不同浓度熊果酸对破骨细胞增殖分化的作用及其意义

目的：研究熊果酸（UA）对破骨细胞（OC）增殖分化的影响,探讨其在正畸力致牙根吸收过程中的作用以及与OC间的关系。方法：对小鼠单核/巨噬系细胞RAW264.7进行OC诱导,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法及骨吸收陷窝观察鉴定诱导是否成功。采用CCK-8法选取对RAW264.7无细胞生物毒性适宜浓度的UA,观察其对RAW264.7增殖分化的影响。实验组在培养液中加入梯度浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^-1 UA,对照组不加UA。结果：TRAP染色及骨吸收陷窝观察,诱导培养RAW264.7细胞5 d后,可见TRAP染色阳性细胞;扫描电镜下吸收陷窝呈圆形和椭圆形等,底壁较粗糙,边界较清晰。表明RAW264.7细胞成功向OC分化。CCK-8检测,高浓度UA（>10.0μmol·L^-1）显著抑制OC的增殖;适宜浓度UA（5.0μmol·L^-1）既在生物安全浓度范围内,又抑制OC的增殖;低浓度UA（< 2.5μmol·L^-1）无作用。结论：RANKL可诱导RAW264.7细胞分化成熟。UA与OC增殖分化有关联,其在适宜浓度（5.0μmol·L^-1）时对OC增殖有抑制作用,且呈时间依赖性。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK通路调控高糖条件下破骨细胞分化生成及骨吸收功能

目的 探究在高浓度葡萄糖的条件下,唑来膦酸盐（ZOL）对破骨细胞分化及功能的影响,以及p38丝裂原蛋白活化激酶（p38 MAPK）通路在其中的调控机制。方法 将RAW264.7细胞向破骨细胞方向分化诱导,分为4组：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（16.5 mmol/L葡萄糖）、低糖+ZOL组（5.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）、高糖+ZOL组（16.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）。MTT法测定各组细胞增殖活性,光学显微镜检测RAW264.7细胞的迁移数目,免疫荧光组织化学染色检测各组破骨细胞细胞骨架的清晰程度。增加第 5 组：高糖+ZOL+SB203580（16.5 mmol/L 葡萄糖+0.1 μmol ZOL+10 μmol SB203580）后,TRAP染色鉴定各组阳性破骨细胞数量;将RAW264.7细胞与牙本质磨片共同培养,扫描电子显微镜测定各组细胞骨吸收陷窝的数量及面积;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting检测破骨细胞相关因子的mRNA和蛋白的表达情况。结果 细胞增殖实验中各组细胞增殖情况无明显差别。高糖条件对RAW264.7细胞的迁移具有促进作用,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑制细胞骨架的清晰程度及破骨细胞封闭区的形成;下调p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP mRNA和蛋白表达情况从而对破骨细胞的分化及功能发挥抑制作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。加入唑来膦酸盐后,RAW264.7细胞迁移受到抑制,差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞骨架的清晰程度进一步下降,破骨细胞封闭区的形成被进一步破坏破;p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA和蛋白质表达降低,进一步抑制破骨细胞分化及功能,差异具有统计学意义（P<0.05）;加入SB203580后,破骨细胞分化和骨吸收功能受到抑制,p38 MAPK、p-p38 MAPK表达受到抑制,下游NFATc1、CTSK、TRAP表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖条件抑制破骨细胞的分化生成和骨吸收功能。ZOL通过p38 MAPK信号通路实现了对高糖条件下破骨细胞分化及功能的抑制作用,提示p38 MAPK分子通路可作为唑来膦酸盐调控糖尿病性骨质疏松的新机制。     

电离辐射对破骨细胞分化过程中RANK表达的影响及其致骨损伤的分子机制

目的：研究电离辐射对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK) mRNA和蛋白表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法：采用50 μg•L-1 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。RQW264.7细胞分为对照组(未处理)、RANKL处理组(50 μg•L-1RANKL处理)、照射处理组(2 Gy γ射线照射)、照射联合RANKL处理组(50　μg•L-1RANK处理+2 Gy γ射线照射)。采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP）染色法检测各组破骨细胞的分化状态;采用PCR法检测各组细胞中RANK mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测各组细胞中RANK蛋白的表达水平。 结果：RAW264.7细胞经过RANKL诱导7 d后,TRAP染色呈现阳性,表明已经成功分化成为破骨细胞。与对照组比较,RANKL处理组和照射处理组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白的表达水平上调（P<0.05）;与RANKL处理组比较,照射联合RANKL组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：电离辐射可以促进破骨细胞前体细胞的增殖和成熟,增加其活性,但是对破骨细胞的增殖、成熟与活性却有一定的抑制作用。
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原花青素B1对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及其机制

