细胞克隆形成率分别为9.89%和14.58%;GSC 326 P3和P7神经球克隆形成率最大值为(12.67±2.86)%和(20.44±1.73)%,GSC 189 P3和P7神经球克隆形成率最大值为(32.00±1.00)%和(42.67±5.03)%。免疫荧光染色,干细胞表面标记物CD133和神经巢蛋白呈强阳性表达,分化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性类β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)表达极弱。分化诱导后分化标记物GFAP和β-TubulinⅢ的表达呈阳性。结论：早期原代胶质母细胞瘤细胞株中存在少量具有自我更新、增殖和多向分化能力的细胞,这些细胞具有明显的干细胞特性。
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人胎脑星形胶质细胞原代分离培养及鉴定

目的探索并建立人胎脑星形胶质细胞的原代培养方法.方法分别以组织块法和消化法分离、培养和纯化人胎脑星形胶质细胞,并用形态学观察和免疫细胞化学方法进行鉴定.结果组织块法的培养效果优于消化细胞培养法;原代培养、纯化的细胞生长稳定,经鉴定为星形胶质细胞.结论采用组织块法原代培养人胎脑星形胶质细胞,简单易行、所获细胞纯度高,可用于体外星形胶质细胞的进一步研究.     

胶质母细胞瘤的常规MRI诊断

目的:通过分析胶质母细胞瘤的MR表现,探讨其影像学特征。方法:回顾性分析21例经手术病理证实的胶质母细胞瘤的临床资料及MRI特征,对肿瘤的发病部位、形态、信号、瘤周水肿、占位效应以及强化特征进行分析。结果:20例病灶位于大脑半球,1例位于小脑半球,其中4例跨中线生长。MR表现为长T1、长T2为主的混杂信号团块20例,结节状1例,21例中16例有"流空效应",阳性率为76.2%;增强扫描呈厚薄不一的不规则花环状、花瓣状强化18例,整个病灶或环壁呈"栅栏"状,19例增强病例中18例可见假"栅栏"征,阳性率达94.7%,1例呈结节状轻度强化。20例病灶有明显瘤周水肿和占位效应,仅1例不明显。结论:胶质母细胞瘤具有一定特征性MR表现,肿瘤体积较大,累及多个脑叶,形态不规则,信号不均匀,囊变坏死多见,瘤内可见出血,可跨中线生长,水肿和占位征象明显。尤其是假"栅栏"征及"流空效应"对诊断胶质母细胞瘤更具特征性。     

应用表达谱芯片研究胶质母细胞瘤相关基因的表达及功能

目的:应用基因表达谱芯片筛选研究人脑胶质母细胞瘤发生,发展中相关基因的表达及生物信息分析功能.方法:采用含13 939条基因(设置173个对照点)的BioStarH140S型表达谱芯片;用改良的"一步法"抽提2例正常脑及6例胶质母细胞瘤组织总RNA,制备杂交探针;杂交芯片后用ScanArray4000扫描芯片荧光信号,提取正常脑及胶质母细胞瘤组织差异基因;对差异基因进行生物信息分析,初步分类及Northern杂交研究.结果:按照差异显著标准,在胶质母细胞瘤中共有198条(1.42%)基因表达差异显著,其中77条(0.55%)表达上调,121条(0.87%)表达下调,55条新基因尚未在GenBank登录;生物信息分析发现肿瘤相关基因与细胞信号和传递蛋白、代谢、蛋白翻译合成、细胞骨架和运动、免疫、原癌基因和抑癌基因、细胞周期、细胞凋亡等9类基因密切相关;Northern杂交结果与表达谱芯片一致.结论:基因表达谱芯片可低成本、高通量、高效率筛选胶质瘤相关基因,并为基因群功能研究提供了方向;本研究结果有助于揭示胶质母细胞瘤分子机制,为指导肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断提供依据.     

