低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达影响的实验研究

目的观察桥粒芯糖蛋白1（Desmogleinl,Dsg1）在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法用Dsg1抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果与新鲜皮片组相比,-196℃条件下皮肤组织结构保存较好,Dsg1含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论皮肤低温保存冷冻损伤可能与桥粒跨膜蛋白Dsg1破坏有关。     

人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和在寻常型天疱疮中免疫识别的初步研究

目的 扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desmoglein 4,Dsg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris, PV)发病机制的研究提供依据.方法 根据GenBank中的Dsg4序列(登录号为AY177664)分析,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常皮肤组织中抽提RNA,逆转录合成cDNA,聚合酶链反应(PCR)扩增皮肤组织桥粒芯糖蛋白4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与质粒pET32a在T4 DNA连接酶作用下相连接,转化E.coli DH5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子DNA序列测定鉴定;重组融合蛋白经ELISA法与PV患者、正常对照组血清进行反应.结果 RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到均约为350 bp的4条条带;质粒载体pET32a连接的目的基因经序列测定后与在GenBank登录的Dsg4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4核酸序列完全一致,4个Dsg4胞外区域cDNA读码框架正确;Dsg4 EC1、EC2、EC3和EC4与患者血清反应,而不与正常对照组血清反应.结论 Dsg4胞外区域多肽片断在PV发病中可能有作用.     

天疱疮患者血清抗桥粒芯糖蛋白抗体与疾病临床特征的相关性研究

目的：探讨天疱疮患者血清抗桥粒芯糖蛋白（Dsg）抗体与疾病临床特征的相关性。方法：选择49例天疱疮患者,比较其抗Dsg类别、亚型、滴度与疾病特征的相关性。结果：寻常型天疱疮（PV）患者活动期抗Dsgl、Dsg3抗体阳性率明显高于稳定期（P〈0．05）,落叶型天疱疮（PF）患者活动期抗Dsgl抗体阳性率高于抗Dsg3抗体（P〈0．05）;活动期患者两种抗体滴度随病情加重而明显升高（P〈0．05）;活动期患者血清两种抗体IgG4亚型滴度明显高于IgG1,稳定期患者两种抗体IgG4亚型滴度明显下降且远低于IgG1（P〈0．05）。结论：天疱疮患者血清抗Dsg抗体与疾病表型、病情、活动性存在明显相关性,测定其存在和滴度对临床诊断与治疗有重要指导意义。     

天疱疮患者抗桥粒芯糖蛋白与疾病相关性分析

目的：探讨酶联免疫吸附测定（ELISA ）检测血清桥粒芯糖蛋白（Dsg ）1和Dsg3在天疱疮诊断及治疗中的应用价值。方法选择2014年1～12月在该科确诊为天疱疮的患者47例（观察组）,同期排除天疱疮的患者52例为对照组。间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,ELISA检测Dsgl、Dsg3;分析其与天疱疮病情的相关性。结果 ELISA法的敏感性为95．74％,特异性为92．31％。IIF法敏感性为93．62％,特异性为86．54％。二者比较差异无统计学意义（P＞0．05）。30例寻常型天疱疮患者16例Dsg1、Dsg3均阳性,8例红斑型和5例落叶型天疱疮患者均只有Dsg1阳性,2例增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3均为阳性。寻常型和增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3滴度分别为130．85±86、112．30±85．05,疾病活动性评分（5．10±1．86）分,相关系数分别为 r＝0．476（P＝0．008）、r＝0．816（P＝0．001）。落叶型和红斑型天疱疮Dsg1滴度142．59±78．52,疾病活动评分平均为（2．77±0．92）分,r＝0．800,P＝0．001。结论 ELISA检测Dsg1、Dsg3敏感性、特异性高,有助于天疱疮的诊断及病情严重程度的评价。     

