Notch1受体和表皮生长因子受体在舌鳞癌中的表达及意义

目的 探讨Notch1受体和表皮生长因子受体(EGFR)在舌鳞癌中的表达,并分析Notch1和EGFR潜在的关系,为舌鳞癌的临床治疗提供支持。 方法 选择2010年1月—2014年12月间杭州师范大学附属医院收集的71例舌鳞癌标本、62例舌黏膜白斑标本和17例正常舌黏膜标本作为研究对象。采用免疫组化法测定3组标本中Notch1和EGFR的表达,并采用SPSS 16.0统计软件对3组数据结果进行统计学分析。 结果 正常舌黏膜、舌黏膜白斑标本中Notch1的阳性表达主要集中在角化层,基底层无表达;而EGFR的阳性表达主要集中在基底层,角化层和颗粒层则无表达。舌鳞癌标本中,高分化程度标本中Notch1的阳性细胞率越高(P＜0.05),而TNM分期越高、有舌肌层浸润、有淋巴转移标本的Notch1阳性细胞率越低(P＜0.05);相反,高分化程度标本中EGFR的阳性细胞率越低(P＜0.05),TNM分期越高、有舌肌层浸润、有淋巴转移标本的EGFR阳性细胞率越高(P＜0.05)。 结论 舌黏膜上皮中Notch1受体的表达可导致细胞的分化,Notch1水平的下调可抑制舌鳞癌,EGFR的表达在一定程度上抑制Notch1的表达,两者在舌鳞癌的发展中可能存在交互作用。      

盐酸埃克替尼对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的影响

目的：研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用。方法：分别应用0（对照组）、5、10、20、40、80μmol/L的盐酸埃克替尼处理体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别作用12、24、48、72、96h后,倒置显微镜下观察细胞生长状态及形态学改变,用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：对照组细胞生长良好;盐酸埃克替尼作用后,Tca8113细胞体积变小,胞质皱缩,细胞间隙增大,细胞连接松散,胞内颗粒增多,贴壁细胞变圆,漂浮。不同浓度盐酸埃克替尼作用后,Tca8113细胞增殖抑制率随浓度的增加和作用时间的延长而增大,具有剂量和时间依赖性（P〈0.05）。结论：盐酸埃克替尼能有效抑制Tca-8113细胞增殖,是一种有效的靶向治疗人舌鳞状细胞癌的药物。     

人肝细胞癌中表皮生长因子受体的表达

人肝细胞癌中表皮生长因子受体的表达刘荣，吴孟超，张晓华，陈汉，黄承诚我们采用免疫组化ＡＢＣ法和分子杂交技术，对人肝细胞癌（ＨＣＣ）癌组织和癌旁肝组织中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的表达进行了比较研究，以探讨ＥＧＦＲ在肝细胞癌发生发展中的意义，及ＥＧＰ...     

Ebp1基因对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用

 目的 研究异位表达ebp1基因对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖能力的影响。方法 pcDNA3.1- ebp1真核表达载体稳定转染舌鳞状细胞癌细胞系（Tca8113）。Western blot和RT-PCR验证稳定转染细胞中ebp1的表达;观察细胞生长、增殖,细胞周期改变,通过软琼脂克隆形成,裸小鼠体内成瘤等方法来评价ebp1抑制肿瘤细胞生长的作用。结果 Ebp1转染细胞的细胞生长、增殖明显受抑制,细胞周期改变,G0/G1和G2/M细胞增多,而S期细胞减少,软琼脂克隆形成率明显下降;移植小鼠模型中肿瘤平均直径和重量Tca-0细胞明显大于Tca-1细胞和Tca-3细胞。结论 Ebp1异位表达对Tca8113有多种抗肿瘤特性,可进一步探讨将ebp1基因作为舌鳞状细胞癌的治疗措施的可能性。     

盐酸埃克替尼对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期及CyclinD1、P27表达的影响

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期的影响.方法:分别应用0、10、20和40μmol/L盐酸埃克替尼处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后,采用流式细胞仪分析细胞周期变化.采用间接免疫荧光流式定量检测技术及免疫细胞化学方法检测0、20μ...     

