杨梅素通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的：观察杨梅素与mdivi-1分别或联合作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞凋亡和线粒体分裂情况,探讨杨梅素诱导SKOV3细胞凋亡的机制。方法：体外培养SKOV3细胞,随机分为对照组、mdivi-1组、杨梅素组和联合给药组,mdivi-1组以50 μmol·L^-1 mdivi-1作用1 h后更换普通细胞培养液继续培养23 h,杨梅素组以50 g·L^-1杨梅素作用24 h,联合给药组以50 μmol·L^-1 mdivi-1作用1 h后更换含50 g·L^-1杨梅素的细胞培养液继续培养23 h。MTT法检测各组细胞存活率;Muse^®凋亡检测试剂盒检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blotting）观察细胞色素C（Cyt C）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）、动力相关蛋白1（DRP1）和分裂蛋白1（FIS1）表达水平;MitoTracker^® Red荧光探针特异性标记线粒体观察各组细胞线粒体分裂情况。结果：与对照组比较,杨梅素组细胞存活率明显降低（P<0.05）;与杨梅素组比较,联合给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与对照组比较,杨梅素组细胞凋亡率升高（P<0.05）;与杨梅素组比较,联合用药组细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,杨梅素组细胞中Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与杨梅素组比较,联合用药组Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,杨梅素组细胞线粒体分裂程度增强;与杨梅素组比较,联合用药组线粒体分裂程度下降。与对照组比较,杨梅素组细胞中DRP1和FIS1蛋白表达水平升高（P<0.05）;与杨梅素组比较,联合用药组DRP1和FIS1蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：杨梅素可通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。     

线粒体动力学改变对APP/PS1小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用

目的：探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法：将C57BL/6J （C57）和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组（n=7）和APP/PS1移植瘤组（n=7）。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。光学显微镜观察2组小鼠肿瘤组织形态表现,Western blotting法检测2组小鼠肿瘤组织中线粒体融合蛋白2（Mfn2）、动力相关蛋白1（Drp1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、泛素化及多泛素化蛋白、LC3、PINK1及Parkin蛋白表达水平。结果：C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组小鼠皮肤下均见肿瘤组织,肿瘤细胞内呈现黑色素颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤组织体积小（P<0.05）。小鼠肿瘤组织中Mfn2表达水平降低（P<0.05）,Fis1和Drp1表达水平升高（P<0.05）,泛素化及多聚泛素化蛋白、LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：APP/PS1小鼠移植瘤模型肿瘤生长缓慢,其机制可能与PINK1/Parkin通路参与线粒体自噬有关。     

非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中NLRP3蛋白表达水平的影响

目的：探讨非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）蛋白表达水平的影响,并阐明其作用机制。方法：将45只大鼠随机分为对照组、高尿酸血症组和非布司他组,每组15只。高尿酸血症组和非布司他组大鼠采用氧嗪酸钾灌胃建立高尿酸血症模型,非布司他组大鼠每天给予7.2 mg·kg^-1非布司他,对照组大鼠每天给予等量生理盐水,共4周。HE染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现。全自动生化仪测定各组大鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定各组大鼠血清白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平,免疫组织化学法测定各组大鼠肾组织中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和NLRP3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,高尿酸血症组大鼠尿量和饮水量升高（t=5.317,t=3.674,P<0.05）,体质量降低（t=6.374,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平升高（t=21.463,t=15.342,t=4.603,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平升高（t=35.761,t=44.168,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平升高（t=17.064,t=26.314,P<0.05）;与高尿酸血症组比较,非布司他组大鼠尿量和饮水量降低（t=4.027,t=2.976,P<0.05）,体质量升高（t=3.694,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平降低（t=13.064,t=7.461,t=3.528,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平降低（t=24.162,t=17.314,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平降低（t=8.061,t=11.057,P<0.05）。结论：非布司他可能通过抑制大鼠肾组织中NLRP3炎症小体的激活及其下游炎性因子水平发挥对高尿酸血症模型大鼠的肾脏保护作用。     