桥粒芯糖蛋白1和2在不同表皮肿瘤中的表达

目的:分析桥粒芯糖蛋白1和桥粒芯糖蛋白2在不同表皮肿瘤中表达的改变,探讨桥粒相关成分与表皮肿瘤的临床、病理及生物学行为之间的关系。方法:采用过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组织化学染色方法,对桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)、桥粒芯糖蛋白2(Dsg2)在鳞状细胞癌(SCC)、基底细胞癌(BCC)、Bowen病、日光角化病(AK)、角化棘皮瘤(KA)、脂溢性角化症(SK)中的表达进行检测。结果:桥粒芯糖蛋白1和桥粒芯糖蛋白2在正常皮肤表皮中显著表达()并广泛分布于表皮全层及毛囊、汗腺上皮;鳞状细胞癌的肿瘤组织中桥粒芯糖蛋白1、2表达显著减弱或完全消失;基底细胞癌中桥粒芯糖蛋白1、2表达显著减弱或完全消失;Bowen病、日光角化病中桥粒芯糖蛋白1、2表达下调,但与鳞状细胞癌和基底细胞癌的近核染色( )和完全消失(-)相比,其主要表达类型为胞膜灶状染色();在绝大多数角化棘皮瘤、脂溢性角化症中桥粒芯糖蛋白1、2表达方式为强而连续的胞膜染色(),与正常皮肤表皮的表达非常相似。结论:桥粒芯糖蛋白1、2在皮肤恶性肿瘤中的表达显著减弱或完全消失,而皮肤良性肿瘤中桥粒芯糖蛋白1、2表达与正常表皮基本相同。提示皮肤恶性肿瘤中桥粒芯糖蛋白1、2的表达显著减弱或完全消失可能与肿瘤的侵袭性和远处转移有关,桥粒芯糖蛋白1、2可能对表皮良、恶性肿瘤的鉴别诊断具有一定的价值。     

桥粒芯蛋白2基因在妇科恶性肿瘤中的研究进展

桥粒芯蛋白2(Desmoglein 2,DSG2)作为细胞紧密连接的跨膜糖蛋白,参与调节细胞黏附性、细胞增殖、细胞分化等功能。DSG2基因在妇科恶性肿瘤中常发生异常表达,影响肿瘤恶性生物学行为。本文主要就DSG2基因突变及其表型在妇科恶性肿瘤进展中的作用及其机制进行综述。文献结果发现DSG2基因可能成为宫颈癌、子宫内膜癌等妇科恶性肿瘤的标志物之一,且可能成为卵巢浆液性癌耐药性预测指标。     

抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗桥粒芯糖蛋白1、3抗体（Dsg1、Dsg3）在天疱疮中的诊断价值

目的：分析评价抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗桥粒芯糖蛋白1、3抗体（Dsg1、Dsg3）在天疱疮中的诊断价值。方法选择2011年2月-2013年2月在新疆医科大学第一附属医院皮肤科诊治经临床、组织病理及间接免疫荧光确诊为天疱疮的34例患者（试验组）,选择同期排除天疱疮的36例患者为对照组。采用间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测 Dsg1、Dsg3;统计各检测指标的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）和诊断符合率。结果试验组和对照组抗表皮棘细胞桥粒抗体的阳性率分别为73．5％（25/34）、2．8％（1/36）。Dsg1抗体阳性率分别为70．6％（24/34）、0．0％（0/36）,Dsg3抗体阳性率分别为79．4％（27/34）、5．6％（2/36）。在天疱疮患者中,抗表皮棘细胞桥粒抗体试验的敏感度、特异度、PPV、NPV、诊断符合率分别为73．5％、97．2％、96．2％、79．5％、85．7％,Dsg1分别为70．6％、100．0％、100．0％、78．3％、85．7％,Dsg3分别为79．4％、94．4％、93．1％、82．9％、87．1％。3种指标在天疱疮患者中灵敏度和特异度的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论同时行血中循环抗体检测与具体靶抗原确认试验检测,能互相补充,减少临床漏诊,提高诊断阳性率。抗天疱疮抗体阳性结果对确诊天疱疮准确性较好,阴性者排除天疱疮的价值较大。     

低温储存对皮肤组织α辅肌动蛋白和纽蛋白表达的影响

目的:观察α辅肌动蛋白和纽蛋白在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用α-actinin、vinculin抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用HE染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中保存皮肤组织结构保存较好,α-actinin、vinculin含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤与黏附分子α-actinin、vinculin破坏有关。     

桥粒胶蛋白2及其在肿瘤疾病中的研究进展

桥粒（Desmosome, DSM）是大型的大分子蛋白质集合体,它将中间丝细胞骨架与钙黏蛋白介导的细胞黏附点机械地连接起来,为维持经历机械应力组织（如皮肤、心肌和胃肠道黏膜等）提供结构完整性。桥粒胶蛋白（Desmocollins,DSCs）属于钙黏蛋白超基因家族,在细胞间黏附中发挥重要作用。桥粒胶蛋白2(Desmocollin-2,DSC2)是DSC家族成员,已被发现在几种类型的癌症中异常表达,影响肿瘤细胞的侵袭和转移,并参与肿瘤进展。DSC2在人类不同疾病中的表达和调控机制的差异为其治疗提供了潜在靶点。研究并阐明DSC2在肿瘤中的发生机制,探索临床检查和治疗的具体靶点,可为疾病的早期治疗提供实用思路。本文对DSC2的分子结构及其相关分子机制、DSC2与肿瘤的关系进行综述。     

