四君子汤含药血清对RNA干扰后的大肠癌SW480细胞超微结构、端粒长度及hTERT表达的影响

目的:运用四君子汤含药血清干预经RNA干扰后的大肠癌SW480细胞,观察其超微结构、端粒相对长度、端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及蛋白表达变化,探讨四君子汤含药血清防治溃疡性结肠炎癌变的可能机制。方法:培养人大肠癌SW480细胞,经RNA干扰后,予低、中、高不同剂量的四君子汤含药血清,空白胎牛血清,美沙拉嗪含药血清,分别干预48h,运用透射电镜观察细胞超微结构,荧光定量PCR(SYBR Green法)和Westernblotting技术检测端粒相对长度、hTERT mRNA及蛋白表达变化。结果:经不同剂量四君子汤含药血清和美沙拉嗪含药血清干预后,RNA干扰后的大肠癌SW480细胞出现了自噬现象。各给药组端粒长度均明显小于空白组(P0.05),其中四君子汤低剂量组端粒长度与美沙拉嗪组相当(P0.05),中、高剂量组端粒长度大于美沙拉嗪组(P0.05)。各给药组hTERT mRNA和蛋白表达明显低于空白组(P0.05),其中四君子汤中剂量组hTERT mRNA表达明显低于美沙拉嗪组(P0.05),低、高剂量组hTERT mRNA明显高于美沙拉嗪组(P0.05),低、中剂量组hTRET蛋白表达明显低于美沙拉嗪组(P0.05),高剂量组hTRET蛋白表达与美沙拉嗪组相当(P0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过诱导细胞自噬,减缓炎症反应,下调hTERT表达,降低端粒酶活性,缩短端粒长度,抑制癌细胞增殖,达到防治溃疡性结肠炎相关癌变的效用。     

西黄丸含药血清对SW480人结肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的:研究西黄丸对人结肠癌细胞SW480迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以人结肠癌细胞SW480为研究对象,细胞划痕试验检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞迁移的影响,并Transwell侵袭实验检测西黄丸含药血清对细胞侵袭能力的改变;用Western blot的方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白表达水平,RTq PCR法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、波形蛋白(Vimentin)和转录因子Snail的mRNA水平。结果:与空白组比较,西黄丸含药血清可降低SW480细胞迁移及侵袭的能力,增加E-cadhenrin mRNA表达水平,并抑制PARP-1,Vimentin和Snail mRNA表达水平,明显降低ERK蛋白的磷酸化水平,均具有统计学意义(P0.05)。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞的体外侵袭及迁移,并影响上皮-间皮转化(EMT)相关基因E-cadherin,PARP-1,Vimentin和Snail的mRNA表达,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关,本研究为西黄丸抑制结肠癌转移提供了科学证据。     

四君子汤对 IEC-6 细胞增殖相关指标及大鼠胃肠黏膜 c-Myc 表达的影响

目的观察四君子汤对IEC-6 细胞（大鼠小肠上皮细胞）增殖,多胺调控生长相关基因细胞周期检测点 激酶2（Checkpoint kinase 2,Chk2）、c-Myc 表达,以及对大鼠胃肠黏膜c-Myc 蛋白表达的影响。方法采用 SD 大鼠制备空白血清及四君子汤含药血清;无负荷细胞实验设空白对照组、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤 含药血清低、中、高（5%、10%、20%）剂量组;α-二氟甲基鸟氨酸（α-difluoromethylornithine,DFMO）负荷细 胞实验设空白对照组、DFMO 组（2.5 mmol·L-1）、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤含药血清低、中、高（5%、 10%、20%）剂量组;动物实验将SD 大鼠随机分为空白对照组、模型组（吲哚美辛组）及四君子汤低、高（5、 15 g·kg-1）剂量组。采用MTT 法检测IEC-6 细胞增殖情况;qPCR 法检测细胞Chk2、c-Myc mRNA 表达; Western Blot 法检测细胞Chk2、p-Chk2、c-Myc 蛋白表达和大鼠胃肠黏膜的c-Myc 蛋白表达。结果①细胞实 验：与空白对照组比较,10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药24 h 后IEC-6 细胞的增殖（P＜0.01）,提高 p-Chk2 蛋白及c-Myc mRNA/蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01）;5%、10%、20% 四君子汤含药血清可促进给 药48、72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 mRNA/蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。与DFMO 组比较,5%、 10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药48 h 后细胞增殖（P＜0.01）,提高c-Myc mRNA/蛋白表达（P＜0.05, P＜0.01）;10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 及p-Chk2 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）;20%四君子汤含药血清可促进Chk2 mRNA 表达（P＜0.05）。②动物实验：与模型组比 较,四君子汤5、15 g·kg-1 可上调模型大鼠胃黏膜及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。结论 四君子汤可促进IEC-6 细胞增殖,其作用机制可能与影响多胺信号通路,上调生长相关基因Chk2、c-Myc 表达有关。四君子汤可提高胃肠黏膜损伤模型大鼠胃及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达水平。     

