日喀则地区2005年健康儿童肠道病毒病毒学监测分析

目的做为中国急性弛缓性麻痹(AFP)病例监测系统和中国维持无脊髓灰质炎(脊灰)状态的一部分,对日喀则地区2005年健康儿童肠道病毒(EV)的携带情况进行监测分析,为西藏自治区维持无脊灰提供实验室依据。方法2005年3月在日喀则地区3个县的0～5岁健康儿童中共采集粪便标本70份,进行EV分离和血清型鉴定。对分离到的脊灰病毒(PV)同时使用逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验进行型内鉴定,对分离到的所有非脊灰肠道病毒(NPEV)进行VP1区核苷酸序列测定以鉴定血清型。结果从70份粪便标本中共分离到16株PV,阳性率为22.86%。型内鉴定及VP1区核苷酸序列测定和分析结果显示,2005年日喀则地区无脊灰野病毒和疫苗衍生脊灰病毒的存在;共分离到9株NPEV,阳性率为12.86%。结论日喀则地区2005年继续保持无脊灰状态。EV监测为后续研究提供宝贵的资料,也为EV监测逐渐整合到AFP病例监测系统中做了有益的尝试。     

北京市1995-2011年急性弛缓性麻痹病例肠道病毒监测分析

目的分析北京市1995-2011年急性弛缓性麻痹（Acute Flaccid Paralysis,AFP）病例肠道病毒（Enterovirus,EV）监测情况。方法对北京市1995-2011年AFP病例分离到的脊髓灰质炎（脊灰）病毒（Poliovirus,PV）和非脊灰（Non-polio）EV（NPEV）进行描述性分析。结果共检测478例AFP病例的967份粪便标本,在90例AFP病例的133份粪便标本中检出EV,分离率为13.75%;其中20例AFP病例的41份粪便标本检出PV（30.83%）,70例AFP病例的92份粪便标本检出NPEV（69.17%）。在41份PV阳性标本中,检出PVⅡ型（Type 2）（PVⅡ）11份,PVⅢ型（Type 3）（PVⅢ）10份,分别占单型PV检出总数的40.74%和37.04%。在14例疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccineassociated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）病例中,PVⅡ和PVⅠ型（Type 1）（PVⅠ）＋PVⅡ＋PVⅢVAPP病例发病60天后随访均有不同程度的残留麻痹。2007-2008年,在NPEV阳性标本中检出7例14份粪便标本EV71型阳性,1例2份粪便标本柯萨奇病毒A组16型阳性。结论北京市1995~2011年AFP病例中,EV分布主要为NPEV,其次为PV;PVⅡ和PVⅠ＋PVⅡ＋PVⅢ是引起残留麻痹的主要PV型别;应深入研究EV不同血清型分布及流行规律。     

2009-2011年河北省脊髓灰质炎疫苗病毒核苷酸变异情况分析

目的 分析河北省2009-2011年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者中脊髓灰质炎(脊灰)病毒分离株VP1编码区基因核苷酸变异情况,及时发现可能出现的疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovrus,VDPV)及其引起的VDPV循环(Circulating VDPV,cVDPVs),为河北省维持无脊灰状态提供依据.方法 按照《世界卫生组织(WHO)脊灰实验室手册》的要求,对全省2009-2011年997例AFP病例及90例的接触者的粪便标本进行病毒分离与鉴定,分离的脊灰病毒送中国疾病预防控制中心(CDC)病毒病预防控制所国家脊灰实验室进行VP1编码区基因核苷酸序列测定与分析.结果 河北省2009-2011年,从24例AFP病例和7例AFP病例的密切接触者粪便标本中分离到脊灰病毒,将混合株进行单型分离,得到38株脊灰病毒,经国家脊灰实验室对脊灰病毒VP1编码区基因核苷酸序列测定,其中,36株发生突变,变异率均＜1.0％,最多变异个数为5个.脊灰病毒阳性AFP病例男性明显高于女性,主要集中在小年龄组.结论 2009-2011年分离到的脊灰病毒均为疫苗株,局部地区出现高变异株,未发现VDPV,河北省继续保持无脊灰状态.     