LRIG1对胶质瘤细胞中表皮生长因子受体的抑制作用及其机制

目的 验证LRIG1在胶质瘤细胞中对表皮生长因子受体(EGFR)的抑制作用,探讨其作用机制.方法 采用激光共聚焦显微镜及Western blot法检测LRIG1质粒转染前后神经胶质瘤H4细胞中EGFR和LRIG1的亚细胞定位和表达情况.结果 在H4细胞中LRIG1低表达,EGFR高表达,均主要为膜表达;转染LRIG1质粒后,LRIG1表达增强,EGFR表达下降.结论 LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上,对膜受体EGFR有抑制作用,参与EGFR的负反馈调节.     

表皮生长因子对人绒毛膜促性腺激素分泌的影响及其受体在滋养层细胞中的表达

目的：探讨表皮生长因子（EGF）,表皮生长因子受体（EGFR）在胚胎发育过程中的作用。方法：应用免疫组织化学的方法对滋养层细胞EGFR表达进行定位,定量分析,同时观察不同浓度的EGF对体外培养绒毛组织分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG）的影响。结果：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,其中孕早期较妊娠中期,晚期表达强,平均A值高,而在孕早期不同阶段EGFR的表达也有差异,妊娠4－6周,7－9周滋养层细胞表达低于10－12周,EGF具有促进体外培养的绒毛组织分泌HCG的功能,且随浓度增加而分泌功能增强,当EGF浓度为100ng／ml时,HCG的分泌量达到峰值,EGF浓度达到200ng/ml时,HCG的分泌量不再增加。结论：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,与妊娠期间孕妇体内HCG的浓度变化具有一致性;EGF在一定范围内具有促进滋养细胞分泌HCG的功能,由于EGFR在滋养层细胞上表达的数量是一定的,当EGF饱和了EGFR所有结合位点HCG分泌不再增加,所以EGF,EGFR可能是通过影响滋养层细胞HCG的分泌来调节胚胎的发育。     

喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体表达的临床意义

目的　研究喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体 (EGFR)的表达及其与预后的关系。方法　采用免疫组织化学ABC法检测 6 4例喉鳞状细胞癌和 6例喉正常黏膜组织中的EGFR表达。结果　EGFR在上述两种组织中的表达率分别为 6 4 %和 0 % ,两者的差异有显著性 (P <0 .0 1) ;EGFR表达与喉鳞状细胞癌的病理组织分级及患者 5年生存期相关 (P <0 .0 5 ) ;多因素分析亦表明 ,TNM分期及EGFR状态与患者 5年生存期相关。结论　EGFR的表达可作为评估喉鳞状细胞癌分化及预后不良的指标     

舌鳞癌细胞对Iressa的敏感性及其表皮生长因子受体突变

目的研究中国人舌鳞癌细胞系对表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Iressa的敏感性及其EGFR突变,初步探讨Iressa在头颈鳞癌治疗中的价值。方法以中国人舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113为研究对象,采用MTT法检测Iressa对其增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;对Tscca和Tca8113进行EGFR外显子18～21测序。结果 Iressa对Tscca、Tca8113均有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性。细胞周期分析显示,较低浓度Iressa(18.2μmol/L和36.4μmol/L)可使Tscca和Tca8113细胞G0/G1期比例增高;流式细胞仪分析显示高浓度Iressa可诱导Tscca和Tca8113细胞凋亡。测序发现Tscca和Tca8113的EGFR外显子20存在同一静止突变,即2361G-A,Q787Q。结论 Iressa可抑制Tscca和Tca8113的增殖,呈剂量依赖性;较低浓度时诱导细胞周期G0/G1期比例增高,高浓度时诱导凋亡,其抑制作用与EGFR突变未见相关性。     