柔肝方含药血清对TGF-β1 诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白的影响及其机制

目的:研究柔肝方含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常组、柔肝方低剂量(9 g·kg-1)给药3 d及5 d组、柔肝方高剂量(18 g·kg-1)给药3 d及5 d组,每组6只,按10 m L·kg-1·d-1灌服饮用水或柔肝方药液,制备含药血清。用含10%正常血清或含药血清的DMEM培养基体外培养LX-2人肝星状细胞株,MTT法检测细胞增殖;LX-2细胞经含10%正常血清或含药血清的培养基预处理24 h,再予TGF-β1(终质量浓度10μg·L-1)刺激24 h,收集细胞,RT-PCR法检测OPN mRNA表达,Western blot法检测OPN及磷酸化蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-PKB)蛋白表达。结果:与正常组比较,各含药血清组均能抑制LX-2细胞增殖(P0.05,P0.01);予含药血清预处理再经TGF-β1刺激的细胞,与正常组细胞比较,OPN mRNA,OPN和p-PKB蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01)。结论:柔肝方含药血清对TGF-β1诱导的人肝星状细胞表达OPN具有抑制作用,其机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路活化有关。     

清肠化湿方对溃疡性结肠炎湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子表达的影响

目的探讨清肠化湿方对溃疡性结肠炎(UC)湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子和紧密连接蛋白Claudin-2、Claudin-5的影响。方法 60只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组,模型组,美沙拉嗪组,低、中、高剂量中药组。除空白组外,其余小鼠置于高温、高湿环境,喂养高糖高脂饲料,饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)蒸馏水1周造成UC湿热证模型。低、中、高剂量中药组分别予浓度8.125、16.250、32.500 g/(kg·d)清肠化湿方灌胃,美沙拉嗪组小鼠予美沙拉嗪溶液灌胃,空白组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。灌胃7天,观察小鼠的一般情况、体重、粪便性状及隐血情况,进行DAI评分,记录小鼠每小时排出的湿粪粒数以及湿粪重量,测量小鼠结肠长度。HE染色观察结肠病理情况; Western Blot法检测结肠NLRP6、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(Caspase-1)、紧密连接蛋白(Claudin-2)、Claudin-5表达水平;ELISA法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、IL-1β含量;Real-time PCR法检测结肠NLPR6、caspase-1、Claudin-2、Claudin-5 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高(P0.01),结肠长度变短(P0.01);结肠黏膜病理受损严重;NLRP6、Claudin-5蛋白表达降低(P0.05),Caspase-1、Claudin-2蛋白表达增加(P0.05,P0.01);血清中炎症因子IL-1β含量增高(P0.05);NLRP6、Claudin-5 mRNA表达降低(P0.01),Caspase-1、Claudin-2 mRNA表达增加(P0.05,P0.01)。与模型组比较,美沙拉嗪组、中剂量中药组DAI评分降低(P0.01),结肠长度增长(P0.01)、病理情况改善;中剂量中药组NLRP6、Claudin-5蛋白表达上调(P0.05),各治疗组Caspase-1蛋白表达减少(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量中药组Claudin-2蛋白表达减少(P0.01);美沙拉嗪组及低、中剂量中药组血清IL-1β含量降低(P0.05,P0.01),美沙拉嗪组、高剂量中药组NLRP6 mRNA表达上调(P0.01,P0.05),各治疗组Caspase-1 mRNA表达下调(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量组Claudin-2 mRNA表达下调,中、高剂量组Claudin-5 mRNA表达上调(P0.05)。结论清肠化湿方能够调节NLRP6蛋白及相关炎症因子、紧密连接蛋白表达水平,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤。     

