生物发光人肝癌裸小鼠原位癌模型的构建

目的选用稳定表达荧光素酶报告基因的人源性肝癌细胞株(HCCLM3-Luc),构建人肝癌细胞株原位癌荷瘤裸鼠动物模型。方法活体成像仪定量分析不同细胞数量HCCLM3-Luc的荧光强度表达情况,并检测各细胞数量的荧光素酶活性,探索HCCLM3-Luc荧光素酶产生的光子量与肿瘤细胞数量之间的线性相关性。采用肝叶原位接种HCCLM3-Luc瘤块组织和尾静脉注射HCCLM3-Luc细胞悬液,分别构建人肝癌裸小鼠原位癌模型;比较两种方法构建人肝癌细胞株原位癌裸鼠模型的可行性,并优化模型构建中的关键因素。结果 HCCLM3-Luc细胞数量的成正相关,(相关系数R~(2 )=0.9989,直线方程式:Y=1155.8X+1×10~6),平均ROI值约为每个细胞140光子/s。采用肝叶原位接种组的原位瘤成瘤率[(82.5±7.2)%]明显高于尾静脉注射[(34.1±13.2)%]。结论本课题构建了生物发光人肝癌细胞株原位癌裸鼠模型,该模型可采用小动物成像仪实时监测肿瘤生长情况。     

人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及三种方法比较

目的：建立胃癌裸鼠原位移植和转移模型，并比较三种不同方法的结果。方法：将胃癌肿瘤细胞悬液、胃癌裸鼠皮下移植瘤块和胃癌裸鼠原位移植瘤块种植于裸鼠胃壁，形成原位移植瘤，观察和比较三种方法所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。常规HE染色，观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移的病理切片。结果：细胞悬液种植的原位胃癌成瘤率为50％，淋巴结广泛转移率为37．5％，肝转移发生率为25％；皮下瘤块的原位成瘤率为100％，淋巴结广泛转移率为62．5％，肝转移发生率为50％，腹水形成率为6．25％；而胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％，淋巴结广泛转移率为87．5％，肝转移发生率为75％，腹水形成率为12．5％。细胞悬液成瘤时间较皮下肿瘤组织块和胃癌裸鼠原位移植块再次移植延迟2—3周，而后两者无差异。结论：三种原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，以胃癌裸鼠原位移植块再次移植为最优，且更具有人胃癌的生物学活性。     

人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及两种方法比较

目的：建立人胃癌裸小鼠原位移植和转移模型，并比较两种不同方法的结果。方法：将肿瘤组织块和肿瘤细胞悬液种植于裸小鼠胃壁形成原位移植瘤，观察和比较了两种方法所建立模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。结果：胃癌组织块种植的原位成瘤率达100％，淋巴结广泛转移率90％，肝转移发生率75％。细胞悬液种植的原位成瘤时间较组织块法延迟2周，成瘤率为67％，淋巴结广泛转移率为50％，肝转移发生率仅为30％。结论：两种原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，以肿瘤组织块原位模型为优，该模型的建立可为人胃癌转移机制和抗转移实验治疗的研究提供一种有价值的工具。     

不同转移潜能的人前列腺癌细胞原位转移模型的建立与比较

目的 建立不同转移潜能的人前列腺癌细胞转移模型，并比较其结果。方法 利用人前列腺癌细胞系PC3单克隆细胞株裸鼠皮下移植瘤，通过外科原位移植技术植入BALB／c-nu／nu雄性裸小鼠，建立人前列腺癌高、低转移细胞株转移模型；并观察比较两细胞株转移模型的原位成瘤率、自发转移率、两细胞株形态学特征和转移抑制基因CD44s的表达。结果 人前列腺癌高转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为100％，低转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为40％，两者主动脉旁淋巴结转移率差异有显著性（P〈0．05）。高、低转移细胞株形态学特征亦不同。CD44s蛋白在人前列腺癌高转移性单克隆细胞株PC3-H中的表达强度低于低转移性单克隆细胞株PC3-L。结论 遗传背景相似的人前列腺癌高、低转移细胞株原位移植转移模型为研究人前列腺癌转移机制提供了有力工具。     