Notch1和表皮生长因子受体信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中的交互作用

目的 研究Notch1和表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中的交互作用.方法 通过分别瞬时转染编码Notch1胞内域的表达载体和靶向人EGFR基因的短发卡RNA(shRNA)的表达载体,以及受体酪氨酸激酶抑制剂 AGl478 处理,分别观察Notch1组成性活化、EGFR基因沉默以及阻断EGFR信号通路对人舌鳞癌细胞系Tea8113 细胞增殖及Notch1和EGFR表达的影响.用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性.结果 Notch1组成性活化抑制Tca8113细胞增殖,上调Notch1表达(mRNA分别为1.102±0.135和0.243±0.032,P<0.05)而下调EGFR表达(mRNA分别为0.083±0.009和0.605±0.075,P<0.05);EGFR基因沉默抑制TcaS113细胞增殖,下调EGFR表达(mRNA分别为0.148±0.019和1.175±0.132,P<0.05)而上调Notch1表达(mRNA分别为0.978±0.115和0.083±0.009,P<0.05);阻断EGFR信号通路对Tca8113细胞的EGFR表达无明显影响(P>0.05),但抑制细胞增殖并上调Notch1表达(P<0.05).结论 Notch1和EGFR信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中可能存在双向调控的交互作用.     

雌二醇对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响

目的　观察雌二醇 (estradiol,E2 )对培养的人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞系细胞增殖的影响 .方法　将 E2 作用于体外培养的人舌鳞癌细胞 ,采用四唑盐 (MTT)比色试验及 3H- Td R掺入试验 ,测定 MTT反应 A4 90 nm值和 3H- Td R掺入量 ,并用流式细胞仪测定细胞周期 .结果　不同浓度的 E2(10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 )可明显增加人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞的增殖 ,MTT 的 A4 90 nm值变化率分别为 (10 7.5±2 .6 ) % ,(113.1± 3.1) %和 (12 0 .0± 3.7) % (P<0 .0 1) ,cpm值的变化率分别为 (10 8.2± 4 .0 ) % ,(116 .7± 4 .2 ) %和(12 4 .8± 3.2 ) % (P<0 .0 1) ,并存在着剂量效应 .10 - 6mol· L- 1的 β- E2 能使人舌鳞癌细胞进入 S期和 G2期的细胞比例从 16 .3%和 7.2 %上升到 2 1.1%和 16 .6 % ,而使处于 G1期的细胞比例从 76 .5 %下降到 6 2 .3% (P<0 .0 1) ,从而细胞的 DNA合成增加 ,促进其增殖 .E2 对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的促增殖作用可被 Tamoxifen阻断 .结论　 E2在体外能明显促进培养的人舌鳞癌细胞的增殖     

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制。[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素（50、25、12.5 μg/mL）组和顺铂（40 μg/mL）组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）mRNA、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白（cyclin B1、cyclin D1）和周期蛋白依赖性激酶（CDK1、CDK2）表达。[结果]与空白对照组比较,大蒜素（50、25 μg/mL）组细胞周期G₂/M期比例显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA表达显著上调（P<0.05或P<0.01）,Bax/Bcl-2值显著提高（P<0.01）,cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