2016年河南省急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒监测结果分析

目的鉴定分析河南省15岁以下儿童疑似急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中实验室确诊感染脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的型别,为河南省制定更完善的脊灰防控策略及维持"无脊灰野病毒状态"提供科学依据。方法依据《WHO脊髓灰质炎实验室手册第4版》操作规程,使用RD和L20B两种细胞对河南省2016年AFP标本进行病毒分离,采用荧光定量PCR法及逆转录PCR法进行病毒序列鉴定和分析。结果共检测453例疑似AFP病例,其中有7例(1.55%)病例分离出10株脊灰病毒,其中Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅰ+Ⅲ型分别为5株,3株和2株。分离到脊灰毒株与Sabin株相比,核苷酸VP1区发生0、1、2、4和6个变异的数量分别为3、1、3、2和1株。结论 2016年河南省分离出脊灰病毒均为脊灰疫苗株,毒株型别以Ⅰ型为主,VP1区核苷酸以低变异为主,未发现疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovirus,VDPV)及脊灰野病毒(Wild poliovirus,WPV)。     

2015-2016年河北省急性弛缓性麻痹病例病原学检测分析北大核心

目的分析2015-2016年河北省急性弛缓性麻痹（AFP）病例的脊髓灰质炎（脊灰）病毒检测状况,为河北省继续维持无脊灰状态提供依据。方法收集2015-2016年河北省AFP病例粪便标本进行病毒分离和鉴定,对脊灰病毒分离株采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增VP1区基因片段,进行核苷酸序列测定和分析。结果从665份AFP病例粪便标本中分离到脊灰病毒12株（1.80%）、非脊灰肠道病毒（NPEV）112株（16.84%）。与Sabin株相比,脊灰病毒VP1区核苷酸发生0个变异3株、1个变异6株、2个变异4株、3个变异2株、4个变异1株;在NPEV分离株中,7-8月份分离株数占47.2%。结论 2015-2016年河北省脊灰病毒分离株均为疫苗相关株,病毒核苷酸变异以低变异为主。     

2000-2013年玉林市检出脊髓灰质炎疫苗病毒的急性驰缓性麻痹病例流行病学分析

摘要:目的　分析脊髓灰质炎（脊灰）病毒（PV）的急性驰缓性麻痹（AFP）病例流行病学特征,为维持无脊髓灰质炎状态提供科学依据。方法　采用描述性流行病学方法对玉林市2000-2013年检出的PV阳性AFP病例进行流行病学分析。结果　玉林市2000-2013年共检测了451例急性驰缓性麻痹病例的粪便标本,检出PV13株,检出率2.88%,型内特征鉴定有1株为疫苗变异PV,经VP1基因核苷酸序列测定达到VDPV的分类标准。分离到的PV以Ⅱ型为主,AFP病例散在发生,无聚集性。未全程免疫儿童＞全程免疫儿童,年龄以≤1岁儿童为主（92.31%）。服苗1月内出现麻痹占46.15%（6/13）,麻痹伴发热占61.54%,60 d后随访仍残留麻痹病例高达23.08%,以Ⅱ型疫苗株为主。结论　玉林市2000-2013年未发现由脊灰野病毒引起的病例。在无脊灰证实阶段,存在着疫苗衍生病毒（VDPV）和发生VDPV循环（cVDPVs）的可能,保持AFP病例监测的敏感性,加强对脊灰疫苗衍生病毒的监测及研究,具有重要的现实意义。     