目的：观察原花青素B1（PB1）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。方法：体外培养的处于对数生长期的小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组（细胞不进行处理）、LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS）、PB1组（细胞给予10 μmol·L^-1 PB1）和PB1+LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS+10 μmol·L^-1 PB1）。显微镜下观察各组细胞形态表现，流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平、细胞凋亡率和细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86及Toll样受体4（TLR4）表达水平。结果：与对照组比较，LPS组细胞皱缩变圆，但PB1组和PB1+LPS组细胞形态表现变化不明显。与对照组比较，LPS组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞中ROS水平降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞凋亡率升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平降低（P<0.05）。结论：LPS通过诱导细胞中ROS水平升高引起细胞损伤，PB1通过降低ROS水平，下调细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达对细胞发挥保护作用。     

野黄芩苷对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：探讨野黄芩苷（SCU）对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用,并初步阐明其作用机制。方法：培养U87细胞,采用不同浓度（20、40和80 mg·L^-1） SCU处理U87细胞（野黄芩苷组）,同时设空白对照组。MTT法检测各组U87细胞存活率,倒置显微镜观察U87细胞的形态表现,Annexin Ⅴ/PI双染检测各组U87细胞凋亡率,Western blotting法检测各组U87细胞中bax和bcl-2蛋白表达水平。结果：MTT法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1SCU组细胞存活率均明显降低（P<0.01）。倒置显微镜观察,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞数明显减少,细胞体积变小,细胞间距变大;细胞出现皱缩、脱落,贴壁细胞轮廓模糊。Annexin Ⅴ/PI双染,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高（P<0.01）。Western blotting法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bcl-2蛋白水平降低,80 mg·L^-1SCU组差异有统计学意义（P<0.01）;与空白对照组比较,80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bax/bcl-2比值升高（P<0.01）。结论：SCU通过上调U87细胞中bax/bcl-2比值诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的生长。     

杨梅苷抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞分化为破骨细胞的研究

目的探讨杨梅苷(Myricetin)对RANKL诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法通过CCK-8法筛选出不同浓度(1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L)杨梅苷对RAW264.7细胞的毒性作用。分别用50μg/L的RANKL、50μg/L RANKL+1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L的杨梅苷诱导RAW264.7细胞5天。对形成的破骨细胞进行TRAP染色并计数,TRAP染色阳性且细胞核数目≥3个认为是成熟的破骨细胞。50μg/L的RANKL、50μg/L RANKL+1.25mg/L、10mg/L的杨梅苷培养RAW264.7细胞24小时,使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化成熟相关基因C-Fos、NFATc1、Ctsk、TRAP的表达。结果 1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L浓度的杨梅苷对RAW264.7细胞毒性较小,可作为后续实验的用药浓度。TRAP染色显示,1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L浓度的杨梅苷可以抑制RANKL诱导的成熟破骨细胞的数目,且呈剂量依赖关系。RT-PCR结果显示,1.25mg/L、10mg/L的杨梅苷可以抑制破骨细胞分化相关基因C-Fos、NFATc1、Ctsk、TRAP的表达,且10mg/L的抑制作用比1.25mg/L更为显著。结论杨梅苷对RAW264.7细胞毒性较低,通过下调相关基因的表达抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化。杨梅苷可作为治疗骨质破坏相关疾病的潜在药物。     

姜黄素对肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子基因表达的影响

目的：研究姜黄素对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞（Cal27细胞）上清液诱导的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）分泌细胞因子基因表达的影响,阐明姜黄素抗OSCC的作用机制。方法：将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00μmol·L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育48 h,CCK-8法检测细胞活性。将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（5、10和20μmol· L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育36和48 h后,采用Real-time PCR法检测各组细胞中白细胞介素12（IL-12）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）mRNA表达水平;Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,姜黄素组加入不同浓度（5、10和20μmol·L^-1）姜黄素干预48 h,采用Real-time PCR法检测各组细胞中IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和精氨酸酶1（Arg-1）mRNA表达水平。结果：与对照组比较,40 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞活性明显降低（P<0.01）。不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞36 h,与对照组比较,20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,10和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS和TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平降低（P<0.01）;不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞48 h,与对照组比较,5和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,5和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,采用不同浓度姜黄素进行干预,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平升高（P<0.01）,不同浓度姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和Arg-1 mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。结论：姜黄素可以在诱导TAMs的不同阶段调节TAMs分泌细胞因子IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和Arg-1 mRNA表达水平。     