白藜芦醇对肠癌 SW480 细胞侵袭转移能力及 Hedgehog 信号通路的影响

目的:研究白藜芦醇对肠癌SW480细胞侵袭转移能力和对Hedgehog (Hh)信号通路的影响。方法:选用肠癌SW480细胞为研究对象,通过Transwell侵袭试验和RT-PCR、Western blot方法检测肠癌SW480细胞侵袭转移能力和Hh信号通路相关蛋白及mRNA的表达情况。结果:与未经白藜芦醇处理的肠癌SW480细胞比较,经白藜芦醇处理的肠癌SW480细胞的侵袭转移能力明显降低,E-钙粘蛋白(E-cadherin)和N-钙粘蛋白(N-cadherin) mRNA的表达情况及E-cadherin和N-cadherin蛋白水平均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:白藜芦醇能下调Hh信号通路的表达,从而降低肠癌SW480细胞的侵袭转移能力。     

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P0.05,P0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。     

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg~(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

丹芍化纤胶囊含药血清对大鼠肝星状细胞Gremlin和BMP7表达的影响

目的:观察丹芍化纤胶囊(DSHX)含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC)Gremlin和骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的影响,探讨该药治疗肝纤维化的可能机制。方法:将20只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组5只,分别经DSHX低剂量(0.5 g·kg-1),DSHX高剂量(1.0 g·kg-1),扶正化瘀胶囊(0.8 g·kg-1)及生理盐水ig 5 d,2次/d,其后股动脉取血制备大鼠DSHX含药血清、扶正化瘀胶囊含药血清及生理盐水血清,4组血清分别干预体外培养的HSC-T6,用MTT比色法测定各组HSC的增殖效应,ELISA法测培养液上清Ⅰ型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(ColⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的含量,免疫细胞染色法检测各组HSC内转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,采用RT-PCR法检测各组HSC Gremlin,BMP7 mRNA的表达,Western blot检测各组HSC Gremlin,BMP7蛋白的表达。结果:与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量组含药血清均可显著抑制大鼠HSC的增殖(P0.05),抑制率与扶正化瘀胶囊血清组相当;DSHX低、高剂量血清组培养液上清ColⅠ,ColⅢ与α-SMA的含量明显减少(P0.01,P0.05);HSC内TGF-β1蛋白的表达强度显著降低(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量血清组Gremlin mRNA及蛋白表达显著下降,而BMP7 mRNA及蛋白表达显著增多(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。结论:丹芍化纤胶囊可抑制体外培养的大鼠HSC增殖与活化,减少细胞外基质的合成,对大鼠肝纤维化有潜在的治疗作用,其机制可能与下调HSC Gremlin,上调BMP7的表达有关。     

香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠dyHDL的影响

目的:观察脾虚高脂血症大鼠失功能高密度脂蛋白胆固醇(dyHDL)变化及香砂六君子汤的干预作用,从HDL"质"的变化,揭示香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠dy HDL的影响及机制。方法:75只SPF级SD大鼠随机分为正常组,高脂组,脾虚高脂组,香砂六君子低、高剂量组(5. 67,11. 34 g·kg-1),脾虚高脂组,香砂六君子低、高剂量组采用饮食不节加力竭游泳的复合方法造模15 d后,正常组喂饲基础饲料,高脂组,脾虚高脂组,香砂六君子、高剂量组喂饲高脂饲料。12周后,香砂六君子低、高剂量组给予相对剂量药物,正常组、高脂组、脾虚高脂组给予相应体积生理盐水。4周后,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,间苯三酚法检测大鼠D-木糖排泄率,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏细胞形态变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆对氧磷酶1(PON1),载脂蛋白A1(apo A1),血清淀粉样蛋白A(SAA)含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠肝脏PON1,apo A1,SAA mRNA表达水平。结果:与正常组比较,高脂组及脾虚高脂组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平明显升高(P 0. 05),HDL-C水平明显降低(P 0. 05),高脂组及脾虚高脂组大鼠血浆PON1,apo A1含量明显降低(P 0. 05),SAA含量明显升高(P 0. 05),肝脏组织SAA mRNA显著升高(P 0. 01),PON1,apo A1 mRNA表达显著降低(P 0. 01),高脂组及脾虚高脂组大鼠肝细胞肿大变圆、可见散在的脂肪空泡,且脾虚高脂组大鼠尿D-木糖排泄率明显降低(P 0. 05)。与高脂组及脾虚高脂组比较,香砂六君子汤低、高剂量组血清TC,LDL-C水平明显降低(P 0. 05); HDL-C水平明显升高(P 0. 05),血浆PON1,apo A1含量明显升高(P 0. 05),SAA含量明显降低(P 0. 05),肝脏组织SAA mRNA明显降低(P 0. 05),apo A1 mRNA表达明显升高(P 0. 05),肝脏细胞肿胀明显减轻、脂肪泡沫化减少。与高脂组相比,脾虚高脂组大鼠血浆中PON1,SAA含量明显降低(P 0. 05),肝细胞肿胀明显、泡沫化加重。结论:脾虚状态下高脂血症大鼠脂质紊乱加重,香砂六君子汤干预后紊乱得以纠正,其作用机制可能与调控dy HDL相关mRNA及蛋白表达有关。     