北京市丰台区2011-2012年急性弛缓性麻痹病例监测及环境污水中脊髓灰质炎病毒监测

目的评估北京市丰台区急性弛缓性麻痹（AcuteFlaccidParalysis,AFP）病例监测系统的质量,分析环境污水中脊髓灰质炎（脊灰）病毒（Poliovirus,PV）的生物学特征。方法选择吴家村污水处理厂作为监测点,2011年5月～2012年9月,每月采集监测点污水进行肠道病毒（Enterovirus,EV）分离和鉴定,并对分离到的PV进行VP．编码区核苷酸序列测定和分析。结果北京市丰台区AFP病例监测系统保持很高的敏感性,2011、2012年〈15岁儿童AFP病例报告发病率均为1．62／10万。从环境污水中共分离到107株EV和12株腺病毒,包括28株疫苗株Pv,其中I型5株,II型7株,III型16株。序列分析结果表明,与赛宾（Sabin）疫苗株相比,环境监测分离到的疫苗株PVVP,编码区核苷酸变异0～5个。结论AFP病例监测和环境监测均未发现脊灰野病毒或疫苗衍生脊灰病毒。环境监测为北京市丰台区AFP病例监测系统提供了重要的补充信息,显示北京市丰台区口服脊灰减毒活疫苗接种质量较高,疫苗病毒并未在人群中形成较长时间的循环。同时分离到的非脊灰肠道病毒,为北京市丰台区外环境中的EV研究提供了重要的背景信息。     

2010-2014年广西脊髓灰质炎病原学监测结果分析

目的：评估广西脊髓灰质炎（脊灰）的实验室监测现状,为广西维持无脊灰状态提供实验室依据。方法按世界卫生组织（WHO）的《脊髓灰质炎实验室手册》,对广西2010—2014年急性弛缓性麻痹（acute flaccid paralysis, AFP）监测病例及2011年环境污水标本进行病毒分离,分离到的脊髓灰质炎病毒（poliovirus, PV）阳性株进行型内鉴定及VP1编码区序列测定分析。结果共采集AFP病例粪便标本3016份,环境污水标本72份。从粪便标本中分离到PV 47株,分离率为1.56%;从污水标本中分离到PV 120株。所有PV经型内鉴定均为疫苗相似株。结论2010—2014年广西的AFP病例及2011年的环境标本监测均未检出脊髓灰质炎野病毒（wild poliovirus,WPV）和脊灰疫苗衍生病毒（vaccine-derived poliovirus,VDPV）,提示广西继续保持无脊灰状态。     

广东省2001年急性弛缓性麻痹病例病原流行病学分析

目的 对广东省2001年急性弛缓性麻痹（AFP）病例进行病原流行病学分析。方法 收集2001年AFP病例粪便标本，采用RDa和L20B细胞对标本进行病毒分离的鉴定，并对AFP病例的免疫史，性别，年龄，60d随访结果与病原学结果之间的关系进行了分析。结果 288例AFP病例均采集了粪便标本，分离到脊髓灰质炎病毒（PV）28株，阳性率为9.7%，均为疫苗株，其中Ⅱ型病毒（PVⅡ）15株，为优势株；分离到非脊灰肠道病毒（NPEV）21株，阳性率为7.3%，脊灰减毒口服活疫苗（OPV）“零”剂次免疫的AFP病例的PV分离率依次高于1-2次和完成3次以上（≥3）全程免疫，达50.0%(9/18)。22例无明确诊断的残留麻痹病例的PV分离率为27.3%。远高于其他病例，其中PVⅡ分离率最高，占22.7%(5/22)。结论 2001年广东省未发现由脊灰野病毒引起的病例；PVⅡ可能是部分未完成全程免疫的AFP病例的致麻痹病因。     

