日又发现高致病性禽流感病毒

据日本媒体23日报道，在过去1个月里，日本青森县十和田湖附近发现2只天鹅死亡，检测表明它们均感染了H5N1型高致病性禽流感病毒。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

目的 观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性。方法 在生物安全三级实验室，将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠，观察14d，记录沙鼠的体温、体重、临床体征、病理学变化、病毒分离情况及抗体变化。结果 沙鼠感染后发病主要表现在第2～6天，攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等体征，攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻，死亡率为44％，在攻毒后8d检出抗体，主要病理学变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血，镜下可见肺间质充血，血管周围炎性细胞浸润，肝和胸腺淤血，肾出血，肾小管变形。结论 禽流感H5N1型病毒对沙鼠有较强致病性。     

一例疑似禽流感死亡的流行病学调查报告

<正>2003年1月25日,港藉8岁小女孩高美灵,随其母姐兄一家4人回福州市平潭县老家过春节。1月27日下午6点许,出现发热(39℃)、畏寒、头痛等症状,2月4日上午11点5分死亡。其父高仁杰,36岁,于2月6日发病,7日回香港,9日住院,17日死亡。平潭县医院对高美灵死亡诊断为疑似禽流感。香港卫生检测机构从高仁杰和儿子高志强两份     

美国FDA批准人禽流感快速检测方法

美国FDA批准了一种快速、基于PCVR的检测方法,用于检测可疑感染禽流感病毒人群的禽流感病毒株。这种方法用于检测亚洲H5流感病毒株,可在4小时内提供初步结果,而使用当前的检测技术需要2～3天才出结果。H5流感病毒的H5N1亚型已在亚洲和土耳其引起86人死亡,医生和科学家担心,如果出现人与人之间的传播,会引起世界性流感大流行。这种由美国CDC开发的新检测方法被称为流感A／H5（亚洲系）病毒实时RT-PCR引物和探针组合。这种新检测方法将被提供给美国50个州的140个实验室网络,以加强早期发现和监视,提高实验室的反应能力。     

金刚烷胺和奥司他韦体外抗H5N1亚型禽流感病毒的作用

【目的】 观察体外单用金刚烷胺?奥司他韦及两药联合使用对两株H5N1亚型的禽流感病毒分离株(AIV127?AIV174)的抑制作用,了解广东地区分离的不同H5N1毒株之间药物敏感性的差异,为临床合理应用抗病毒药物提供科学依据?【方法】 建立体外H5N1感染模型,根据药物与病毒?细胞的不同作用,通过3种给药方式,使用细胞病变(CPE)?组织培养半数感染量(TCID50)评估抗病毒药物对H5N1的体外抑制作用? 【结果】 三种给药方式金刚烷胺联合奥司他韦,均比单用金刚烷胺体外抑制AIV127及AIV174效果明显(P < 0.01);而仅在治疗给药方式,两者联合比单用奥司他韦效果明显(P < 0.01)?三种给药方式金刚烷胺?奥司他韦及联合用药对同一亚型H5N1 AIV127比AIV174毒株均较敏感(P < 0.01)? 【结论】 抗病毒药物对不同的禽流感病毒毒株之间敏感性存在差异,应根据不同毒株给予相应的抗病毒治疗     

禽流感的哺乳类动物模型研究进展

N1禽流感为新的人畜共患性疾病,建立良好的哺乳动物模型是进一步深入研究人禽流感防治的重要基础。本文报道了禽流感哺乳动物模型研究进展,对病原株、造模方法、模型的临床特征、病理变化、病毒复制等方面进行归纳,比较了小鼠模型、雪貂模型和非人灵长类动物模型特点。各种禽流感动物模型有各自的优点和缺点,应根据不同的实验目的和实验条件选择合适的病毒株和实验动物进行造模。     

H5N1型高致病性禽流感研究进展及其对人类的威胁

H5N1高致病性禽流感是人、禽和其它哺乳动物共患的一种新发传染病,近年禽间疫情波及范围越来越大,人间疫情呈地方性流行趋势.发病人群年龄偏低、病死率高.禽流感病毒有可能变异成一种即有高致病性又有人流感病毒高传播性特点的新型流感病毒,构成越来越严峻的大流行威胁.本文着重就流行病学、病原学及防制对策方面的相关进展进行综述.     