AEG-1对裸鼠肝癌模型中肝癌细胞生长及肺转移的影响

摘要:目的 研究过表达和沉默 AEG-1基因对肝癌细胞生长的影响,以及 AEG-1基因在调节肝癌细胞定向肺转移 中的作用。方法 分别以携带过表达 AEG-1序列及对照基因序列的慢病毒(lentivirus)转染 SMMC-7721肝癌细胞株 (SMMC-7721-AEG-1-L;SMMC-7721-control-L);以携带shRNAAEG-1及对照shRNA 质粒(plasmid)转染SMMC-7721 细胞株(SMMC-7721-shAEG-1-P;SMMC-7721-control-P);使用实时定量 PCR 和 Westenblot检测 AEG-1的表达;随后 使用荧光素酶基因慢病毒包装颗粒转染上述4种稳定转染细胞株。使用上述细胞株分别建立3种裸鼠肝癌模型:皮下 移植瘤模型,原位移植瘤模型和血行播散模型;每种细胞株每一模型5只 Balb-c裸鼠,共60只。建立皮下移植瘤模型, 观测肿瘤的生长情况并绘制肝细胞肿瘤生长曲线;建立肝癌原位移植瘤和血行播散模型,采用生物发光活体成像技术及 组织病理学方法监测造模成功率及肿瘤在肝内、肝外转移情况。结果 通过肝癌皮下移植瘤模型可观察到 AEG-1过表 达组肿瘤体积显著高于对照组,且裸鼠肝脏组织出现弥漫性侵袭转移灶;在肝癌原位移植瘤和血行播散模型中可观察到 AEG-1过表达/沉默可以导致肝癌细胞肝内转移、肺转移率和转移灶数量显著增高/降低。结论 过表达 AEG-1基因可 促进肝癌细胞生长以及定向肺转移,沉默 AEG-1基因抑制肝癌细胞生长及定向肺转移。     

荧光素酶标的人肝癌细胞裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和PET-CT成像比较

目的利用荧光素酶基因标记的人肝癌细胞株BEL-7402建立裸鼠肝原位移植模型,及小鼠肝原位移植模型的生物发光和小动物PET-CT成像的比较。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并将其转入人肝癌细胞BEL-7402,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆并扩大培养。BALB/cA-nu裸鼠肝门静脉接种5×105个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像和小动物PET-CT成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达Luc的人肝癌细胞株,将其接种到裸鼠体内,活体荧光成像系统观察发现能够成瘤,小动物PET-CT影像观察发现小鼠肝脏边缘对18 F-FDG有高摄取区域。结论利用荧光素酶基因标记的人肝癌细胞BEL-7402成功建立了原位肝癌裸鼠模型,小动物活体成像结合小动物PET-CT技术为原位肿瘤模型的建立提供了一种新的可靠的技术,为进一步研究肝癌生长转移机制和药物开发提供了新的有用工具。     

人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型的建立和改进

目的：建立人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型。方法：用人胃癌细胞SGC-7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤。将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆肌层，观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化等生物学特性。结果：肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特点，人胃癌裸鼠原位移植模型成瘤率为100％(20／20)，肝脏转移率为45％(9／20)。结论：人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似，为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型。     

两种方法建立人肾透明细胞癌裸鼠原位移植转移模型及其比较

目的建立人肾癌裸小鼠原位移植转移模型,并比较两种不同方法的结果.方法将肾癌完整组织块和肿瘤细胞悬液种植于裸小鼠肾包膜形成原位移植瘤,并观察和比较两种方法所建立模型的肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率.结果肾癌完整组织块接种的原位成瘤率达75.0%,肾、肺门淋巴结转移率均73.3%,肺转移发生率53.3%;细胞悬液种植的原位成瘤时间较组织块法延迟10 d,成瘤率为40.0%,肺、肾门淋巴结转移率均12.5%,肺脏无转移.结论两种原位移植转移模型均具有人肾细胞癌自然生长过程的特点,肾癌完整组织块原位移植模型优于细胞悬液原位接种模型,为研究人肾细胞癌转移机制和抗转移实验治疗提供了有力工具.     