毛樱桃总黄酮对RAW264.7细胞中炎症因子水平的影响及其机制

目的：探讨毛樱桃总黄酮（PTTTF）对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎症模型中炎症因子的影响,阐明其作用机制。方法：通过LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7和人中性粒细胞（PMN）建立细胞炎症模型,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松（DXM）组和不同剂量（0.4、4.0和40.0 mg·L^-1）PTTTF组。采用RT-PCR法检测RAW264.7细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA表达水平;采用Western blotting法检测RAW264.7细胞中核转录因子κB（NF-κB）及信号通路关键分子细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、C-Jun氨基末端激酶1/2（JNK）和磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达水平;采用流式细胞术检测RAW264.7细胞S期细胞百分率和PMN细胞凋亡率。结果：与对照组比较,模型组RAW264.7细胞中IL-1β、IL-6、iNOS、TNF-α和HMGB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,S期细胞百分率明显升高（P<0.05）,PMN细胞凋亡百分率明显降低（P<0.05）。与模型组比较,4.0及40.0 mg·L^-1PTTTF组和DXM组RAW264.7细胞中IL-1β、iNOS、TNF-α和HMGB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,S期细胞百分率明显降低（P<0.05或P<0.01）,PMN细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：PTTTF能够下调LPS诱导的细胞炎症模型中炎症因子表达水平,该作用可能与其降低S期细胞百分率,促进其凋亡,并下调NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达有关。     

锌掺杂碳点联合蓝光照射对金黄色葡萄球菌生长及其生物膜形成的抑制作用

目的：通过水热法合成锌掺杂碳点（CDs）,观察锌掺杂CDs联合蓝光对金黄色葡萄球菌及其生物膜形成的抑制作用,并初步探讨相关机制。方法：采用水热法合成锌掺杂CDs,采用透射电子显微镜（TEM）、荧光光谱和傅立叶红外光谱仪（FT-IR）观察其表征。实验分为空白对照组、单独CDs溶液组、单独蓝光照射组和CDs+蓝光照射组。单独CDs溶液组细胞采用不同浓度（50、75和100 mg·L^-1） CDs溶液处理,单独蓝光照射组采用蓝光照射10、20和40 min,CDs+蓝光照射组采用上述浓度CDs溶液处理后,按上述时间进行蓝光照射,空白对照组仅采用培养基处理后避光培养。CCK-8法检测各组L929和MC3T3-E1细胞增殖率。选取抑菌效果最佳组（100mg·L^-1 CDs组）采用N-乙酰半胱氨酸（NAC）处理清除活性氧,实验分为对照组、100mg·L^-1 CDs组、0.5mmol·L^-1 NAC组和0.5mmol·L^-1NAC +100mg·L^-1 CDs组,采用分光光度法测定各组菌液浓度,采用结晶紫法检测各组金黄色葡萄球菌生物膜形成量,采用平板菌落计数法记录各组菌落数。结果：TEM检测,成功合成粒径约1.8 nm的锌掺杂CDs。荧光光谱检测,CDs最佳激发波长为342 nm,最佳发射波长为440 nm,且具有激发依赖性。FT-IR检测,CDs具有羟基、羧基和氨基等官能团。CCK-8法检测,共培养24 h时,100 mg·L^-1 CDs组L929和MC3T3-E1细胞增殖率均达80％。光照20和40 min时,与空白对照组比较,单独蓝光照射组菌液浓度降低（P<0.05或P<0.01）,光照40 min时金黄色葡萄球菌生物膜形成量减少（P<0.01）。光照10 min时,与单独蓝光照射组比较,CDs+蓝光照射组菌液浓度和生物膜形成量均降低（P<0.01）;与100mg·L^-1 CDs组比较,0.5mmol·L^-1NAC+100mg·L^-1 CDs组菌液浓度和生物膜形成量明显增加（P<0.01）。结论：锌掺杂CDs联合蓝光后通过光催化作用能有效抑制金黄色葡萄球菌的生长和生物膜形成。     

