滋养细胞疾病和妊娠绒毛组织中端粒酶的表达

目的 明确妊娠滋养细胞疾病和正常绒毛组织中的端粒酶表达状况。探索端粒酶经在滋养细胞肿瘤形成中的作用。方法 应用以聚合酶 反应为基础的端粒酶测定方法（ＴＲＡＰ）,对不同临床类型妊娠滋养细胞疾病及不同发育阶段正常妊发对绒毛的６１例的端粒酶活性进行检测。结果 绒毛膜癌及侵蚀性葡萄胎３６．４％（４／１１）端粒酶阳笥,葡萄胎２６．３％（５／１９）阳性,早孕６０天以内绒毛全部（１０／１０）阳性,此期以后的胎盘     

口腔颌面肉瘤组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的：探讨口腔颌面部肉瘤组织中端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达.方法：应用原位杂交技术检测37例口腔颌面部肉瘤和14例良性间叶肿瘤组织中hTERT mRNA的表达,并探讨了肉瘤组织中hTERT表达与瘤细胞分化、临床复发或转移的关系.结果：肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达率明显高于良性肿瘤（62.2% vs 14.3%,P＜0.05）.在高、中、低分化肉瘤组织中,hTERT mRNA阳性表达率分别为41.7%、50.0%和86.7%,其中高、低分化组差异有统计学意义（P＜0.05）;hTERT mRNA表达与肉瘤复发密切相关（P＜0.05）;发生淋巴结转移和（或）远处转移肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达有升高的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：在口腔颌面部肉瘤发生发展过程中hTERT基因可能起作用.检测hTERT mRNA表达对于评估口腔颌面部肉瘤的临床侵袭潜能及预后可能有参考价值.     

PCNA在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达与相关性研究

目的：通过检测PCNA在3种妊娠滋养细胞疾病和正常绒毛中的表达找出规律，并观察良性葡萄胎可疑恶变化疗后对PCNA表达值的影响，从而找出预测葡萄胎恶变的阳性指标，方法：采用免疫组化SP法检测正常早孕绒毛（人流术）20例，葡萄胎40例，侵蚀性葡萄胎20例，绒毛膜癌20例中PCNA的表达，并采用等级资料的秩和检验法进行统计。结果：绒癌，侵蚀性葡萄胎中PCNA阳性细胞数均高于正常绒毛或葡萄胎（P＜0．01），绒癌中PCNA阳性细胞数高于侵蚀性葡萄胎（P＜0．01），结论：PCNA在滋养细胞疾病中的表达阳性率与滋养细胞疾病的增生程度和恶性程度呈正相关关系。PCNA做为预测葡萄胎恶变，及恶变程度和预后的手段是客观，可靠，易行的。     

骨肉瘤细胞中端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

目的研究不同骨肉瘤细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA成分的表达情况。方法用全基因组芯片检测人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOB1．19中hTERTmRNA表达;用逆转录PCR、实时定量PCR法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOBl．19中hTERTmRNA表达。结果全基因组芯片法显示MG-63、SAOS-2、U2-OS、hFOB1．19细胞系中hTERTmRNA表达强度分别为0．9、-0．1、-0．8、11．4,各细胞系均处于相对低表达水平;荧光实时定量PCR法显示MG-63、Hela细胞系中hTERTmRNA相对表达水平分别为1．00±0．08和2．13±0．11,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论hTERTmRNA在骨肉瘤各细胞系中表达率较低,端粒延伸替代机制可能在骨肉瘤端粒维持方面发挥重要作用。     

膀胱移行细胞癌中端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTRT)在膀胱移行细胞癌BTCC中的表达及其与肿瘤分级、分期、复发之间的关系。方法　采用原位核酸分子杂交法 ,对 5 2例BTCC和 10例正常膀胱中hTRT的表达情况进行检测 ,分析其在膀胱癌和非癌膀胱组织中的表达以及与肿瘤病理学分级、分期和患者复发情况的关系。结果　 5 2例BTCC中hTRT表达均较正常膀胱黏膜增高 ,阳性率为 90 4 % (P <0 0 0 1) ;hTRT的表达随BTCC的病理分级、分期的增高而相应增高 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中表达率分别为 80 0 %、95 8%、10 0 % ,浅表性 (Tis T1 )、浸润性 (T2 T4 )中表达率分别为 87 0 %、93 1% ,初发BTCC、复发BTCC表达率为 87 5 %、95 0 % (P<0 0 5 ) ;结论　人端粒酶逆转录酶 (hTRT)在BTCC中表达上调 ,提示hTRT可能通过激活端粒酶 ,使细胞无限增殖 ,对BTCC的发生发展起重要作用 ;hTRT随BTCC病理分级、分期增高而表达增高 ,并与肿瘤复发有关 ,hTRT有可能作为判断分级、分期 ,监测复发的指标 ;hTRT可能为膀胱癌基因治疗提供新的合理靶点。     