四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织ERK1/2，Akt，Bax表达的影响

目的:观察四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),蛋白激酶B(Akt),细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的影响,探讨其保护神经细胞可能作用机制。方法:将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、四君子汤加减低、中、高剂量组(3.69,7.38,14.76 g·kg-1)。采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,取大鼠缺血侧脑组织,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),磷酸化Akt(p-Akt),Bax蛋白含量。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)测定脑缺血再灌注后脑组织内ERK1/2,Akt,Bax mRNA的表达变化。结果:与假手术组比较,模型组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达显著下调(P0.01);Bax蛋白及mRNA表达显著上调(P0.01);与模型组比较,四君子汤加减低、中、高剂量组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达明显上调,Bax蛋白及mRNA表达明显下调,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:四君子汤加减可能通过上调p-ERK1/2,p-Akt,下调Bax蛋白表达发挥脑保护作用。     

四君子汤对脾虚证胃肠动力障碍大鼠胃平滑肌CaM-MLCK信号通路的机制探讨

目的:通过实验探讨脾虚证胃肠动力障碍(gastrointestinal dysfunction,GID)的发病及四君子汤干预的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组和西药组,运用碘乙酰胺灌服+小平台站立+饥饱失常法塑造脾虚证GID动物模型,随后给予中药组四君子汤6.3 g·kg~(-1)和西药莫沙必利0.45 mg·kg~(-1)灌胃,通过胃排空测定、蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)及Mg~(2+)-ATPase活性检测对各组大鼠胃排空率及钙调素(CaM)-肌球蛋白轻链激酶(MLCK)通路改变进行检测。结果:模型组大鼠胃排空率较正常大鼠低(P0.01),平滑肌CaM,MLCK蛋白表达量,MLCK mRNA及MLCK活性升高(P0.05,P0.01);四君子汤干预后大鼠胃排空率升高(P0.05),平滑肌Ca M,MLCK蛋白,MLCK mRNA表达量及MLCK活性升高(P0.05,P0.01)。结论:脾虚证GID大鼠存在Ca M-MLCK信号通路改变,四君子汤可能通过调节该信号通路舒缓胃平滑肌高张力而间接促进胃肠动力。     