经河北省脊髓灰质炎实验室监测结果分析

目的：分析河北省脊髓灰质炎（脊灰）实验室的监测状况，及时监测可能出现的脊髓灰质炎疫苗衍生株（VDPV）或输入脊灰野病毒，以防止其扩散。方法：按世界卫生组织《脊髓灰质炎病毒检验手册》进行病毒分离与血清定型，用PCR—RFLP法和ELISA法做型内鉴定。结果：河北省脊灰实验室各项监测指标均达到世界卫生组织和卫生部的要求。2003-2004年共采集了743例急性驰缓性麻痹（AFP）病例粪例标本，所有标本用L20B、RD和Hep-23种细胞同时进行肠道病毒分离。分离到脊灰病毒（PV）67株，非脊灰肠道病毒（NPEV）74株。从AFP病例及其密切接触者粪便标本中共分离到P、79株，用血清型中和试验和PCR—RFLP法进行型内鉴定，结果为Ⅰ型8株，Ⅱ型24株，Ⅲ型20株，混合型15株，PV＋NPEV7株，疫苗变异株5株。将PV混合株进行单型分离后，所有单型毒株共107株，经ELISA试验鉴定，其中疫苗类似株（SL）104株，占97．2％，双反应株（DRV）17株，占2．8％。结论：河北省2003-2004年未发现疫苗衍生脊灰病毒或输人性脊灰野病毒。     

山西省2006年4例聚集性高危急性弛缓性麻痹病例分析

目的对山西省2006年报告的4例聚集性高危急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例进行流行病学分析,并对采集的粪便标本中分离到的4株Ⅲ型脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)进行VP1编码区基因特征分析,以判断这起事件的性质。方法按照世界卫生组织《脊灰实验室手册》进行病毒分离与血清学定型,用逆转录-聚合酶链反应扩增VP1编码区基因片段,并进行核苷酸序列测定和分析,构建基因亲缘关系树。结果4例高危AFP病例中的3例为疑似疫苗相关麻痹型脊灰(Vaccine Associated Paralysis Poliomyelitis,VAPP),在发病时间上接近。4株Ⅲ型PV与疫苗参考株BJOPVⅢ相比,VP1编码区核苷酸同源性分别为99.7%、99.9%、99.4%、99.9%,均鉴定为疫苗相关株。基于VP1编码区核苷酸序列建立的进化树表明,4株PV之间无相关性,从3例VAPP中分离到的3株Ⅲ型PV在VP1编码区共享第2637位胞嘧啶核苷酸(C)→尿嘧啶核苷酸(U)突变位点,该位点变异导致氨基酸由缬氨酸(Val)突变为丙氨酸(Ala)。结论加强聚集性高危AFP病例和VAPP的实验室监测,早期发现PV循环并及时阻断。     

陕西省脊髓灰质炎病毒检测分析

目的分析陕西省2003-2008年检出脊髓灰质炎(以下简称脊灰)病毒(PV)的急性弛缓性麻痹(AFP)病例流行病学特征,提高对疫苗衍生脊灰病毒(VDPV)监测的敏感性。方法对PV阳性的AFP病例相关资料进行流行病学分析,对疫苗变异PV采用VP1基因核苷酸序列测定方法进行分子生物学性状分析。结果陕西省2003-2008年共检出PV 29株,分离到的PV以Ⅱ型为主(15株),超过Ⅰ型和Ⅲ型之和;AFP病例集中在≤2岁儿童(75.86%),以零剂次免疫和未全程免疫儿童所占比例较大(51.72%);麻痹部位主要为单下肢、双下肢和四肢;型内鉴定14株为疫苗变异PV,基因序列测定均未达到VDPV(1%)的诊断标准;疫苗变异PV的病例中7例为未全程免疫,9例为0～2岁儿童。结论维持无脊灰阶段,存在着VDPV和发生循环疫苗衍生脊灰病毒(cVDPVs)爆发流行的可能,保持高水平的脊灰减毒活疫苗(OPV)免疫覆盖率,高质量的AFP病例流行病学监测和病毒学监测,具有重要现实意义。     

河北省2008年脊髓灰质炎疫苗株病毒监测分析

目的 分析河北省脊髓灰质炎(脊灰)疫苗株病毒的监测情况,及时监测可能出现的脊髓灰质炎疫苗衍生病毒(VDPV)以防止其扩散. 方法按世界卫生组织<脊髓灰质炎实验室手册>对河北省2008年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者粪便标本进行分离与血清定型,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增目的 基因片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析. 结果从407例AFP病例粪便标本中,分离到脊灰疫苗株病毒24株,分离率为5.90%,从24例AFP密切接触者粪便标本中分离到2株脊灰疫苗株病毒.对分离到的39株单血清型PV进行了VP1基因核苷酸序列测定和分析,均未发现VDPV和脊灰野病毒. 结论 2008年河北省继续保持无脊灰状态,实验室监测系统敏感有效,为维持无脊灰状态提供了可靠的实验室依据.     