奥沙利铂对人舌鳞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨奥沙利铂（Oxaliplatin）对人舌鳞状细胞癌（简称舌鳞癌）CAL27细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其潜在作用机制。方法：采用不同浓度（0、10、20、40和80 mg·L^-1）Oxaliplatin处理CAL27细胞,分别作为对照组和10、20、40及80 mg·L^-1 Oxaliplatin组,采用结晶紫染色法观察各组CAL27细胞形态表现,CCK-8法检测各组CAL27细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期CAL27细胞百分比和凋亡率,实时荧光定量PCR法检测各组CAL27细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期蛋白E（cyclin E）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组CAL27细胞中抗凋亡蛋白survivin和促凋亡蛋白Bax的表达水平。结果：与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞出现一定程度的皱缩,80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞明显失去原有形态,细胞间连接丧失。与对照组比较,10、20、40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组G₀/G₁期CAL27细胞百分比明显升高（P<0.01）,CDK2和cyclin E mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40与80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。与对照组比较,40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bax蛋白表达水平则明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Oxaliplatin能够抑制CAL27细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞发生G₀/G₁期阻滞以及survivin蛋白表达水平降低和Bax蛋白表达水平升高有关。     

藁本内酯抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及其与GPER相关机制

目的 观察藁本内酯(LIG)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7向破骨细胞分化的影响,并探讨该作用与G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的相关机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,RANKL诱导破骨细胞分化,并用LIG进行干预.通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测和TRAP染色法评价破骨...     

抗坏血酸抑制核因子κB受体活化子配体诱导RAW264.7细胞的分化和功能

目的研究抗坏血酸对核因子κB受体活化子配体(RANKL)诱导体外培养的破骨前体细胞RAW2647形成成熟多核破骨细胞的影响,探讨抗坏血酸在破骨前体细胞分化中的作用及机制。方法利用不同浓度的抗坏血酸与RANKL单独或共同处理RAW2647细胞,MTT法测定细胞增殖,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定破骨细胞表型基因和功能基因的表达,Western印迹方法检测碳酐酶Ⅱ基因蛋白表达,破骨细胞的骨吸收功能用骨吸收陷窝面积计数法分析。结果抗坏血酸和RANKL都抑制RAW2647细胞的增殖(P<005),但它们之间无协同作用。抗坏血酸本身不能诱导RAW2647细胞形成破骨细胞,但可抑制RANKL诱导的TRAP阳性多核破骨细胞形成(P<005)。抗坏血酸下调RANKL诱导的碳酐酶Ⅱ和RANK基因mRNA表达及碳酐酶Ⅱ基因蛋白表达,抑制骨吸收功能(P<005)。结论抗坏血酸能直接抑制RANKL诱导的破骨细胞形成和功能。     

橄榄苦苷对破骨细胞的分化以及骨吸收功能的影响

目的 探讨橄榄苦苷(oleuropein)对破骨细胞分化成熟以及骨吸收功能的影响及其可能机制.方法 把不同浓度的橄榄苦苷(12.5、25、50 μmol/L)分别加入由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的体外破骨细胞培养体系中,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resist ant acid phosphatase,TRAP)染色方法观察呈TRAP阳性的多核细胞;RAW264.7细胞也用RANKL诱导,用流式细胞仪分析橄榄苦苷对破骨细胞凋亡的影响;在扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)下观察骨吸收陷窝,并用图像分析软件统计其面积.采用Western blot法检测橄榄苦苷对破骨细胞特异性蛋白组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、激活T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATC1)及相关信号通路蛋白表达的影响.结果 TRAP染色结果显示,橄榄苦苷能显著抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成,且呈浓度依赖性(P＜0.05);橄榄苦苷能下调破骨细胞特异性蛋白CTSK的蛋白表达水平(P＜0.05);橄榄苦苷对破骨细胞的凋亡无明显影响(P＞0.05);橄榄苦苷能显著减少骨吸收陷窝的面积(P＜0.05);橄榄苦苷能够下调NFATC1及磷酸化p38(p-p38)的表达(P＜0.05).结论 橄榄苦苷可以抑制由RANKL诱导的破骨细胞分化以及破骨细胞的骨吸收功能,可能和橄榄苦苷能够下调p38/MAPK信号通路有关.     