COX-2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞迁移的抑制作用

目的 研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制人舌鳞癌Tca8113细胞迁移的作用.方法 采用细胞划痕实验、细胞.基质黏附实验和Boyden趋化小室测定Tca8113细胞的迁移能力.观察塞来昔布对Tca8113细胞迁移作用的影响.结果 10 μmol/L和20 μmol/L塞来昔布处理细胞24 h后.细胞迁移数与对照组相比减少有统计学意义(P<0.05),Tca8113细胞的迁移能力显著减弱.不同浓度塞来昔布处理Tca8113细胞24 h后,其与包被Fn基质胶表面上的黏附情况呈剂量依赖天系,随塞来昔布浓度的增加,Tca8113细胞在基质表面的黏附显著降低.结论 COX-2抑制剂塞来昔布具有抑制Tca8113细胞迁移的能力,其机制有待进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate the role of COX-2 inhibitor celecoxib in inhibiting the migration of human tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cells. Methods The effects of celecoxib on Tca8113 cell migration were tested using scrape motility assay, cell-matrix adhesion assay and Boyden chamber motility assay. Results Following a 24-hour incubation with 10 and 20 μmol/L celecoxib, the migration of Tca8113 cells was significantly decreased (P<0.05). Celecoxib treatment for 24 h also resulted in significantly decreased adhesion of Tca8113 cells on Fn-coated surface in a dose-dependent manner. Conclusion COX-2 inhibitor celecoxib can inhibit Tca8113 cell migration, the mechanism of which awaits further investigation.     

塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用

目的观察选择性COX-2抑制剂塞莱昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用。方法采用不同浓度塞来昔布处理Tca8113细胞后,采用流式细胞仪检测细胞周期变化;应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞早期凋亡,透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果塞来昔布抑制Tca8113细胞生长增殖的作用,与阻滞细胞周期进程有关,其主要阻滞Tca8113细胞从G1期细胞向S期细胞进程,导致G0/G1期细胞的数量增加,S期和G2/M期细胞数量减少。Annexin V-FITC/PI双标记法结果显示,塞来昔布组与对照组相比,早期凋亡细胞增多有显著性意义。透射电镜观察显示,随着塞来昔布浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞出早期凋亡细胞至中后期凋亡细胞的变换。结论COX-2抑制剂塞来昔布以剂量依赖的方式,通过抑制细胞周期进程、诱导凋亡抑制Tca8113细胞生长、增殖,其作用机制有待进一步研究。     

LRG-1在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达及意义

目的：探讨富亮氨酸α2糖蛋白1（LRG-1）在舌癌及舌癌细胞系Tca8113中的表达及其与舌癌临床病理参数的关系并分析LRG-1的临床意义。方法采用S-P免疫组织化学方法检测我院40例浸润性舌癌患者的病灶及癌旁正常组织、20例舌部不典型性增生组织、20例舌原位癌中LRG-1的表达,分析LRG-1表达与舌癌临床病理参数的相关性;流式细胞技术检测舌癌细胞系（Tca8113）中LRG-1的表达;Western blotting法检测舌癌组织及细胞系Tca8113中LRG-1的表达;MTT法检测LRG-1对人血管内皮细胞生长的影响;体外小管形成实验观察LRG-1对血管生成的影响。结果 LRG-1阳性表达率在舌癌组织中（85%,34/40）显著高于癌旁正常组织（10%,4/40）,亦显著高于舌部不典型性增生组织（30%,6/20）及舌原位癌（50%,10/20）,差异均有统计学意义（P<0.05）。LRG-1在舌癌组织中的表达与患者年龄、性别等不相关,而与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有相关性（P<0.05）。LRG-1能够促进血管内皮细胞的增殖和小管形成。结论 LRG-1在舌癌组织及细胞系中表达异常,且能够促进血管内皮细胞的生长和小管形成,提示其可能与肿瘤血管生成有关。     

