人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株交叉耐药性实验研究

目的 通过建立体外肺腺癌耐药细胞株,研究紫杉醇交叉耐药性,为临床治疗提供有益的实验依据.方法 应用浓度递增和短时作用相结合,建立人肺腺癌紫杉醇耐药株SPC-A1/Taxol.通过MTT法检测加入不同药物后耐药细胞的半数抑制浓度,计算耐药指数.结果 SPC-A1/Taxol耐药细胞株对多西紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱和阿霉素显示高度耐药,对喜树碱类和鬼臼毒素类显示中度或低度耐药,对铂类药物、抗代谢药和中药榄香烯乳未见交叉耐药性.结论 SPC-A1/Taxol耐药细胞株为一个较好的多药耐药体外模型,对其交叉耐药性的实验研究可以为临床用药提供有益依据.     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立

目的：体外建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法：以泰素为诱导药，人肺腺癌细胞系SPC—Al为诱导对象，逐步增加泰素浓度冲击，以一定浓度的泰素维持培养共计24周后，光镜观察细胞形态，用MTS方法进行细胞耐药检测。结果：SPC—Al／TAX形态不规则，对阿霉素、长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5—氟脲嘧啶、泰素(紫杉酵)六种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论：建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC—Al／TAX，用于研究其多药耐药性的机制及逆转等下游实验。     

人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立和生物学特性评价

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(Skov-3/PTX),并对其生物学性状进行检测和鉴定。方法采用紫杉醇浓度梯度递增法,建立人卵巢癌紫杉醇耐药株。通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、药物敏感试验、细胞内Rh-123和紫杉醇含量研究及MDR1、MRP和GST-πmRNA水平的测定,评价Skov-3/PTX生物学特性。结果成功建立了Skov-3/PTX耐药株,耐药指数为45.90,对吉非替尼、9-硝基喜树碱和阿霉素产生明显的交叉耐药性。与Skov-3细胞相比,Skov-3/PTX耐药细胞异形明显;耐药细胞倍增时间显著延长(P<0.05);耐药细胞内Rh-123和紫杉醇量显著减少(P<0.05),环孢菌素可以增加细胞内Rh-123和紫杉醇含量;耐药细胞的MDR1、MRP和GST-πmRNA水平显著增高。结论Skov-3/PTX细胞具有典型多药耐药特性,为进一步研究耐药逆转途径提供了实验基础。     

人乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株的建立及特性

目的 建立人乳腺癌多西紫杉醇( Docetaxel,Doc)耐药细胞模型MCF-7/Doc,初步探讨其生物学特性.方法 采用Doc低浓度逐步加量诱导法建立MCF-7/Doc耐药株;通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、MTT法药物敏感试验及流式细胞术评价其生物学特性;实时荧光定量PCR和Western blo...     

FGF-2对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响

目的:观察不同浓度成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖的影响.方法:以体外培养的人肺腺癌细胞株A549为研究对象,采用MTT比色法测定不同浓度(0,12.5,25,50,75,100 ng/mL)的FGF-2对A549细胞增殖活性的影响.结果:与对照组相比,不同浓度的FGF-2处理组细胞的OD值、增殖比均明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).FGF-2浓度为75 ng/mL时细胞增殖比最高,为对照组的183％.结论:FGF-2促进A549细胞增殖,FGF-2对肺腺癌的发生发展具有重要作用.     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学性状的测定

目的：体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系。方法：以阿霉素(adriamycin，ADM)为诱导药。人肺腺癌细胞系(SPC-A-1)为诱导对象。逐步增加ADM药物浓度进行诱导，以一定浓度ADM培养46周后．光镜观察细胞形态，采用MTT法检测细胞耐药指数(RF)，并同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇、ADM6种药物进行交叉耐药检测。结果：SPC-A-1／ADM形态不规则。SPC-A-1／ADM对ADM的RF为11．3．同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇5种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论：建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC-A-1／ADM，可用于多药耐药性机制及逆转的研究。     

人肺腺癌A549多重抗药细胞株生物学特性变化

目的；探讨人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞株生物学特性变化，方法：采用阿霉素（ＡＤＭ）浓度递增的方法诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系（Ａ５４９／Ｐ）在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌＡＤＭ下持续增殖，通过光镜和电镜观察其增殖及形态结构变化，结果：Ａ５４９／Ｒ２细胞由巨大细胞增殖而来，其微绒毛，线粒体及分泌泡明显增加，有进一步分化趋向，结论：Ａ５４９／Ｒ２     

胰岛素对人肺腺癌细胞株A549影响的体外研究

目的：探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平及其机制。方法：采用MTT比色法,分析胰岛素对肺腺癌A549细胞代谢的影响,用流式细胞仪作细胞周期分析,用Western Blot印迹方法检测细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果：胰岛素（2.0～32.0mU/mL）可促进人肺腺癌细胞A549的增殖（P〈0.05）,细胞周期结果显示胰岛素（8mU/mL）可使S期细胞增多。Western Blot印迹方法检测结果显示胰岛素（8mU/mL）后CyclinD1的表达明显增强,CyclinA的表达变化不明显。结论：胰岛素能促进人肺腺癌细胞株A549增殖,并且其增殖作用是可逆的。胰岛素主要作用于人肺腺癌细胞株A549细胞的S期。CyclinD1的表达增强在胰岛素促增殖机制中起着重要作用。     