补骨脂素抑制破骨细胞形成及其机制的实验研究

目的 探讨补骨脂素对破骨细胞分化的影响,以及对破骨细胞ERα、IL-17R基因表达的调节作用,初步阐明补骨脂素抗骨质疏松作用.方法 采用核因子κB受体活化因子配体体外诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为破骨细胞,以雌二醇作为阳性对照药,补骨脂素分为高剂量(10 μmol/L)、中剂量(5 μmol/L)、低剂量(2.5 μmol/L).通过TRAP染色细胞数和骨吸收陷窝数评价药物抑制破骨细胞分化作用,同时采用RT-PCR和ELISA检测破骨细胞MMP-9、Cathepsin K、TRAP基因表达和蛋白水平,反映破骨细胞活性,RT-PCR和ELISA检测IL-17R、ER-α的基因表达和蛋白水平,初步探讨补骨脂素作用机制.结果 与对照组比较,补骨脂素高、中、低3个浓度均显著抑制破骨细胞形成数和骨陷窝形成数,同时对Cathepsin K、TRAP、IL-17R的基因表达均有显著的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著增强ER-α基因表达(P＜0.01).高、中、低剂量的补骨脂素对MMP-9的基因表达有显著的抑制作用(P＜0.05).与对照组比较,高、中剂量的补骨脂素对Cathepsin K的蛋白含量有非常显著的抑制作用(P＜0.01);高、中、低剂量的补骨脂素对TRAP、MMP-9、IL-17R的蛋白含量有显著的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01);高、中、低剂量的补骨脂素均显著促进ER-α的蛋白表达(P＜0.01).结论 补骨脂素对破骨细胞的形成和溶骨活性均有显著的抑制作用,该作用可能通过提高破骨细胞雌激素受体的表达和抑制IL-17R的表达实现.     

三根汤含药大鼠血清对颗粒诱导的破骨细胞形成及其骨吸收功能的影响

目的：研究三根汤含药大鼠血清在体外实验中对颗粒诱导的破骨细胞形成及其骨吸收功能的影响。方法：利用核转录因子-κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子共同诱导小鼠骨髓巨噬细胞分化成破骨细胞。将骨髓巨噬细胞同骨水泥即聚甲基丙烯酸甲酯颗粒按照1：3的比例分别加入至24孔板及装有骨片的96孔板中。50只SD雄性大鼠,随机分成5组,每组10只,分别给予不同药物后,同等条件下提取空白血清、西药（伊班膦酸钠）血清及高、中、低浓度中药（三根汤）血清并分别加入至相应组的培养液中。抗酒石酸酸性磷酸酶染色进行破骨细胞分化鉴定并计数,计算机图像分析技术测定骨片上骨吸收陷窝的面积。结果：加入含药血清组破骨细胞数量低于空白组（P〈0.05）,西药组与三根汤高剂量组破骨细胞数量低于三根汤中、低剂量组（P〈0.05）,且西药组与中药高剂量组两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。骨吸收陷窝实验显示空白组骨吸收陷窝面积大于其他组（P〈0.05）,西药组与三根汤高剂量组陷窝吸收面积小于三根汤中、低剂量组（P〈0.05）,且两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：三根汤含药血清可以抑制颗粒诱导的破骨细胞的形成及其骨吸收功能。     

吡格列酮对单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在破骨细胞分化过程中的作用及机制.方法 将小鼠单核细胞RAW264.7分为正常对照组、核因子κB受体活化子配体(RANKL)诱导组(使用30μg/L的RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化)和吡格列酮刺激组(在使用30 μg/L的RANKL诱导破骨细胞分化的同时给予10μmol/L的吡格列酮刺激,持续至分化全程),待破骨细胞分化成熟以后进行破骨细胞染色、计数,并利用实时定量PCR检测单核细胞向破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化子(RANK)的mRNA表达量.结果 吡格列酮抑制单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化,吡格列酮组的破骨细胞数目(176±58)个/cm2明显低于RANKL诱导组(322±74)个/cm2,差异有统计学意义(P＜0.01);吡格列酮抑制单核细胞RAW264.7分化过程中RANK的mRNA表达量,对照组(1.13±0.26);吡格列酮组(2.16±0.74)明显低于RANKL诱导组(4.94±0.39),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 吡格列酮抑制了单核细胞RAW264.7向破骨细胞的分化,这可能与PPARγ激动剂下调了RANK的表达,进一步抑制破骨细胞分化有关.