人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立

目的 :建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型 .方法 :用人胃癌细胞悬殊液接种于裸鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆膜下 ,称为间接胃原位移植模型 ,并与直接用细胞悬液接种于裸鼠胃浆膜下、皮下、腹腔、尾静脉的移植瘤模型比较 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性 .结果 :肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特片 ,尾静脉注射与直接原位接种成瘤率均为6 0 % ,间接原位接种模型移植成瘤率为 80 % ,皮下与腹腔接种成瘤率均为 10 0 % .间接胃原位移植模型肝脏转移率为6 0 % ,直接胃原位移植模型肝脏转移率为 33.3% (P <0 .0 5 )尾静脉移植瘤模型仅见肝脏转移 ,实验过程中裸鼠衰竭处死后的肺脏经连续组织切片未见瘤细胞侵袭 .移植瘤细胞具有分泌CEA的功能 ,细胞动力学检测显示以五倍体细胞为主 .结论 :人胃癌裸鼠皮下 -胃原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型 .     

人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察

目的 建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型.方法 采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块,建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个.观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率,常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况.电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2(COX-2).结果 胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100%(16/16),淋巴结广泛转移率为87.5%(14/16),肝转移发生率为75.0%(12/16),腹腔积液形成率为12.5%(2/16).结论 原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点,具有人胃癌的生物学活性.     

人胃癌完整组织块裸鼠原位种植转移模型的建立

目的:建立人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型.方法:人胃腺癌SGC-7901细胞株,裸鼠皮下注射(2×106/L细胞悬液),成瘤后反复传代形成实体瘤,以第6代瘤源为组织材料,打开腹腔,通过"生物胶粘贴法"用OB医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处;待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查.结果:术后3～4周左右,上腹可触及0.1～0.4 cm结节,5～6周时逐渐增大.8～10周时肿块明显增大,局部包块透壁可见,直径约1.0～1.9 cm.此后动物极度消瘦,部分动物腹水形成,活动受限,逐渐衰竭,濒临死亡.解剖见原位肿瘤成瘤率100%,病理学检查胃周淋巴结转移率100%,肝脏转移率72.7%,部分动物腹膜、胰腺转移.结论:人胃癌完整组织块通过"生物胶粘贴法"原位种植于裸鼠胃壁,能较好地重现胃癌的临床转移过程,为人类胃癌生长、转移机制及抗转移治疗方面的研究提供了一种较理想的动物模型.     

裸大鼠人高转移肝癌皮下和原位移植模型的建立

目的探讨建立裸大鼠人高转移肝癌的皮下和原位移植模型的可行性,并观察其生物学特性。方法体外培养人高转移肝癌株HCCLM3接种于裸大鼠皮下,建立皮下移植模型,然后用此移植瘤组织再接种于裸大鼠肝内,建立肝原位移植瘤模型。皮下移植的裸大鼠每周称重、测量瘤径,原位移植的裸大鼠每周称重,两组裸大鼠分别于移植8周后处死,通过巨检、镜检等观察移植肿瘤的生物学特性。结果裸大鼠皮下均成瘤,未见肺转移,裸大鼠原位移植成瘤率90％,肺转移70％,腹水发生率50％,自发消退率0％。结论裸大鼠人高转移肝癌HCCLM3移植瘤模型成功率高,原位移植有高转移,无自发消退现象,可作为研究肝癌转移和药物筛选的理想模型。     

人肝癌细胞株HCC-9724-P中转移相关基因的表达

目的研究人肝癌淋巴结转移性细胞株HCC-9724-P在裸鼠体内的转移特性,并观察转移相关基因nm23和PC NA的表达。方法将人肝癌淋巴结转移性细胞株HCC-9724-P及其母系细胞HCC-9724分别接种裸鼠,采用肝脏原位接种、尾静脉接种和皮下接种的方法,观察裸鼠体内成瘤时间,瘤体大小以及肝脏和淋巴结转移状况,采用免疫组化ABC的方法检测肝脏肿瘤标本中nm23和PCNA的表达。结果与母系细胞HCC-9724相比较,淋巴结转移性细胞株HCC-9724-P采用肝原位和尾静脉接种均可形成广泛的肝内侵袭和淋巴结转移,用裸鼠皮下接种成瘤时间短,瘤体大,但两种细胞形成的肿瘤均未发生转移,肿瘤转移相关基因PCNA在HCC-9724-P形成的肿瘤中均呈阳性表达,而肿瘤转移抑制基因nm23在HCC-9724-P中呈阴性表达。结论肝脏原位移植和裸鼠尾静脉注射是细胞株HCC-9724-P建立转移模型的良好途径,nm23和PCNA的表达水平进一步确定了细胞株HCC-9724-P的高转移特性。     