沙参麦冬汤对新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用及其机制

目的：观察沙参麦冬汤作用下慢性支气管肺发育不良（BPD）新生大鼠肺的发育情况,阐明沙参麦冬汤对高体积分数氧（高氧）所致新生大鼠慢性BPD的影响及其作用机制。方法：200只新生大鼠分为对照组,模型组,地塞米松组,低和高剂量沙参麦冬汤组,每组40只。除对照组外,其余4组大鼠采用持续吸入高氧造模,沙参麦冬汤组和地塞米松组大鼠灌胃给予6.00和24.0mg·kg^-1沙参麦冬汤及0.75 μg·kg^-1地塞米松注射液,对照组大鼠给予等量生理盐水。给药21 d后检测各组大鼠肺组织湿质量/干质量（W/D）值,HE染色法观察各组大鼠肺组织病理形态表观,计算各组大鼠肺组织中辐射状肺泡计数（RAC）,检测各组大鼠肺组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,ELISA方法检测各组大鼠肺组织中细胞炎性因子白细胞间介素1（IL-1）、白细胞间介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2和caspase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组大鼠肺组织W/D值明显升高（t=3.144,P<0.05）,可见明显肺水肿;氧暴露21 d后肺泡腔扩大、结构简化,间隔增厚,RAC明显减少（t=3.989,P<0.05）,炎症细胞浸润,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05）,IL-10水平明显降低（t=7.857,P<0.05）;与模型组比较,地塞米松组和不同剂量沙参麦冬汤组大鼠肺水肿程度改善,肺组织W/D值明显降低（t=1.018,t=2.691,t=0.760,P<0.05）,肺泡结构紊乱情况减轻,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平降低（t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05）,IL-10水平和Bcl-2蛋白表达水平升高（t=7.857,t=7.743,P<0.05）,且以高剂量沙参麦冬汤组效果为佳。结论：沙参麦冬汤能有效保护由高氧造成的新生大鼠支气管和肺的损伤。     

基于调控结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达分析苍术燥性效应量效关系

目的：基于结肠组织中干细胞因子（SCF）及其受体c-kit mRNA表达分析苍术燥性效应的量效关系,确定引起小鼠燥性反应的苍术基础剂量,为临床用药提供参考。方法：75只C57BL/6小鼠分为对照组和185、370、555及740 mg·kg^-1苍术挥发油组,每组15只,给药体积为0.015 mL·g^-1,灌胃给药14 d,对照组给予同体积1%吐温-20溶液。测定小鼠日均饮水量和日均尿量,采用免疫组织化学法检测小鼠肾组织中水通道蛋白2（AQP2）蛋白表达水平,计算小鼠脾脏和肾脏系数,采用RT-PCR法检测小鼠结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达水平,根据以上指标考察各组小鼠燥性效应。结果：与对照组比较,185和370 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠日均饮水量、日均尿量、肾组织中AQP2蛋白表达水平、肾脏系数和脾脏系数差异均无统计学意义（P>0.05）,小鼠结肠组织中SCF mRNA表达水平明显升高（t=4.859,P<0.01;t=6.651,P<0.05）,185 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠结肠组织中c-kit mRNA表达水平明显升高（t=2.946,P<0.05）,而370 mg·kg^-1苍术挥发油组差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,555 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠日均尿量、结肠组织中c-kit mRNA表达水平明显降低（t=7.708,P<0.01;t=8.465,P<0.01）,其他指标差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,740 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠饮水量、肾组织中AQP2蛋白表达水平明显升高（t=3.554,P<0.01;t=4.636,P<0.01）,日均尿量、脾脏系数、结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达水平明显降低（t=7.708,P<0.01;t=4.985,P<0.01;t=7.314,P<0.01;t=28.45,P<0.01）。结论：低剂量（185和370 mg·kg^-1）苍术挥发油对健康小鼠无明显燥性作用,而高剂量（555 mg·kg^-1以上剂量）苍术挥发油可能通过影响SCF/c-kit信号通路对小鼠产生明显的燥性作用。     