血管抑素下调人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的探讨血管抑素（angiostatin,AS）对人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法将Tca8113人舌鳞癌细胞移植到18只裸鼠皮下,用随机数字表法将裸鼠分成3组（每组6只）。PBS组：注射PBS;AS（250ng）组：注射250ng纯化AS;AS（30μg）组：注射30μg纯化As,腹腔注射,2次／d,同时测量肿瘤的大小,2次／周。21d后处死小鼠,将取出的每个肿瘤2等分,一半用免疫组织化学检测VEGF及其两个受体（VEGFR1、VEGFR2）和CD34,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡;另一半用半定量RT-PCR检测VEGF、VEGFRl和VEG-FR2的mRNA表达。结果AS（250ng）组和AS（30μg）组中,细胞凋亡指数（AI）明显增加（P〈0．05）;而肿瘤体积、微血管密度（MVD,用CD34抗体标记并用来评价肿瘤血管生成）及VEGF、VEGFR1和VEGFR2在蛋白质和mRNA的水平表达,都有明显降低（P〈0．05）,且AS（30μg）组更为显著。结论AS下调人舌鳞癌细胞VEGF的表达且呈剂量依赖性。     

无血清培养法分选舌癌侧群细胞及其特性的鉴定

目的探索人舌鳞癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分选方法。方法利用流式细胞仪分选传统含血清培养方法获得的人舌鳞癌细胞系Tca8113中的侧群细胞(SP),并与无血清培养方法分离出的侧群细胞(TSC-SP)进行形态学比较和平板形成克隆实验及成瘤实验的比较,富集并验证肿瘤干细胞相关亚群。结果人舌癌细胞系Tca8113中SP细胞的含量为0.2%,而Tca8113细胞系的细胞在无血清培养基中能够成活,3~5 d后增殖并形成悬浮的肿瘤干细胞球,并随着培养时间的延长而肿瘤干细胞球体积增大和更加致密;而应用无血清悬浮法培养的Tca8113细胞系中TSC-SP细胞的含量为0.4%;SP与TSC-SP细胞在平板形成克隆实验的形成率均为100%;接种16 d后,104、105数量级的TSC-SP和SP接种裸鼠背部均出现瘤体。结论人舌鳞癌细胞系Tca8113中含极少量的SP细胞,利用无血清培养基可以达到富集肿瘤干细胞亚群的目的。     

c-met和EGFR蛋白表达与声门型喉磷癌术后复发的关系

目的 探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和肝细胞生长因子受体(mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)在声门型喉鳞癌中的表达及与术后复发之间的关系.方法 共纳入66例声门型喉磷癌患者,复发组和未复发组各33例.免疫组化法检测c-Met及EGFR在原发灶组织的表达情况,用H评分法对免疫组化结果进行评估.定义H评分值高于中位值为高表达,相反为低表达.结果 在总群体中,c-Met和EGFR的H评分中位值分别为150 (0～270)和225(0～ 270).单变量Logistic回归分析表明,c-Met或EGFR高表达患者的复发风险显著高于低表达患者(OR =7.111,P＜0.001;OR=5.290,P=0.002).逐步回归分析表明c-Met或EGFR的高表达均可作为声门型喉癌术后复发的独立危险因素(OR=5.909,P=0.002; OR =4.231,P=0.013).ROC曲线分析显示联合检测c-Met和EGFR的表达情况对评估术后复发风险具有良好的预测效能(AUC=0.795,95％ CI:0.685 ～0.905).结论 c-Met和EGFR的表达均与声门型喉磷癌术后复发密切相关,可作为术后复发的有效预测指标.     

表皮生长因子受体在食管鳞癌中的表达及预后意义

目的:探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)蛋白在食管鳞癌中的表达及其预后意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测80例食管鳞癌及对应的正常食管黏膜中EGFR蛋白的表达;采用Logrank检验及Cox比例风险模型进行食管癌生存分析。结果:食管鳞癌及对应的正常食管黏膜中EGFR蛋白表达阳性率分别为61.3%、27.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌中EGFR蛋白表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期有相关性(均P<0.05),与性别、年龄及组织学分级无相关性(均P>0.05)。淋巴结转移、TNM分期、EGFR蛋白的表达可作为食管鳞癌独立的预后指标(均P<0.05)。结论:EGFR蛋白在食管鳞癌中高表达,在食管鳞癌的发生、侵袭转移中起重要作用,对判断食管鳞癌患者预后有一定的价值。