体内连续筛选法建立自发性肺转移人肝癌细胞系

目的　从人肝癌裸鼠肺转移灶中建立人肝癌细胞系 ,为探索肝癌转移的分子机制提供模型。方法　用高转移性人肝癌克隆细胞株MHCC97 H接种裸鼠 ,进行 3次肺转移筛选 ,取肺转移瘤建成皮下接种后自发性肺转移的细胞系。检测下列指标 :形态学、生长曲线、克隆形成率、运动速度、核型分析、流式细胞分析、免疫细胞化学检查、HBVDNA、成瘤性和转移性。结果　从裸鼠肺转移灶中培养出人肝癌细胞系HCCLM3,为多边形上皮性癌细胞 ,亚三倍体核型 ,染色体众数范围 5 5～ 5 8条 ;细胞倍增时间 34 9h ;克隆形成率 32 4 %± 3 2 % ;细胞运动速度 (2 0± 2 ) μm/h ;免疫细胞化学显示甲胎蛋白、白蛋白、细胞角质蛋白 8、P16阳性 ,P5 3、nm2 3、HBsAg阴性 ;细胞基因组中有HBVDNA整合。裸鼠皮下接种成瘤率 10 0 % ,5周后自发性肺转移率为 10 0 % ,肺转移灶中位数 12 1个 /裸鼠。瘤组织原位接种于裸鼠肝脏 ,5周后腹壁转移 10 0 %、腹腔内转移 80 %、肝内转移 10 0 %、膈肌转移 70 %、肺转移10 0 % ,肺转移灶中位数 2 6 8个 /裸鼠。结论　建成一个皮下和原位接种均出现自发性高转移的人肝癌细胞系 ,为研究肝癌转移提供了新的实验模型     

奥沙利铂化疗对荧光HepG2肝癌细胞裸鼠原位移植瘤侵袭转移潜能的影响

目的 探讨化疗对肝癌裸鼠原位移植瘤侵袭转移潜能的影响.方法 选用稳定表达绿色荧光蛋白的HepG2人肝癌细胞株构建肝癌裸鼠原位移植模型,成瘤后实验组给予10 mg/kg奥沙利铂腹腔注射化疗,每周1次,共3次.最后1次化疗后第7天,将2组裸鼠体内的残余肿瘤修剪成相同大小的瘤块再接种于新的裸鼠肝脏内.再接种后第6周,测量肿瘤大小,荧光显微镜下观察肿瘤的侵袭转移情况.结果 对照组和化疗预处理组裸鼠肿瘤体积分别为(2 376.29±573.69) mm3和(1 637.23±338.68) mm3 (P＜0.05).对照组裸鼠肿瘤均未发生肝脏、腹腔和肺转移,化疗预处理组裸鼠肿瘤发生肝内转移率为83.3％ (P=0.015),腹腔转移率为50％(P=0.182),肺转移率为50％ (P=0.182).结论 HepG2肝癌细胞在奥沙利铂化疗后生物学行为显著恶化.     

人肾细胞癌原位移植裸鼠模型的建立及转移相关基因表达分析

目的:建立原位移植裸鼠模型,筛选同一标本来源的转移性和非转移性肾细胞癌(RCC).方法:采用皮下移植法、细胞悬液原位注射法、肾周筋膜内法、组织块原位移植肾包膜下法对BALB/c裸小鼠接种(或注射)RCC组织块(或细胞悬液),观察各种方法的成瘤及转移情况,并采用免疫组化方法初步对比分析了VEGF、bFGF、P16、Bcl-2、C-met在裸小鼠体内的转移性和非转移RCC的表达情况.结果:(1)组织块原位移植肾包膜下法成瘤率及转移率最高,分别为73.3%(11/15)、20%(3/15).(2)与原发灶相比,转移灶中VEGF表达明显升高(P<0.05),C-met表达明显降低(P<0.05),bFGF、Bcl-2、P16表达降低但无统计学差异(P>0.05).结论:组织块原位移植肾包膜下法是切实有效的RCC转移模型制作方法.采用该法在裸鼠中获得了人转移性和非转移RCC,免疫组化分析证实了转移性RCC中新血管生成因子VEGF表达显著增加.     