H5N1人禽流感病毒HA基因的克隆和表达

目的对人禽流感病毒A/China/GD01/06（H5N1）HA基因进行克隆和表达,为进一步研究GD01/06HA的致病与免疫机制提供有效制剂。方法将H5N1全长HA基因克隆入原核表达载体pET-32a（＋）,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并对表达的重组蛋白进行鉴定。结果经检验重组质粒p32-HA构建成功,表达蛋白分子量介于66.2~94.0kd。经鉴定所表达的特异性条带为HA蛋白片段。结论HA基因在大肠杆菌中表达并获得特异性重组蛋白,为其生物学、免疫学功能的研究提供了基础。     

不同免疫状态的小鼠对禽流感病毒H5N1感染的敏感性及其机制探讨

目的比较不同免疫状态的小鼠对禽流感病毒的易感性,并探讨可能的原因。方法四种免疫状态的小鼠,无菌BALB/c小鼠,SPF级BALB/c小鼠,SCID小鼠和nude小鼠,以10 TCID50的禽流感病毒50 μL感染小鼠,观察小鼠的体重变化,存活率,各组织脏器的病毒分布,肺组织的细胞因子变化和肺组织病理病变。结果四种小鼠均能感染禽流感病毒,其中,无菌小鼠对禽流感病毒H5N1的易感性最低,存活率最高。并且病毒在无菌鼠体内病毒的复制水平最低,细胞因子TNF-α,IL-12,MIP2,GATA3,IFN-a/β在感染后表达水平最低,其中第7天最低。结论无菌小鼠能感染禽流感病毒,但是相比较SPF级BALB/c小鼠,SCID小鼠和nude小鼠,其易感性最低,可能与病毒在组织内的低复制和细胞因子的低表达均有关。     

禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的病理变化

【目的】通过鼻腔将H5N1禽流感病毒接种ICR小鼠，观察其主要器官组织的病理变化。【方法】麻醉ICR小鼠后将100恤LH5N1禽流感病毒原液用移液枪滴入接毒组小鼠鼻腔，接毒后14d内每隔24h取材一次．采用福尔马林固定，石蜡包埋、切片，HE染色。【结果】禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠后表现出明显的病理改变。ICR小鼠的肺部病变最严重，表现为间质性肺炎，肺间质充血、水肿和淋巴细胞浸润，血管周围淋巴细胞浸润，毛细血管扩张，上皮细胞变性、坏死、脱落，并有充血和单核细胞浸润，肺泡壁明显增宽，血管充血，有的肺泡溶合，呈气肿状。肝、肾、脑等其它脏器也出现病变。【结论】禽流感ICR小鼠模型能复制出人类禽流感疾病的许多病理特征，禽流感H5NI病毒感染ICR小鼠的肺病理类似于人禽流感严重病例的肺病理。     

禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的病理变化

 【目的】 通过鼻腔将H5N1禽流感病毒接种ICR小鼠,观察其主要器官组织的病理变化?【方法】 麻醉ICR小鼠后将100 μL H5N1禽流感病毒原液用移液枪滴入接毒组小鼠鼻腔,接毒后14 d内每隔24 h取材一次,采用福尔马林固定,石蜡包埋?切片,HE染色?【结果】 禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠后表现出明显的病理改变?ICR小鼠的肺部病变最严重,表现为间质性肺炎,肺间质充血?水肿和淋巴细胞浸润,血管周围淋巴细胞浸润,毛细血管扩张,上皮细胞变性?坏死?脱落,并有充血和单核细胞浸润,肺泡壁明显增宽,血管充血,有的肺泡溶合,呈气肿状?肝?肾?脑等其它脏器也出现病变?【结论】 禽流感ICR小鼠模型能复制出人类禽流感疾病的许多病理特征,禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的肺病理类似于人禽流感严重病例的肺病理?     