MRI多模态扫描对巨细胞型胶质母细胞瘤的诊断和鉴别中的应用

目的 分析巨细胞型胶质母细胞瘤MRI表现,提高对该病的认识和诊断水平。方法 回顾性收集5例经手术及病理证实为巨细胞型胶质母细胞瘤的临床和MRI资料,总结、分析其MRI表现,包括病变的位置、不同序列信号特征及病灶周围组织侵袭状况等。结果 MRI显示4例患者为单发,位于右侧额叶3例,左侧额顶叶1例;1例患者为多发,位于右侧额颞岛叶及基底节区。2例患者肿瘤呈实性,3例患者肿瘤呈囊实性。肿瘤边界清楚3例,边界模糊2例。瘤周轻度水肿2例,中度水肿3例。肿瘤出血1例。5例增强扫描的肿瘤均呈明显不均匀强化,其中3例存在坏死囊变。3例PWI扫描患者肿块实性成分rCBV均明显升高。3例DTI扫描患者肿瘤实性部分ADCmin值明显减低,肿瘤及瘤周水肿FA值明显减低。4例MRS扫描患者肿瘤实性成分Cho胆碱峰明显增高。5例患者免疫组化胶质纤维酸性蛋白(GFAP)均为阳性,Ki-67阳性细胞数达20%～40%。结论 巨细胞型胶质母细胞瘤的发病率低,相关文献及病例报道有限,MRI多模态扫描对肿瘤的诊断具有很高的价值,能够评估病灶大小、位置、信号特点、累及范围及周围组织改变,有助于临床上的术前评估、术后随访和疗效...     

雷帕霉素对人胶质母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素对人胶质母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法:细胞培养技术培养人胶质母细胞瘤细胞系A172,将其分为对照组与实验组。MTT检测两组细胞增殖;细胞免疫化学检测磷酸化核糖体S6激酶(p-P70S6K)1蛋白表达;TUNEL检测A172凋亡。结果:MTT表明,实验组细胞存活增殖与对照组比差异有统计学意义(P<0.05);实验组p-P70S6K1与对照组比差异有统计学意义(P<0.05);雷帕霉素可诱导A172凋亡(P<0.05)。结论:雷帕霉素能有效抑制人胶质母细胞瘤A172增殖,也可诱导其凋亡。雷帕霉素可能通过m TOR/P70S6K1信号通路发挥抗肿瘤作用。     

星形细胞瘤及胶质母细胞瘤端粒状态的分析

分析星形细胞瘤和胶质母细胞瘤的端粒状态及其与该类肿瘤发生和发展的关系。方法利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，检测不同分化类型的星形细胞瘤内端粒限制性内切酶片段（ＴＲＦ）的长度。结果与正常脑组织比较，Ⅰ～Ⅲ型星形细胞瘤的ＴＲＦ之下限呈递减趋势；胶质母细胞瘤的ＴＲＦ明显缩短，但在原发性和复发性胶质母细胞瘤间，端粒的长度差异无显著意义。结论端粒的丢失是星形细胞瘤恶性转化中的一个重要遗传学改变，在胶质母细胞瘤内可能存在着端粒修复机制，从而使胶质母细胞内端粒长度得以相对恒定。     

胶质母细胞瘤中CD133阳性细胞的分布与组织微血管增殖的相关性

目的 观察胶质瘤干细胞标记物CD133和血管内皮细胞标记物CD34在胶质母细胞瘤及瘤周不同部位的表达情况,探讨胶质瘤干细胞在恶性胶质瘤中的侵袭迁移规律.方法 收集52例胶质母细胞瘤病人的组织标本,每例标本分别取肿瘤中心组织、肿瘤和水肿交界区组织及肿瘤周围水肿区组织3部分.采用免疫组织化学染色和Western印迹法检测CD133在各组标本中的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测CD34-微血管在组织标本中的分布,并分析两者的相关性.结果 CD133在对照组组织中不表达,而在肿瘤和水肿交界区、肿瘤中心区,瘤周水肿区组织中免疫组化染色表达分值分别为7.3±1.4、5.2±1.1、2.7±1.0,光学显微镜下可见,在交界区CD133+细胞分布密集,往往形成以微血管为中心的假菊型团样结构,在中心区CD133+细胞常在微血管附近簇状分布,在水肿区CD133+细胞以散在分布为主;Western印迹检测吸光度值分别为0.79±0.03、0.38±0.01、0.20±0.04;各区域间的差异有统计学意义(P＜0.05).在高倍视野下,肿瘤和水肿交界区、肿瘤中心区、肿瘤周围水肿区、对照组组织中CD34-微血管密度(个/视野)分别是31.3±4.0、21.8±2.6、15.3±2.4、4.7±1.5;各组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).CD133的表达水平和组织微血管的分布呈正相关(r=0.948,P＜0.05).结论 胶质瘤干细胞向微血管生成丰富的交界区富集,认为他和组织微血管之间可能存在密切的"营养"联系;胶质瘤干细胞在胶质母细胞瘤中的分布特征可能与其侵袭迁移有关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of CD133 and CD34 in different parts of glioblastoma and its margin and explore the invasive path of glioma stem cells within the tumor and surrounding tissue.Methods The surgical specimens were collected from the core of mass,junctional zones between tumor and peritumoral edematous areas and edematous areas in 52 patients with glioblastoma.Immunohistochemical cell staining and Western blot were employed to evaluate the expression of CD133 in different specimens while immunohistochemistry was used to detect the CD34-microvesel postforming.A correlation analysis was performed between them.Results The expression of CD133 was not detected in the control groups while the scores were 7.3 ± 1.4,5.2 ± 1.1,2.7 ± 1.0 in junctional zones,tumor cores and edematous areas with immunohistochemistry and 0.79 ± 0.03,0.38 ± 0.01,0.20 ± 0.04with Western blot respectively.There were significant differences between different groups (P ＜ 0.05).Under light microscope,the CD133-positive cells frequently forming perivascular pseudorosettes were dense in junctional zones and mostly clustered near the microvessels in tumor cores and scattered in edematous areas.At a high magnification (200 ×),the CD34-MVD(/HP) values were 31.3 ±4.0,21.8 ± 2.6,15.3 ±2.4,4.7 ± 1.5 respectively in junctional zones,tumor cores,edematous areas and control tissues.Significant differences were also found in these groups(P ＜ 0.05).The expression level of CD133-positive cell was positively correlated with the distribution of CD34-microvessels (r =0.948,P ＜ 0.05).Conclusion Glioma stem cells tend to assemble in the junctional zones where the microvessels are enriched.There is probably an intimate nourishing relationship with the microvessels.The distribution of glioma stem cells may be related with the invasiveness within glioblastoma.     