从急性弛缓性麻痹病例中分离1株VP_1编码区Ⅲ/Ⅱ型疫苗重组的脊髓灰质炎病毒

目的鉴定吉林省从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离的1株VP1编码区Ⅲ/Ⅱ型疫苗重组脊髓灰质炎(脊灰)病毒[Vaccine-recombinant Poliovirus(PV),VRPV]。方法粪便标本采自1例2岁吉兰-巴雷综合征病例,使用转人PV受体的小鼠肺细胞系(Mouse Cell Line Expressing the Gene for the Human Cellular Receptor for PV,L20B)细胞和人横纹肌肉瘤(Human Rhabdomyosarcoma,RD)细胞进行病毒分离,阳性标本进行中和试验(Neutralization Test,NT)鉴定血清型,并通过逆转录-聚合酶链反应进行VP1编码区扩增和核苷酸序列测定,利用Bioedit软件对该序列结果与赛宾(Sabin)疫苗株PV进行核苷酸和氨基酸序列比对,分析重组位点的位置以及核苷酸和氨基酸的变异情况。结果该标本接种到RD和L20B细胞后,均发生了肠道病毒特征性病变,经血清学定型,结果为Ⅱ+Ⅲ型PV。VP1编码区核苷酸序列分析表明,其中的Ⅱ型PV与Sabin 2株PV比较,发生了1个核苷酸变异;Ⅲ型PV为VP1编码区Ⅲ型与Ⅱ型VRPV,与相对应的Sabin株PV相比,无核苷酸点变异,在VP1编码区重组的Ⅱ型PV序列为106个核苷酸。血清NT证明,该VRPV仍能被Ⅲ型完全中和,而不能被Ⅱ型中和。结论虽然Ⅲ型PV株中插入了Ⅱ型抗原位点NAg3a,但Ⅲ型PV株总体的型特异性抗原特征未发生改变。PV自然重组很少发生在衣壳蛋白编码区,发现的这株VRPV中和特性与Sabin株PV相比未发生变化。     

2001-2005年河北省急性驰缓性麻痹病例肠道病毒感染流行病学特征分析

目的 了解急性驰缓性麻痹（AFP）病例中肠道病毒（EV）感染情况，为有效控制EV感染所致麻痹提供科学依据。方法 对河北省2001—2005年EV感染的AFP病例的流行病学、病毒学及临床特征进行分析。结果 AFP病例脊灰病毒（PV）感染率年平均为9．7％，非脊灰肠道病毒（NPEV）感染率年平均10．0％。PV感染存在夏秋季及冬季2个高峰，而NPEV感染则有明显的夏秋季高峰。PV和NPEV感染主要发生在小年龄人群，≤5岁病例分别占94．9％和82．7％。发病60d后残留麻痹率为48．0％和20．5％。12例AFP病例分离出PV变异株病毒。结论 应加强对脊灰疫苗变异病毒的监测及其致病性的研究，同时加强对NPEV致麻痹的预防与控制工作。     