大黄素对缺血性脑卒中模型大鼠的神经保护作用及其对ERK1/2信号通路的影响

目的：研究大黄素对缺血性脑卒中模型大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）信号通路的影响,探讨大黄素保护缺血性脑卒中的机制。方法：将200只大鼠随机分为假手术组（n=60）、模型组（n=70）和大黄素组（n=70）。模型组和大黄素组大鼠建立缺血性脑卒中模型,大黄素组大鼠在建模前30 min给予大黄素腹腔注射。评定各组大鼠神经功能障碍评分、脑梗死体积和脑组织含水量,免疫组织化学染色测定各组大鼠缺血侧脑组织皮质细胞凋亡率,Western blotting法测定各组大鼠缺血侧脑组织中Cleavedcaspase-3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、ERK1/2和磷酸化-ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达水平。结果：假手术组大鼠无神经功能障碍和脑梗死灶;大黄素组大鼠神经功能障碍评分和脑梗死体积均明显低于模型组（t=8.331,t=3.538,P<0.05）。与模型组比较,大黄素组大鼠脑组织含水量降低（t=9.507,P<0.05）,缺血侧脑组织皮质细胞凋亡率降低（t=57.593,P<0.05）,缺血侧脑组织中Cleavedcaspase-3、Bax和p-ERK1/2蛋白表达水平降低（t=4.088,t=4.463,t=10.659,P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平升高（t=5.035,P<0.05）。结论：大黄素可能通过抑制ERK1/2信号通路抑制神经细胞凋亡发挥对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用。     

p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞成脂的促进作用

目的：探讨p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）自噬活性的影响,阐明脂肪分化的分子机制。方法：应用Ⅰ型胶原酶消化法从人大腿皮下脂肪抽吸液中分离培养hADSCs,使用80 μmol·L^-1油酸（OA）联合地塞米松和胰岛素对hADSCs进行成脂诱导;将hADSCs分为对照组和p62基因缺失组,p62基因缺失组hADSCs转染p62 shRNA慢病毒载体,对照组hADSCs转染hADSCs空载体。采用CCK-8实验绘制2组细胞的生长曲线并观察细胞增殖活性变化;应用尼罗红染色观察脂滴的形成（尼罗红脂滴染色阳性细胞数）,Western blotting法检测成脂标志转录因子C/EBPα和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型/微管相关蛋白1轻链3Ⅰ型（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达,磺酰成二胺（MDC）染色检测2组细胞成脂中的自噬活性（MDC染色阳性细胞数）,采用LC3与Mitotracker Red荧光共定位检测2组细胞的线粒体自噬活性,使用环孢菌素A（CsA）分别抑制2组细胞线粒体自噬活性并进行成脂诱导,光镜下计数含脂滴细胞数。结果：分离培养的细胞呈多角形或梭形,传代后细胞呈漩涡状排列;OA诱导hADSCs成脂后,细胞内有大量脂滴形成。CCK-8实验,在培养6 d后p62基因缺失组细胞增殖活性较对照组明显降低（P<0.01）。2组细胞诱导成脂后,与对照组比较,p62基因缺失组hADSCs中尼罗红脂滴染色阳性细胞数增多,C/EBPα蛋白表达水平升高（P<0.01）,MDC染色阳性细胞数明显升高（P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平升高（P<0.01）,细胞中LC3的点状化和颗粒化增多,与线粒体的共定位现象增加。使用CsA抑制线粒体自噬后,光镜下观察,p62基因缺失组含脂滴细胞数降低到与对照组接近的水平。结论：p62基因缺失可通过增强总自噬及线粒体自噬促进hADSCs的成脂。     