东南亚禽流感病毒H5N1的HA基因特征分析

目的分析东南亚禽流感病毒HA基因和蛋白序列的特点,比较与我国人禽流感病毒的异同,为人禽流感防控工作提供参考。方法从GenBank获得东南亚和我国H5N1禽流感病毒HA核酸序列,ClustalX1.83和MEGA4.0对HA核酸和蛋白分析,构建遗传进化树。结果东南亚各国H5N1病毒受体位点氨基酸为QSG;越南、泰国、柬埔寨HA蛋白关键位点氨基酸基本没有变化;印尼多个样本发生改变,进化树中聚于一个分支内;中国人与老挝、马来西亚样本关键位点氨基酸相同,进化树中处于同一分支中。结论越南、柬埔寨和泰国H5N1病毒流行株HA蛋白未影响病毒毒力,印尼为一独立的病毒体系,中国与老挝和马来西亚样本来源于同一毒株,中国、老挝和马来西亚之间存在着病毒扩散现象。     

禽流感H5N1亚型病毒对五个不同品系小鼠致病性的比较

目的 比较了不同遗传背景小鼠对禽流感H5N1亚型病毒的致病敏感性,为H5N1禽流感模型制作和机理研究提供依据.方法 近交系BALB/c、C57BL/6和封闭群ICR、NIH Swiss和KM Swiss共五个不同品系小鼠.每个品系实验动物30只,分接毒组20只,空白对照组10只,每组雌雄各半.病毒株为A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1),经测定TCID50为10-4.875/mL.接毒组通过鼻腔接种0.1 mL病毒液,对照组接种正常鸡胚尿囊液.小鼠接毒后连续观察14 d,观察记录临床症状、体温、体重变化,对在实验期间死亡和实验14 d结束后仍然存活的小鼠均进行组织器官病理取材,进行RT-PCR病毒分离检测、HE染色及H5N1抗原特异性免疫组化染色.结果 ①临床症状:H5N1禽流感病毒能感染五个品系的小鼠,引起呼吸急促等症状和一过性体重、体温下降.②死亡情况:小鼠在接毒后第1天即出现死亡,死亡的高峰期集中在接毒后第3～6天.五个品系小鼠死亡率存在差异,BALB/c为70%,ICR为50%,NIH Swiss为40%,C57BL/6为25%,KM Swiss为10%;③病毒分离:各组接毒小鼠在死亡后均进行了病毒分离,死亡小鼠的肺脏均分离到病毒,其他脏器未分离到病毒.④病理变化:实验期间五个品系死亡小鼠肺脏病理改变相近.大体观:死亡小鼠肺部淤血,呈暗红色,体积增大,局部肺组织实变.镜下观:死亡小鼠的共同病理改变为间质性肺炎,具体表现为肺泡腔及间质出血、炎性细胞浸润;间质增生,肺泡隔增宽;肺泡腔中见纤维素性渗出,透明膜形成.⑤免疫组化结果:在死亡小鼠的气管上皮细胞和肺巨噬细胞可观察到H5N1禽流感病毒阳性表达.结论 小鼠作为H5N1禽流感病毒模型具有普适性,不同品系小鼠感染鹅源H5N1禽流感病毒的临床症状、病程和病理变化与人禽流感病例相似.不同品系小鼠的死亡比例有明显差别,可以根据不同的实验目的,选择不同品系的小鼠制作H5N1禽流感动物模型.不同品系的遗传特性对禽流感易感性产生明显的影响,遗传背景可能与H5N1禽流感病毒感染应答机理存在联系:BALB/c和C57BL/6均为近交系,其中BALB/c小鼠的品系特征之一表现为干扰素产量低,接种H5N1病毒后表现为高死亡率(70%),而C57BL/6小鼠的干扰素产量高,接种H5N1病毒后表现为低死亡率(25%),提示不同遗传背景小鼠的干扰素水平与H5N1感染致死具相关性.为进一步研究H5N1禽流感病毒易感性相关基因以及其与宿主免疫反应的关系提供了一个研究基础.     