人乳腺癌中端粒酶结构表达的研究

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)、人端粒酶RNA亚基(hTR)和预后指标包括肿瘤的大小、分级、结节状态和患者年龄间的联系。方法RT-PCR检测92例人乳腺恶性肿瘤和10例良性肿瘤的hTERT和hTR的表达。结果hTR和hTERT的表达分别为62例(67.4%)和76例(82.6%),与<40岁的人群比较,>40岁的人群hTR表达更显著,良性肿瘤中没有1例表达hTR,6例表达hTERT。hTR和hTERT的表达与肿瘤的分级、分期、淋巴结转移和病理分型呈显著相关,与肿瘤大小没有相关性,在76例hTERT阳性的患者中,均有不同程度的hTR表达阴性,在hTR阳性的患者中没有hTERT阴性。结论hTERT和hTR的表达同乳腺癌具有相关性;hTR比hTERT更能反映乳腺癌的发生情况。     

妊娠滋养细胞疾病护理

妊娠滋养细胞疾病是由胚胎绒毛滋养细胞过度增生引起的疾病.根据滋养细胞的增生程度、有无绒毛、侵蚀能力及其生物学特征,可分为良性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌.     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的 建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达.方法 Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型.处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达.结果 30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERT mRNA表达阳性.结论 脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERT mRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义.     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。方法Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型。处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达。结果30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERTmRNA表达阳性。结论脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERTmRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义。     

妊娠滋养细胞疾病中EMT相关蛋白CK-18、波形蛋白的表达及意义

目的 检测上皮细胞间质细胞转化（EMT）相关蛋白--细胞角蛋白18（CK-18）和波形蛋白（vimentin）在正常早孕绒毛、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化法（SP法）检测39例正常早孕绒毛组织、33例葡萄胎组织和32例妊娠滋养细胞肿瘤组织（侵袭性葡萄胎27例、绒毛膜癌5例）中CK-18、vimentin的定位及表达情况。结果 CK-18在各种类型滋养细胞中呈强阳性表达,正常绒毛组的CK-18表达水平高于葡萄胎组及妊娠滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）,葡萄胎组CK-18表达高于滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）;vimentin于各组滋养细胞中呈弱阳性表达,各组间的表达差异无统计学意义（P>0.05）。在葡萄胎滋养细胞轻度增生组,CK-18蛋白的相对表达量高于滋养细胞中或重度增生组（P<0.01）。在滋养细胞肿瘤解剖学Ⅰ期组CK-18蛋白的相对表达量高于解剖学Ⅱ期及以上组（P<0.001）。结论 伴随着滋养细胞恶性度的升高CK-18的表达逐渐降低,提示EMT可能与滋养细胞的恶性转化有相关性。     

人端粒酶逆转录酶在膀胱肿瘤中的表达及其与预后的关系

目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在膀胱肿瘤中的定量表达,探讨hTERT与膀胱肿瘤预后复发的关系。方法采用免疫组织化学法和高清晰彩色医学图文分析系统,对45例膀胱移行细胞癌(BTCC)组织标本中的hTERT的表达情况进行定量检测,并用13例正常膀胱组织标本作为对照。结果BTCC组织标本中均可见有hTERT的表达,正常膀胱组织中无表达。hTERT的表达强度与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位以及肿瘤的单多发等情况无关(P>0.05),而与肿瘤复发有关(P<0.05)。结论hTERT在膀胱肿瘤中表达上调,其活性与预后相关,可以作为检测肿瘤复发的指标。     

人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建

目的：构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法：用RT-PCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-T Easy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝-白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX-4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega 2．0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX-4T-1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Western blot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果：PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98．73％,氨基酸序列同源性为99．68％。Western blot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28．4％。结论：成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。     

hTERT蛋白在胃腺癌组织中定量表达的研究

目的 探讨hTERT蛋白在胃腺癌组织中表达情况及其与胃癌进展的关系.方法 对68例胃腺癌和10例正常组织采用流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达.结果 hTERT蛋白流式细胞术测定在进展期胃癌、早期胃癌和正常胃黏膜荧光指数FI值分别为1.92±0.17、1.60±0.18和0.98±0.15,进展期胃癌hTERT含量高于早期胃癌(P＜0.01)、早期胃癌高于正常胃黏膜(P＜0.01);中、低分化腺癌hTERT蛋白FI值分别为1.89±0.20和1.92±0.19显著高于高分化腺癌1.71±0.19(P＜0.01);有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.05);T1-T2级胃癌TERT蛋白FI值高于T3-T4级胃癌(P＜0.05).结论 hTERT高表达与胃腺癌进展相关,可作为胃癌进展的生物学标志之一.     

胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

hTERT基因荧光真核表达载体的构建及表达

目的：构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)正、反义荧光真核表达载体,并检测其在人胚胎成纤维细胞中的表达．方法：采用基因重组技术,将hTERT cDNA正向克隆到荧光真核表达载体pIRES2-EGFP中,NotI酶切鉴定;采用脂质法,将重组基因pIRES2-EGFP-hTERT转染入原代培养的人胚胎成纤维细胞;采用激光共聚焦显微镜、RT-PCR及Western blot检测hTERT在胚胎成纤维细胞中的表达．结果：经NotI酶切后,hTERT正义重组质粒被切成1．4kb和7．4kb2个片段,反义重组质粒为4．8kb和4．0kb2个片段,与理论预期长度相符;pIRER2-EGFP-hTERT重组基因经脂质法转染,G418筛选,获得一个阳性克隆,激光共聚焦显微镜下可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot可见hTERT mRNA转录及其蛋白的表达。结论：成功构建了h TERT正义荧光真核表达载体,并可在人胚胎成纤维细胞中表达。     

正、反义hTERT基因真核表达载体的构建与鉴定

目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,并将扩增产物TA首先克隆至pGEMR-T载体,然后双酶切pGEM-T载体回收目的片段再克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(±)中,并对重组体进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实构建的正、反义hTERT基因真核表达载体克隆成功,插入片段测序结果与Genebank的hTERT cDNA的部分序列完全一致。结论成功地构建了正、反义hTERT基因真核表达载体,为下一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗打下了实验基础。     

人端粒酶逆转录酶基因启动子区的克隆及其真核表达载体的构建

目的：构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体。方法：用核酸内切酶NotⅠ和KpnⅠ酶切报告基因GFP,插入pcDNA3．1( )载体,得到pcDNA3．1( )-GFP(PG)载体;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列,测序后用核酸内切酶BglⅡ和KpnⅠ酶切插入PG载体,得到pcDNA3．1( )-GFP—hTERT(PGT)载体。将PGT载体转染人食管癌EC9706细胞系,经G418筛选,荧光显微镜下观察。结果：克隆得到的启动子序列与文献相符,重组载体经酶切鉴定方向正确,含有人端粒酶逆转录酶基因启动子序列。经转染人食管癌EC9706细胞系,在荧光显微镜下观察到绿色的阳性克隆。结论：克隆的人端粒酶逆转录酶基因启动子序列在真核细胞中具有启动子活性。     

hTERT及c-myc蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨宫颈癌及癌前病变中端粒酶逆转录酶（hTERT）和c-myc蛋白的表达及相互关系。方法以44例宫颈癌、18例宫颈上皮内瘤变（CIN）和6例正常宫颈组织为研究对象，采用免疫组化SP方法检测c-myc蛋白、hTERT蛋白，并对各指标阳性表达率和相关性进行比较分析。结果正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈癌组织中，c-myc蛋白的阳性率分别为0，38．9％，72．7％；hTERT蛋白为0，33．3％，77．3％。二者在CIN、宫颈癌中分别与正常组织相比差异有显著性（P〈0．05）。宫颈癌组织中的表达较CIN高，差别有显著性（P〈0．05）。宫颈癌中，c—myc蛋白和hTERT蛋白的表达在有周围组织浸润、有淋巴结转移和远处转移时显著增高，其阳性表达随期别的增加而增高（P〈0．05）。二者的表达呈正相关。结论hTERT基因的过度表达在宫颈癌的发生发展过程中具有重要作用；c-myc蛋白和hTERT的过表达是宫颈癌发生中的早期事件，其表达水平随着宫颈癌恶性程度的增加而增加; c-myc在转录水平上激活hTERT的表达，可能是宫颈癌发生发展的重要阶段。     

人端粒酶逆转录酶在喉鳞状细胞癌中表达与c-myc的相关性

目的研究人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在喉鳞状细胞癌中和病理分级、临床参数的关系以及和c-myc的相关性。方法用原位杂交法检测40例喉鳞状细胞癌中hTERT mRNA的表达,用免疫组织化学法检测c—myc蛋白。结果喉正常组织、不典型增生、鳞癌组织中hTERT mRNA的阳性率分别为0％（0／10）、10％（1／10）、80％（32／40）,喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织（P〈0．05）和不典型增生（P〈0．05）,hTERT mRNA水平与c—myc的表达呈显著相关（r=0．5422,P〈0．01）。喉鳞癌中hTERT mRNA表达水平与病理分级不相关（P〉0．05）,与年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况不相关（P〉0．05）。结论喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织和不典型增生,有助于喉部良恶性病变的鉴别,c-myc的过度表达可能是喉鳞癌端粒酶活性升高的一个重要机制。