微小RNA-145对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 评估微小RNA-145(miR-145)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 选取上皮性卵巢癌细胞株SKOV3及3AO,过表达miR-145后,qRT-PCR检测转染前后细胞株miR-145的表达,Transwell小室实验检测转染前后细胞迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法特异预测出miR-145靶基因zeb-2后,通过双荧光素酶报告实验进行验证,再敲低zeb-2后检测细胞移动能力。 结果 过表达miR-145后,SKOV3(t=10.752,P=0.000;t=5.617,P=0.005)及3AO细胞(t=10.111,P=0.001;t=21.746,P=0.000)的迁移及增殖能力均明显下降。双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-145 mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(SKOV3:t=4.572,P=0.010;3AO:t=3.528,P=0.024),共转染miR-145mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体细胞差异无统计学意义(SKOV3:t=0.227,P=0.831;3AO:t=0.040,P=0.970)。过表达miR-145 48 h后,实时定量PCR检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=1.490,P=0.211)和3AO细胞(t=0.114,P=0.914)中zeb-2 mRNA表达差异无统计学意义。过表达miR-145 72 h后,Western blot检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=3.769,P=0.020)及3AO细胞(t=4.452,P=0.011)中zeb-2蛋白的表达水平明显下降。转染zeb-2 siRNA 72 h后,Western blot检测结果显示,SKOV3(t=4.660,P=0.010)和3AO细胞(t=4.594,P=0.010)中的zeb-2蛋白表达水平明显下调;Transwell小室实验检测结果显示,SKOV3(t=18.655,P=0.000;t=18.026,P=0.000)及3AO(t=5.500,P=0.005;t=8.780,P=0.001)细胞的迁移和侵袭能力明显下降。结论 miR-145可能是通过靶向抑制zeb-2来抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。     

IL-33对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织内β-淀粉样蛋白的清除作用及其机制

目的：探讨白细胞介素33（IL-33）对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力和脑组织内β-淀粉样蛋白（Aβ）和Ⅱ型辅助性T细胞（Th2）水平的影响,阐明IL-33对AD模型大鼠脑组织内Aβ的清除作用及其机制。方法：70只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（皮下注射生理盐水,灌胃双蒸水）,模型组,假手术组,极低、低、中和高剂量IL-33组（0.01、0.10、1.00和10.00 mg·L^-1）,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠皮下注射D-半乳糖和灌胃AlCl₃,每日1次,连续60 d。末次给药后,进行大鼠跳台实验和Morris水迷宫实验,观察大鼠的潜伏期、错误次数、逃避潜伏期、目标象限停留时间和游泳距离。行为学检测结束后,IL-33各剂量组大鼠侧脑室注射相应剂量IL-33,假手术组大鼠侧脑室注射生理盐水。采用ELISA法检测各组大鼠脑组织内Aβ和Th2水平。结果：跳台实验,与正常对照组比较,模型组大鼠的错误次数增多（t=8.154,P<0.01）,潜伏期明显缩短（t=4.579,P<0.01）;Morris水迷宫实验,与正常对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（t=27.810,P<0.01）,在目标象限内滞留时间和游泳距离明显缩短（t=3.767,P<0.01;t=1.973,P<0.05）。ELISA法检测,模型组大鼠脑组织中Aβ水平较正常对照组明显升高（t=3.222,P<0.05）,低、中和高剂量IL-33组大鼠脑组织内Aβ水平较模型组明显降低（P<0.05）;模型组大鼠脑组织内Th2水平较正常对照组明显降低（t=4.646,P<0.01）,低、中和高剂量IL-33组大鼠脑组织内Th2水平较模型组明显升高（P<0.05）。结论：IL-33对AD模型大鼠脑组织内Aβ有清除作用,其作用机制可能与提高大鼠脑组织内Th2水平有关。     