胶质母细胞瘤微血管内皮细胞中Nogo-B的表达意义

目的:研究人胶质母细胞瘤(GBM)源性微血管内皮细胞(GBMDMEC)和正常人脑组织源性微血管内皮细胞(GBMDMEC)中Nogo-B的功能表达,了解Nogo-B在GBM血管生成中起的作用.方法:通过显微外科神经手术获得14例GBM标本,利用CD105免疫磁珠内皮细胞分选系统纯化内皮细胞,采用免疫组化染色,Real-time PCR和Western Blot等方法检测其中Nogo-B在蛋白和mRNA水平上的表达.结果:与正常脑组织源性微血管内皮细胞相比较,Real-time PCR和Western Blot检测结果发现,在GBM源性微血管内皮细胞中Nogo-B表达上调.结论:Nogo-B在恶性GBM中mRNA和蛋白水平上表达均显著上调,证明Nogo-B参与了GBM新生血管形成,与GBM发生发展密切相关.     

替莫唑胺对胶质母细胞瘤化疗的临床观察

目的探讨胶质母细胞瘤应用替莫唑胺化疗的疗效。方法回顾性分析接受替莫唑胺化疗的31例胶质母细胞瘤患者的临床疗效。结果所有患者均接受超过3个周期的替莫唑胺治疗,6个月有效率29.0%,无进展生存率64.5%。仅1例出现Ⅲ度骨髓抑制。结论胶质母细胞瘤手术和放射治疗后可以应用替莫唑胺化疗。     

IGKV基因在人多形性胶质母细胞瘤治疗前后的变化分析

目的研究多形性胶质母细胞瘤(GBM)组织放射治疗前后基因表达谱中相关基因表达差异的变化及意义。方法采用BioStarH-141s含13 929条人类全长基因cDNA表达谱芯片,对5例多形性胶质母细胞瘤组织进行放疗前及放疗60 Gy后检测,并分析它们之间免疫相关基因表达差异。结果多形性胶质母细胞瘤放疗60Gy后与放疗前比较,表达差异基因中改变最明显的功能群是免疫系统相关的基因,IGKV基因上调。细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、DNA修复系统也有部分基因发生明显变化。结论提示对多形性胶质母细胞瘤组织照射60Gy后基因表达谱改变的研究可以更好地阐明放射敏感性差异机理,为放疗前或放疗早期寻找到预测放射敏感性分子标志提供理论依据。     

基于免疫基因的胶质母细胞瘤预后预测模型的构建和验证

目的 构建胶质母细胞瘤(GBM)免疫相关预后模型,评价其在GBM患者风险评估中的价值.方法 使用CGGA数据,通过整合亚型特异性免疫特征和分子模式,建立基于免疫基因的GBM预后特征(IPSGBM).结果 网络分析显示,3个预后免疫基因STC1、PLAU和PLAUR主调节GBM的间充质形态.由这3个核心基因构建的IPSG...     

影像组学在胶质母细胞瘤的研究进展

影像组学运用非侵入性评估方法提取图像中复杂的成像特征,这些大量的特征描述了肿瘤的纹理、形状特征等,通常使用这些特征与临床、病理、基因等相结合,去建立相关肿瘤诊断、治疗及预后的预测模型,进而更好地辅助临床决策.脑胶质母细胞瘤是最常见的星形胶质细胞原发性脑恶性肿瘤,准确判断肿瘤的特性对临床医师选择合理的方案具有重要的指导意...