清肺化痰汤通过抑制JAK2/STAT3通路上调CFTR的表达治疗COPD

目的:探索清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的治疗作用及其机制研究。方法:应用烟雾吸入联合脂多糖(LPS)灌肺复合素的方法,建立COPD大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为6组,分别为正常组,COPD模型组,清肺化痰汤低、中、高剂量组和氨溴索组。造模28 d后开始给药,清肺化痰汤低、中、高剂量7.5,15,30 g·kg~(-1),氨溴索35 mg·kg~(-1),连续给药14 d。免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)蛋白和mRNA的表达。应用LPS诱导NCI-H292细胞建立黏液高分泌模型,实验分为8组,分别为空白组,LPS组,LPS+10%胎牛血清,LPS+生理血清,LPS+5%含药血清,LPS+10%含药血清,LPS+20%含药血清,LPS+AG490组。免疫荧光、蛋白免疫印迹法(Western blot)和Real-time PCR观察LPS刺激后的NCI-H292细胞中CFTR蛋白和mRNA的表达,Western blot检测LPS刺激后的NCI-H292细胞中Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路表达。结果:正常组大鼠肺组织管腔周围有大量棕褐色颗粒,COPD表达升高,与正常组比较,模型组大鼠肺组织管腔周围的棕褐色颗粒极少,COPD表达较低。与正常组比较,COPD模型组大鼠肺组织中CFTR mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,清肺化痰汤低、中、高剂量组明显升高大鼠肺组织CFTR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。与空白组比较,LPS组NCI-H292细胞CFTR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01),p-JAK2,p-STAT3蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,清肺化痰汤5%,10%,20%含药血清组明显升高CFTR mRNA和蛋白表达,明显降低p-JAK2,p-STAT3蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:清肺化痰汤通过抑制JAK2/STAT3通路来上调CFTR治疗COPD。     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡及GRP78，CHOP，HIRA及ASFla表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清抗膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞凋亡、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及衰老蛋白组蛋白调节因子(HIRA),染色质组装和调节复合因子1a(ASF1a)的影响。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养正常软骨细胞与KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及阳性药组(硫酸氨基葡萄糖胶囊3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为空白组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及阳性药组(阳性药组大鼠血清培养);采用活性检测试剂盒(CCK-8)法检测各组软骨细胞增值率;采用TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组软骨细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白的表达。结果:与空白组软骨细胞比较,模型组细胞增殖抑制率明显升高,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药组软骨细胞增殖抑制率降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞凋亡数量明显降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达降低(P0.05)。结论:独活寄生汤含药血清可通过减少KOA软骨细胞内质网应激相关因子GRP78,CHOP及衰老相关因子ASF1a,HIRA的表达,从而起到抑制KOA软骨细胞衰老、凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织GATA3，T-bet mRNA表达的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织锌指蛋白3(GATA3),T盒转录因子(T-bet)的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,每组10只,分别为正常组,模型组,二陈汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg~(-1)),消咳喘组(5 g·kg~(-1)),二陈汤组。以烟熏合并脂多糖(LPS)气管滴注的方法制备COPD大鼠模型。成功造模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等体积生理盐水。酶联免疫吸附测定(ELISA)测定大鼠血清中白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-12(IL-12)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测GATA3,T-bet mRNA表达,免疫组化(IHC)检测其肺组织GATA3,T-bet的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-10水平显著降低,IL-12显著升高(P 0. 01);肺组织GATA3的蛋白和mRNA表达显著降低,T-bet的表达显著升高(P 0. 01)。与模型组比较,各治疗组血清中IL-10水平均有不同程度的升高,IL-12则不同程度的降低(P 0. 05)。各治疗组大鼠肺组织GATA3 mRNA和蛋白表达均明显增多,T-bet则受到了抑制(P 0. 05)。结论:二陈汤加味可能是通过降低IL-12,增加IL-10的含量,并抑制T-bet,兴奋GATA3的蛋白和mRNA表达,来减轻COPD大鼠肺组织炎症,改善肺功能的,并阻止COPD的免疫紊乱。     

广藿香油对感染后肠易激综合征大鼠肠黏膜屏障的影响

目的:研究广藿香油对感染后肠易激综合征(PI-IBS)大鼠肠黏膜机械屏障和免疫屏障的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组,PI-IBS模型组、藿香正气液组、广藿香油低、中、高剂量组,每组8只。采用结肠灌注乙酸的方法建立PIIBS大鼠模型。正常组和模型组ig生理盐水,藿香正气液组ig藿香正气液3.3 m L·kg~(-1),广藿香油低、中、高剂量组分别ig广藿香油2,3,4 g·kg~(-1),每日1次,共5 d。采用透射电镜观察结肠黏膜上皮细胞超微结构;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法检测各组大鼠血清二胺氧化酶(DAO)和血清免疫球蛋白A(SIg A)含量;采用免疫组化检测结肠肠黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:PI-IBS大鼠结肠上皮细胞微绒毛稀疏,长短不一,有微绒毛断裂现象。广藿香油高剂量组对受损的上皮细胞有改善作用。PI-IBS组血清DAO含量高于正常组(P0.05)。广藿香油高剂量组血清DAO含量低于PI-IBS组(P0.05),与正常组比较,无显著性差异。PI-IBS组血清SIg A含量低于正常组(P0.01)。藿香正气液组、广藿香油高剂量组血清SIg A含量与正常组之间无显著性差异。PI-IBS组ICAM-1蛋白表达IA值明显高于正常组(P0.01)。广藿香油高剂量组ICAM-1蛋白表达IA值均明显低于模型组(P0.05),与正常组比较,无显著性差异。结论:广藿香油通过修复受损的肠上皮细胞的超微结构,降低肠道通透性,保护肠黏膜机械屏障。通过促进SIg A分泌,抑制ICAM-1的表达,发挥对PI-IBS免疫屏障的调节作用。     

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。