饥饿对Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究饥饿对Ana-1细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：体外培养Ana-1细胞,将细胞分为对照组（饥饿0h）和饥饿3、6、9、12、24h组（饥饿组）,观察饥饿对细胞自噬与凋亡的影响;将Ana-1细胞分为空白对照组、饥饿组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合饥饿组,孵育24 h,采用Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白表达水平和凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白水平,采用倒置显微镜观察饥饿6、12和24 h组细胞形态表现。结果：与对照组比较,饥饿6、12和24h组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Beclin-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Caspase-3水平明显降低（P<0.01）,呈时间依赖性;倒置显微镜下观察,与对照组比较,不同时间饥饿组细胞形态发生改变,细胞皱缩、出现碎片,随着时间的延长,细胞变化更加明显。与饥饿组比较,3-MA联合饥饿组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平及Caspase-3蛋白水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：饥饿可诱导Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬并引起细胞凋亡。     

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用

目的:观察杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,按杨梅素给药浓度将细胞分为对照组和低、中、高浓度杨梅素组,杨梅素给药浓度分别为0、20、40和60 mg·L^-1。MTT法检测各组SKOV3细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组SKOV3细胞核形态变化并计算异常细胞核比率;免疫荧光法检测各组SKOV3细胞中凋亡相关蛋白-活化半胱氨酸蛋白酶3(active Caspase-3)的表达;Western blotting法检测各组SKOV3细胞中DNA损伤相关蛋白γ-H₂AX的表达水平。结果:与对照组比较,低、中和高浓度杨梅素组SKOV3细胞存活率明显下降(t=-12.35,t=-11.42,t=-10.21,P<0.05);激光共聚焦显微镜下各浓度杨梅素组细胞出现核皱缩等凋亡形态学改变,且细胞中异常细胞核比率高于对照组(t=6.87,t=9.35,t=7.22,P<0.05),高浓度杨梅素组异常细胞核比率高于低、中浓度杨梅素组(t=9.55,t=7.25,P<0.05);随着杨梅素给药浓度的增加,SKOV3细胞中active Caspase-3的表达水平有升高趋势,各浓度杨梅素组SKOV3细胞中γ-H₂AX的表达水平高于对照组(t=5.41,t=3.21,t=6.58,P<0.05)。结论:杨梅素可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡,DNA双链断裂可能是其促凋亡的机制之一。     

干扰苹果酸酶3对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响

［摘要］目的: 研究苹果酸酶3(malic enzyme 3, ME3)对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响。方法: 将干扰质粒sh-ME3或对照质粒sh-EGFP转染到人脑胶质瘤LN229细胞中,用实时定量PCR、蛋白质印迹法检测干扰效率。蛋白质印迹法检测线粒体的融合与分裂指标及细胞凋亡相关蛋白;用荧光探针检测线粒体膜电位。结果： 与对照组相比,实验组ME3的 mRNA表达水平下降了76%（t= 20.16,P<0.01）,蛋白表达也相应减少。转染干扰质粒sh-ME3后,线粒体分裂相关的线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission 1 protein,Fis-1)和动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, DRP1)表达增高,而线粒体融合相关的线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy 1, OPA1)表达降低;线粒体膜电位降低;细胞凋亡相关的水解型半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)表达增加,而B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）表达降低。结论： 干扰ME3促进了胶质瘤细胞线粒体的分裂,抑制了其融合,降低了膜电位,从而引起细胞凋亡。
     

癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合的变化

目的 探讨癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合的变化。方法 将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组和癫痫组,癫痫组分为癫痫持续状态后4、8、24和72h组,观察癫痫持续状态后不同时间点大鼠海马线粒体分裂、融合的变化。Western blotting、PCR分析海马线粒体中Drp1、hFis1、 Mfn1、Opa1的表达;免疫组化分析海马CA3区神经细胞Drp1、Opa1的表达。结果 Drp1、 hFis1在癫痫持续状态后4h时开始升高,24h达高峰,72h仍处于较高水平;Mfn1、Opa1在癫痫持续状态后4h时出现短暂的升高,随即表达下降,并于24h时达最低水平。癫痫持续状态后24h时,大鼠海马CA3区Drp1阳性神经元数目显著高于对照组(P＜0.05),Opa1阳性神经元数目显著低于对照组(P＜0.05)。结论 癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合失衡,主要表现为线粒体分裂增强、线粒体融合抑制。     