贵州省2004年一起疫苗衍生株脊髓灰质炎病毒流行的调查分析

目的证实2004年贵州省贞丰县发生的Ⅰ型疫苗衍生株脊髓灰质炎（脊灰）病毒循环（cVDPVs），分析cVDPVs发生原因，及时发现脊灰野病毒（wild—poliovirus）、疫苗衍生株脊灰病毒（VDPVs）和临床相似症状的其他脊灰疫苗相关株病毒。方法对疫区进行流行病学现场调查，采集急性弛缓性麻痹（AFP）病例及密切接触者粪便标本进行脊灰病毒（PV）分离鉴定与基因序列测定，并对贞丰县近几年报告AFP病例及接触者粪便标本病毒学监测结果进行分析。结果从贞丰县挽澜乡2例AFP病例和3名密切接触者粪便标本中分离到Ⅰ型VDPVs；发生Ⅰ型cVDPVs事件后，5例诊断为临床符合脊灰的AFP病例中有3例分离到Ⅰ型或Ⅱ型脊灰疫苗相关株病毒；病毒学监测结果显示，贞丰县人群中肠道病毒阳性检出率（55．1％）明显高于贵州全省水平（23．2％），2004年PV分离率（36．8％）明显高于往年，16株PV中Ⅰ型所占比例（43．8％）明显高于贵州全省平均水平（18．3％）。结论脊灰Ⅰ型VDPVs已经在贞丰县引起了循环（cVDPVs）；人群中PV和非脊灰肠道病毒带毒率明显增高及疫苗接种率严重低下，是该次Ⅰ型cVDPVs发生的原因；应加强无脊灰状态下疫苗接种率的评估和早期疫情预测工作。     

浙江省杭州地区手足口病病原谱分析和肠道病毒71型VP1基因分析

[目的]分析杭州地区手足口病的病原谱构成,并对肠道病毒(EV)71型的VP1基因进行核苷酸和氨基酸的序列的比对分析,了解杭州地区EV71的基因特征。[方法]采集98份手足口病确诊病例的粪便标本,用EV71和柯萨奇病毒A组(CoxA)16型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定,并选择6例EV71检测结果阳性的标本进行病毒分离并进行VP1基因的特异性扩增并进行测序,结合EV71各亚型的代表株构建系统进化树,并对VP1蛋白的氨基酸序列进行分析。[结果]通过RT-PCR特异性检测,发现EV71阳性结果22份,阳性率为22.4%;CoxA16阳性结果27份,阳性率为27.6%。测序结果表明6株EV71之间的VP1基因核苷酸同源性为92.2%～98.5%,氨基酸同源性为99.0%～100%。通过与各代表亚型进行核苷酸同源性比较后发现此次分离得到的EV71病毒都属于C4亚型。6株EV71与部分亚型代表株间在BCloop区域的氨基酸序列存在着差别,而SP70区域的氨基酸序列则完全一致。[结论]在手足口病患者中,由EV71感染引起的比例越来越大;此外,此次在杭州地区分离的EV71病毒都属于C基因型的C4亚型,尚没有证据说明此次在杭州地区分离的6株EV71毒株的毒力有增强。     

2006-2010年湖南省急性弛缓性麻痹病例病原学监测结果分析

目的分析湖南省2006-2010年急性弛缓性麻痹（AFP）病例病毒学监测情况,巩固无脊髓灰质炎（脊灰）成果。方法按照WHO规定的方法,对湖南省2006-2010年所有AFP病例粪便标本均采用L20B和RD两种细胞进行肠道病毒（EV）分离鉴定,脊灰病毒阳性株送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室进行型内鉴别。结果湖南省2006-2010年AFP病例病原学监测指标达到国家要求。在1 291例（2 566份）AFP病例标本中,分离出脊灰病毒（PV）88株、非脊灰肠道病毒（NPEV）333株,分离率分别为3.43%、12.98%;52例PV阳性标本行型内鉴别,共检出45株疫苗变异脊灰病毒,其余均为疫苗相关脊灰病毒,未发现脊灰野病毒。PV与NPEV全年均可检出,PV分离率5、6、7月较高;全省14个地市除湘潭和张家界外,其它地市均检出脊灰病毒（PV）阳性病例;各年龄组之间PV分离率差异有统计学意义（P〈0.01）,分离率随着年龄的增长而下降;不同免疫史之间PV分离率比较差异有统计学意义（P〈0.01）,完成脊灰减毒口服活疫苗（OPV）3次以上全程免疫的AFP病例的PV分离率低于未完成全程免疫者。结论湖南省2006-2010年未发现脊灰野病毒,维持了无脊灰状态。在实现无脊灰目标后,仍应加强AFP病例的病毒学监测工作,以确保最终实现全球消灭脊灰的目标。