桥粒芯胶蛋白3前导肽基因的克隆和原核表达

目的：克隆人桥粒芯胶蛋白3前导肽(Dc3p)基因，并进行表达、纯化和鉴定。方法：用PCR法从桥粒芯胶蛋白(Dc)cDNA文库中扩增出Dc3p基因，与pGEX-4T-2载体连接成重组表达质粒pGEX-4T-2／Dc3p；重组质粒转入B121大肠杆菌：经诱导表达谷胱甘肽S-转移酶-Dc3p(GST-De3p)融合蛋白，该蛋白经Glutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化，SDS-PAGE和免疫印迹法检测鉴定。结果：经酶切及序列分析鉴定，重组质粒pGEX-4T-2／De3p成功构建，诱导后高表达GST-De3p融合蛋白并得到纯化，免疫印迹法证实表达蛋白为Gsr-Dc3p。结论：获得高表达、高纯度的GST-Dc3p融合蛋白，为De3p的功能及免疫学分析打下基础。     

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量，并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，FN、LN含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。     

低温保存皮肤组织中纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在不同温度保存皮肤组织中的分布及表达，探讨其与皮肤冷冻保存的关系．方法：用FN，LN抗体对新鲜皮肤以及4℃，-20℃，-80℃或-196℃保存的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定并比较它们在表皮组织中的含量，并通过HE染色比较观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮肤组相比，-196℃，H抗冻液中皮肤组织结构保存较好，FN，LN含量变化不明显，而4℃，-20℃，-80℃保存皮肤的组织结构均有明显破坏，FN，LN含量亦明显下降。结论：皮肤低温冷冻保存时细胞外基质中FN，LN发生丢失。     

海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

人类冻融胚胎移植技术的临床应用

目的:研究冻融胚胎移植的临床应用及分析影响冻融胚胎移植妊娠率的相关因素.方法:对63例80个冻融胚胎移植周期进行回顾性分析,通过IVF或ICSI获得的剩余胚胎采用慢速法冷冻保存,快速法解冻复苏.结果:解冻392个胚胎,成活269个胚胎,胚胎复苏率为68.62%.周期临床妊娠率为23.75%.每周期植入3个胚胎组的临床妊娠率显著高于植入≤2个胚胎组(x2=4.98,P＜0.05).妊娠周期胚胎细胞完整率及优质胚胎率显著高于非妊娠周期(67.28%vs60.09%,89.09%vs73.55%,均为P＜0.025).结论:冻融胚胎移植的成功率与移植胚胎的数量和质量密切相关.     

冷冻保存软骨移植的实验研究

本实验采用低温冷冻异体兔胎软骨移植，实验组和新鲜软骨移植对照组。每组各移植软骨１２０块，于植入后１５、３０、６０、９０、１２０ｄ取出软骨标本，进行肉眼观察，光镜和电镜检查，免疫组化检查，结果冻存软骨无吸收和再生，亦无坏死，排异反应轻，对照组有不同程度的增长，部分出现钙化，边缘灶性坏死，本实验对软骨的冻存在临床应用上有着重要的意义。     

不同复温方法对深低温冷冻复合组织血管活性的影响

目的比较3种不同复温方法对深低温冷冻的复合组织中血管活性的影响,找出一种对复合组织中血管损伤最小的复温方法。方法选用20只新西兰大白兔随机分成四组,切取双侧后肢(对照组为新鲜断肢取血管),三个实验组标本经梯度降温后放入液氮中保存7天。分别采用37℃水浴复温组(A组)、空气复温组(B组)、-20℃冰复温组(C组)方法进行复温。采用光镜、免疫组化方法观察血管内皮细胞活性,结果进行统计学分析。结果光镜观察,A组、B组内皮细胞大片脱落,平滑肌细胞变形;而C组内皮细胞和平滑肌细胞保存较好,更接近对照组;免疫组化检测中,3种复温方法血管内皮中均可见VEGF及CD34呈斑片状的弱表达,-20℃冰复温组(C组)VEGF及CD34的表达更接近对照组,高于37℃水浴复温组(A组)及空气复温组(B组)(P<0.05)。结论 3种不同复温方法对深低温冷冻的复合组织中血管活性影响不同,-20℃冰复温法影响最小。     

冰冻血小板在血小板减少性疾病的临床应用价值

目的探讨冰冻血小板在血小板减少性疾病中应用的有效性与安全性.方法随机选择159 例血小板减少症患者,57例患者给予冰冻血小板输注,102例患者给予新鲜血小板输注,输注前及输注后18～24 h分别测定血小板计数,比较血小板回收率及临床出血症状改善情况.结果冰冻血小板止血有效率达89%,与新鲜血小板相近,但输注后24 h血小板的回收率与新鲜血小板相比有差异.结论冰冻血小板有一定的止血效果,可用于急诊血小板输注,但不宜作常规使用.