多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP及其亲代细胞作用机制的初步研究

目的探讨多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制.方法应用MTT比色法和透射电镜等方法,观察A549/CDDP及其亲代细胞在多西紫杉醇作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化.结果MTT比色结果表明,多西紫杉醇对A549/CDDP细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用,并且在0.1～2 μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系.A549/CDDP细胞在多西紫杉醇作用12～24h较亲代细胞敏感(P＜0.01),在48 h开始表现出其药物耐受性(P＜0.01),在72 h则与亲代细胞间无显著性差异(P＞0.05);透射电镜观察结果发现,A549/CDDP细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多,微绒毛减少甚至消失,线粒体出现肿胀甚至空泡化,同时,还存在少数凋亡小体和脱落的不含细胞器成分的细胞质.结论多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用,并可能通过诱导肿瘤细胞坏死、凋亡和胞质自切,从而发挥其细胞毒作用.     

饲醋大鼠血清对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的:探讨饲醋大鼠血清对人肺腺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响.方法:采用MTT法检测饲醋大鼠血清对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果:饲醋大鼠血清能明显抑制A549细胞的增殖,且呈时间依赖效应(P<0.05);并且,可显著增加A549细胞的凋亡率(P<0.01).结论:饲醋大鼠血清可通过抑制增殖和促进凋亡,明显抑制人肺腺癌细胞株A549细胞的生长.     

人肺腺癌耐药细胞模型的建立及生物学特性的初步鉴定

目的建立人肺腺癌耐药细胞模型Anitp973／NVB（去甲长春新碱）并鉴定其生物学特性。方法应用人肺腺癌细胞系Anip973,采用NVB逐步增加剂量法,诱导建立耐药细胞模型Anip973／NVB,观察其生长规律;用MTT法鉴定抗药性;观察细胞形态和超微结构;流式细胞技术检测其细胞周期分布;高效液相色谱法测定细胞内NVB的浓度变化。结果经MTT法鉴定Anip973／NVB细胞较Anip973细胞的NVB半数致死浓度（IC50）增大21．81倍。两细胞系的倍增时间无明显差异。光镜及电镜下观察到,两细胞系结构变化较大。经流式细胞仪测定Anip973／NVB细胞,S期细胞减少（P=0．035）而G0-G1期细胞增多（P=0．014）;高效液相色谱法检测发现Anip973细胞内药物浓度明显高于Anitp973／NVB。结论Anip973／NVB细胞是一个明确的多药耐药细胞模型,具有耐药细胞的基本生物学特性。     

抗人肺腺癌杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

用人肺腺癌细胞株AGZ—83a常规免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合,获得一稳定分泌抗人肺腺癌单克隆抗体（McAb）的杂交癌细胞林──—QMC－WL99。制备并纯化了小鼠腹水抗体,腹水效价为5.5X106,亚型鉴定为IgG1。免疫组化结果显示QMC－WL99单抗的特异性较高,与肺腺癌有较好选择反应性,与正常组织无交及反应。该单克隆抗体的亲和常数为7.25×1010M－1,液氮冻再后复苏,杂交瘤细胞株QMC－WL99分泌抗体的能力不受影响。     

多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP凋亡的研究

目的探讨凋亡在多西紫杉醇对人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP作用中的地位及其机制。方法应用透射电镜、流式细胞术、Annexin V／PI和免疫细胞化学等方法，观察多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞形态学、细胞周期、凋亡以及Fas等蛋白表达的影响。结果多西紫杉醇作用后，A549及A549／CDDP细胞内空泡明显增多，可见少数凋亡小体和脱落的不舍细胞器成分的细胞质，后者还出现大量多微核化细胞。多西紫杉醇具有显著的G2期阻滞作用。可同时诱导细胞凋亡、坏死和胞质自切。并以后两者为主。Fas蛋白在多西紫杉醇作用后表达明显增强。结论多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞均具有显著的G2／M期阻滞作用，能同时诱导其凋亡、坏死和胞质自切。以后两者为主。Fas基因可能在多西紫杉醇抗肿瘤作用中具有重要作用。     

人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成

本文采用阿霉素逐步诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系，在体外持续培养６个月，获得了具有抗药性的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌ ＡＤＭ下持续增殖。通过测定抗癌药物作用的５０％抑制浓度发现，Ａ５４９／Ｒ２细胞对ＡＤＭ的抗药性为Ａ５４９的７－１１８倍，同时对表阿霉素、长春新碱、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著抗药性，对氮芥、丝裂霉素和卡铂低度抗药、对５－氟脲嘧啶、氨甲喋呤和平阳霉素无抗药性。Ａ５     