二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积与线粒体融裂基因变化的关系

目的 探讨肝脏线粒体融裂相关基因表达变化在二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积中的可能作用.方法 45只6周龄C57BL/6J雄性小鼠,按随机数表法分为普通饲料组(CON),高脂饲料组(HFD)和高脂加二氢杨梅素组(HFD+ DHM),每组15只,干预12周.检测小鼠体质量、肝脏指数、血清生化指标;分别采用HE染色和油红O染色观察肝细胞脂肪变性和脂滴数量与形态.使用增强型ATP试剂盒检测肝脏ATP含量;采用荧光定量PCR和Western blot分别检测肝脏线粒体融合与分裂相关基因[动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、分裂蛋白1(fission 1,Fis1)、融合蛋白2(mitofusion 2,Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy1,Opa1)]的mRNA及蛋白表达.结果 与CON组相比,HFD组小鼠体质量、肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素水平、甘油三酯、总胆固醇、低密度胆固醇明显增高(P＜0.05),肝脏ATP含量显著降低(P＜0.05),HE染色见明显的肝内脂肪空泡和肝细胞气球样变,油红O染色见大量的脂滴蓄积,肝脏组织Fis1、Drp1 mRNA和蛋白表达显著增高(P＜0.05),而Mfn2、Opa1明显降低(P＜0.05).二氢杨梅素干预显著抑制高脂喂养诱导的肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素和血甘油三酯的升高,肝脏脂肪蓄积以及肝脏ATP含量的降低,并且明显拮抗高脂诱导的线粒体分裂与融合基因mRNA和蛋白的表达水平变化.结论 二氢杨梅素可明显改善高脂喂养小鼠肝脏的脂肪蓄积,该效应可能与其调节肝脏线粒体的融合与分裂有关.     

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL0μg／mL组,差异具有统计学意义（P＜0．05）;Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

重组人促红细胞生成素对创伤性脑损伤大鼠炎性因子及线粒体损伤的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh EPO)对创伤性脑损伤大鼠炎性因子及线粒体损伤的影响。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为三组,每组15只,分别为假手术组(sham组),模型组、rh EPO干预组(治疗组),模型组、治疗组采用改良过的Feeney自由落体撞击头部来建立创伤性大鼠模型,sham组大鼠不撞击脑部。造模结束后,治疗组每日定时以5000 IU/kg剂量rh EPO进行腹腔注射,sham组和模型组腹腔注射等剂量生理盐水。连续给药7 d后处死大鼠。罗丹明123(rhodamine 123,Rh 123)染色检测脑组织线粒体膜电位改变。免疫组化检测脑组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,L-1β),白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达。蛋白免疫印迹检测脑组织中线粒体动力学有关蛋白(动力相关蛋白1(Drp-1)、分裂蛋白1(Fis-1)、融合蛋白2(Mfn 2)、视神经萎缩蛋白1 (Opa 1)的表达水平。结果与sham组相比,模型组脑组织Rh123荧光强度明显减弱,IL-1β、IL-6、TNF-α、Drp-1、Fis-1蛋白的表达明显升高,Mfn 2、Opa 1蛋白的表达明显降低(均P<0.05)。与模型组相比,治疗组脑组织Rh123荧光强度明显增强,IL-1β、IL-6、TNF-α、Drp-1、Fis-1蛋白的表达明显降低,Mfn 2、Opa 1蛋白的表达明显升高(均P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素可以减轻创伤性脑损伤后的炎性反应及线粒体损伤,从而起到对创伤性脑损伤后脑组织的保护作用。     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）:1μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白D...