裸鼠人肝癌原位移植瘤模型的建立

目的 探讨利用人肝癌细胞系,建立裸鼠人肝癌原位移植瘤模型,在肝细胞癌自杀基因治疗的应用价值.方法 取人肝癌细胞系Be17402和HepG2,制备皮下移植瘤,后将肿瘤组织接种于裸鼠肝内,建立裸鼠肝原位移植瘤模型.HE染色进行病理形态学观察.结果 裸鼠皮下成瘤率为100.0％(4/4).肝内接种肿瘤,裸鼠存活率100.0％(32/32),成瘤率81.3％(26/32);镜下观察肿瘤细胞成浸润性生长;肺、肠系膜淋巴结等组织器官未见肿瘤转移灶.结论 应用人肝癌细胞系建立的裸鼠肝原位移植瘤模型可以很好地模拟人肝癌的解剖学特征,但肝癌转移模型的建立方法尚需探讨.     

裸鼠原位肝癌移植模型的建立及其生物学观察

目的 探讨采用HepG2细胞株建立裸鼠人肝癌原位模型的方法,评价其生物学特性.方法 取人肝癌细胞株HepG2制备皮下移植瘤,然后将瘤块植入裸鼠肝左叶,建立原位移植模型,观察荷瘤鼠生存状态.裸鼠全身衰竭时处死、取瘤,HE染色及免疫组化法观察瘤组织的病理特点、血管生长及肿瘤细胞凋亡情况.结果 种瘤成功率90％,荷瘤鼠中位生存期76.7d,肿瘤直径(16.8土2.2)mm,体积(965.3±333.3)mm3,重量(1.1±0.4)g.瘤组织早期具有旺盛的增殖能力,晚期癌组织中Caspase3、TUNEL呈强阳性表达.结论 由原位移植法建立的裸鼠人肝癌模型,造模时间短、成瘤率高,生物学行为与临床肝癌相似,是基因药物筛选研究的理想模型.     

细胞悬液法与组织块埋植法制作兔VX2肝癌影像模型的对照研究

目的：通过对照细胞悬液法与组织块埋植法,选择较合理的兔VX2肝癌模型的造模方法。方法：取传代荷瘤VX2种兔,分离肿瘤,制备肿瘤细胞悬液和肿瘤组织块,取新西兰大白兔各10只,分别经超声导引肝内注射和开腹肝内组织块埋植,3周后处死模型兔,观察原位肿瘤大小,肝内、腹腔及肺部转移情况。结果：两种方法造模,成模率均为100%;组织块埋植法组原位肿瘤体积明显大于细胞悬液组;组织块埋植造模较少引起异位种植,肿瘤生长较为均一。结论：组织块埋植法优于细胞悬液法。     

构建 SD 大鼠移植性胃癌模型及不同方法诱癌率的比较

目的采用瘤细胞悬液和瘤组织块原位种植构建SpragueDawley（SD）大鼠原位移植胃癌模型,并比较其诱癌率。方法分别采用直接注射法和组织插块法构建SD大鼠胃癌模型：直接注射法组将walker-256细胞悬液直接注射到sD大鼠胃壁的浆膜内,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率;组织插块法组以walker-256细胞接种于SD幼鼠皮下,形成稳定传代的皮下移植瘤,再取该肿瘤组织块原位移植于SD大鼠胃壁,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率。结果直接注射法组原位移植成功率为5／7,造模9d后平均瘤重为0．320g;组织插块法组原位移植胃癌成功率为3／7,造模9d后平均瘤重为0．206g。直接注射法组原位移植成功率和造模9d后平均瘤重均较组织插块法组高。结论直接注射法原位移植模型的生物学行为与人胃癌自然生长过程相似,可作为一种有价值的工具用于胃癌转移机制和抗转移实验。