小鼠肺腺癌模型的建立及肿瘤病理分析

目的用乙基亚硝脲(ENU)在BABL/c小鼠建立肺腺癌模型并对ENU所诱发的肺腺癌进行病理观察。方法妊娠17d的SPF级母鼠腹腔接受ENU或缓冲液注射,在子代鼠的鼠龄满32周时收获其全肺标本,对肺组织进行常规石蜡半连续切片,HE染色,镜下观察肿瘤病理。结果ENU经胎盘一次性诱发子代鼠多发性肺肿瘤形成,病理显示这些肿瘤为处于不同发展阶段的腺瘤和腺癌,腺癌的类型有细支气管肺泡癌样腺癌(雌性:5/6,雄性:4/6)和分化不等的腺癌(雌性:4/6,雄性:5/6),诱癌频率在雌、雄性小鼠均为5/6,癌变频率在雌性16/43,雄性12/31。结论成功建立了小鼠肺腺癌模型,肿瘤病理的多样性提示癌变机制在分子水平的复杂性。     

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究

目的建立吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,并初步探讨其生物学特性及其耐药机制。方法采用逐步增加吉非替尼剂量法诱导人肺腺癌细胞A549形成吉非替尼耐药的细胞株A549/GR;CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50)及绘制细胞生长曲线,并计算耐药指数;显微镜下观察吉非替尼作用前后A549、A549/GR细胞形态学的改变;直接测序法检测EGFR基因在酪氨酸激酶区的基因突变;q RT-PCR法检测EGFR基因在m RNA水平表达的改变。结果 CCK-8法测得A549/GR细胞的耐药指数为6.00,显示成功建立了吉非替尼耐药的细胞模型,其倍增时间较亲代细胞缩短;形态学观察显示A549/GR细胞极性消失,有变长梭形的趋势;A549/GR细胞系EGFR基因酪氨酸激酶区未发现基因突变;q RT-PCR法显示A549/GR细胞EGFR基因在m RNA水平较亲代细胞轻度上调。结论成功建立吉非替尼耐药人肺腺癌A549/GR细胞模型,A549/GR细胞耐药性的产生与EGFR基因18-21外显子区域突变无关。     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的 建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP;MTT法测定药物敏感性,透射和扫描电镜观察形态变化,常规染色体检测分析染色体变化。结果 用192d建成人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP,它对顺铂的耐药指数为11.2,对顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药性,但对羧基喜树碱无耐药性,电镜观察可见SPC0-A-1/CDDP细胞胞核不规则,较大,有丰富的微绒毛。结论 本研究建立了稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系（SPC-A-1/CDDP）,可应用于下游实验。     

采用反复照射方法建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株

目的为成功建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株,并探讨鼻咽癌放射抗拒机理。方法采用类似临床放疗的照射模式反复照射从人鼻咽癌细胞系CNE-3中分离出具有放射抗拒性的新细胞系亚株。结果采用类似临床放疗的照射模式反复照射分离出具有放射抗拒性的新细胞系亚株CNE-3R,其在传代3个月后仍表现出较稳定的放射抗拒性,其SF2值均〉0．5。结论采用该研究方法能成功建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株,为研究鼻咽癌放射抗拒机理提供了必要的工具。     

放射耐受性人小细胞肺癌亚株的建立

目的 建立肺癌NCI-H446细胞放射抗拒性亚株,为小细胞肺癌放射抗拒和逆转研究提供配对的细胞研究工具。方法 通过梯度照射NCI-H446细胞株诱导其耐放射性(共7500cGy),并通过检测细胞总的ATP含量的方法来监测细胞倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期分布,以及应用多靶单击模型 SF=1-(1-e-D/D0)N拟合细胞存活曲线分析其放射敏感参数的变化。结果 比较亲本与耐放射株的差异,放射生物学参数值分别为D₀(1.9673,2.2756)、N(1.0016,2.6008)、Dq(0.6783,1.6860)、SF₂(0.3623,0.7134),耐放射株SF₂值为亲本的1.97倍, G2/M期细胞所占比由18.52%下降到7.84%。耐放射株的细胞形态发生变化,倍增时间比敏感株延长。结论 通过梯度照射建立了小细胞肺癌NCI-H446的耐放射亚株NCI-H446-R,与亲本细胞相比放射生物学参数有显著差异(P<0.05),本研究成果为研究小细胞肺癌放射抗拒及耐放射逆转提供了新的细胞模型。     

人尿道高分化鳞癌系HUS-98的建立及生物学特性

目的 以尿道高分化鳞状上皮转移癌患者腹水为材料，建立体外培养的人尿道鳞癌细胞系HUS-98。方法 按照细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性，包括光镜、电镜观察，生长曲线、染色体数目、裸鼠致瘤性、致瘤性病毒基因等。结果 细胞维持培养15个月，传120代，生长稳定。细胞群体倍增时间52.3h。细胞呈贴壁生长，趋向复层，无接触抑制。光镜和电镜检查均显示高分化鳞癌特征性结构。染色体数目分布 34～120之间，主流范围在62～72之间（57%）。PCR检测乳头瘤病毒12，18型、疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒和巨细胞病毒均阴性；乙肝病毒基因阳性。三次裸鼠移植试验均未致瘤。结论 该细胞系的建立将有助于尿道肿瘤的生物学特性的研究。