复方莪术油溶液抗H5N1亚型禽流感病毒的作用研究

目的:对复方莪术油溶液在流感病毒的MDCK细胞上和在非免疫鸡内抗禽流感H5N1亚型病毒的作用进行了研究。方法:采用细胞病变效应(CPE)抑制试验和MTT测定法,研究复方莪术油溶液及其有效成分莪术醇和金丝桃素在MDCK细胞上对H5N1病毒的灭活作用,对病毒感染的阻滞作用,对病毒吸附的抑制作用以及对被病毒入侵的细胞的治疗作用;另外,用复方莪术油溶液对14日龄非免疫试验鸡连续经口喂药1周,采用禽流感病毒H5N1攻击鸡群,攻毒的同时开始给药,观察药物对鸡的保护作用。同时与单方莪术油溶液、贯叶连翘水提取液和阳性对照药奥司他韦以及金刚烷胺进行了比较。结果:在体外实验中,复方莪术油溶液及其有效成分莪术醇和金丝桃素通过灭活病毒,阻滞病毒感染,抑制病毒吸附和治疗病毒引起的损伤而发挥抗H5N1亚型禽流感病毒的作用;在体内实验中它们对染毒鸡具有较好的预防保护作用,可延长染毒鸡的平均存活天数,与病毒对照组比较具有显著性差异(P<0.01),奥司他韦与金刚烷也具有相似的抑制病毒的作用。结论:复方给药的效果优于单方,并且主要在预防病毒感染环节发挥抑制作用。     

中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因特性

目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列，利用生物信息学软件DNASTAR5．0进行核酸同源性分析，用MEGA3．1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR—KR，与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比，减少1个碱性氨基酸；共有8个潜在的糖基化位点，抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇，与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致，有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。     

禽流感H5N1型病毒对NIH小鼠的致病敏感性研究

目的观察禽流感H5N1型病毒对NIH小鼠的致病性。方法将NIH小鼠随机分为接毒组(20只)和对照组(10只),在负压感染实验室,接毒组于乙醚麻醉后给予AIVH5N1型病毒滴鼻,对照组予正常阴性尿囊液滴鼻,观察14d,记录小鼠的体温、体重、临床症状、死亡情况、病理变化、肺指数及抗体变化。结果 NIH小鼠感染禽流感H5N1型病毒后第1天就出现精神不振,病程主要集中在第3～7天,临床症状主要表现为弓背、蜷缩、竖毛、颤抖、反应迟钝、活动减少、爱扎堆,体重(下降)出现减轻,体温降低,死亡率为40%;接毒组死亡小鼠肺指数为(2.21±0.40),较对照组的(0.44±0.23)明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);肺组织病理严重改变,第8天才能检出抗体(OD值等于0.231)。结论禽流感H5N1型病毒对NIH小鼠有一定的致病性。     

“SARS”与人禽流感

近年来,严重急性呼吸道综合征和“禽流感”相继在多个国家暴发,并导致多人死亡,引起全球性关注和恐慌。本文将全面比较这两种传染病予以综述,认真总结经验、得失,对预防和抵制人禽流感的暴发以及其他人兽(畜)共患传染病有着重要的指导意义。     

H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究

目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。     

在中国的猪中发现禽流感病毒

研究显示中国的猪感染了H5N1流感病毒亚型，中国政府对此保持低调。但世界卫生组织敦促中国进一步调查禽流感病毒存在情况。世界卫生组织担忧禽、人和猪的流感病毒同时传播可引起基因重组，从而产生导致新的大流行的流感病毒株。     

人群感染禽流感病毒(H5N1)研究进展

禽流感病毒一直以来认为只在禽类中发病和流行，由于存在种属屏障和受体特异性，其感染人类并导致发病、死亡少见报道。近年来，全球报道了多起禽流感病毒H5N1、H7N7、H7N3和H9N2亚型感染人并导致发病、死亡。2003年起，禽间（包括家禽、野禽和迁徙的候鸟）的高致病性禽流感H5N1疫情从亚洲。“逐渐向欧洲和非洲大陆扩散”。