p21WAF1基因遗传多态性与乳腺癌发病关系的风险

目的 探讨p21WAF1基因多态性与乳腺癌遗传易感性之间的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法检测117例乳腺癌患者和123例健康对照组外周血DNA p21WAF1基因第2外显子密码子31多态性的分布情况.结果 乳腺癌与健康对照组间p21WAF1基因第2外显子密码子31的A(arginine)、C(serine)等位基因频率分别54.27%、45.73%及50.00%、50.00%(P＞0.05).携带Ser/Arg和Arg/Arg基因型的个体与携带Ser/Ser基因型的个体比较,乳腺癌患病风险无明显增加(OR,1.108;95%CI,0.579-2.122).结论 p21WAF1基因第2外显子密码子31多态性可能与贵州地区汉族妇女乳腺癌的发病风险无相关性.     

重组人p53腺病毒联合紫杉醇对胃癌细胞的作用

目的 研究重组人p53腺病毒增加胃癌细胞对紫杉醇敏感性的作用.方法 重组人p53腺病毒感染胃癌细胞BGC-823,Western blot法检测p53蛋白在胃癌细胞中的表达;MTT法测定重组人p53腺病毒单独及联合紫杉醇用药的不同浓度处理细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡.结果 重组人p53腺病毒感染BGC-82348h,p53蛋白在BGC-823中高表达,并产生G2/M期阻滞和细胞凋亡.重组人p53腺病毒联合紫杉醇用药增加紫杉醇的敏感性,有剂量时间的依赖性.结论 腺病毒介导p53基因感染BGC-823细胞诱导凋亡并增加胃癌细胞对紫杉醇的敏感性.本实验为p53基因治疗与胃癌化疗临床结合提供了可靠的实验依据.     

p53基因与胃癌的关系

胃癌的发生发展是多基因参与、多步骤进行的过程，而p53基因突变作为一种重要抑癌基因失活方式，在其中发挥了重要作用。本文介绍了p53基因的结构和功能，并对胃癌中发现的p53基因突变类型、方式、与多种因素之间的关系以及针对p53进行肿瘤基因治疗等方面研究进展进行简要综述。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)技术探究SAHA调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平的情况。结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21~(WAF1/CIP1)基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21~(WAF1/CIP1)mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平。结论 SAHA通过影响p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程。     

腺病毒介导的p53转移对顺铂诱导KB细胞凋亡的影响

目的　探讨野生型 p5 3基因对顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法　用重组p5 3腺病毒 (Ad p5 3)和重组luc腺病毒 (Ad luc)分别感染 p5 3缺失的口腔癌细胞KB ,观察外源p5 3基因对顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的影响。 结果　流式细胞术和原位末端标记显示用Ad luc与顺铂联合处理KB细胞不能诱导凋亡发生 ,用Ad p5 3与顺铂联合处理则诱导出较明显的细胞凋亡 ,表明p5 3可增强KB细胞对顺铂的敏感性 ;Northernblot显示 p5 3可下调bcl 2基因表达及上调bax基因的表达。结论　p5 3可能通过调节凋亡相关基因的表达水平而在顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡中发挥重要作用 ,重组p5 3腺病毒与顺铂联合应用有助于克服 p5 3失活肿瘤细胞的耐药性。     

重组腺病毒介导的野生型p53基因对淋巴瘤细胞放疗敏感性的影响

目的观察重组腺病毒介导的野生型p53基因药物转染及联合辐射作用于淋巴瘤细胞后的表达状况及对其产生的杀伤效应。方法用MT(Tmethyl thiazolyl tetrazolium)法测定不同药物浓度、作用不同时间、不同辐射剂量及药物联合辐射对于raji和daudi细胞的生长抑制率;分别针对raji和daudi细胞设置对照组、加药组、照射组、联合组,进行蛋白提取,Western-Blotting法测定p53蛋白的表达,将图像进行比对分析。并用SPSS14.0软件对于上述数据进行分析。结果 raji和daudi细胞的加药组的生长抑制率明显于高于对照组(P<0.05)。两种细胞照射组的生长抑制率则随照射剂量的增加而上升。daudi细胞联合组的生长抑制率在各个剂量点上与照射组相比均无显著差异(P>0.05)。实验组的p53蛋白表达量均比对照组稍多,但两种细胞的联合组和照射组的p53蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。结论重组腺病毒介导的p53基因药物能够转染入淋巴细胞,并表达p53蛋白,其对于raji和daudi淋巴瘤细胞有一定的抑制作用。重组腺病毒介导的p53基因药物对于增加放疗效果基本没有帮助。     

萎缩性胃炎组织中p21~(WAF1)的表达状况

p21~(WAF1)基因(简称p21基因)定位于第6号染色体短臂上(6p~(21.2)),现认为其是一种抑癌基因,已发现p21在胃癌组织中的表达下调(减弱或消失)。我们应用免疫组织化学方法检测了p21在萎缩性胃炎中的表达状况,以了解胃癌癌前疾病中p21基因表达情况。     

胆囊癌p53、p73和p21WAF1蛋白的表达

目的 探讨p53、p73和p21WAF1基因在胆囊癌中的表达.方法 应用免疫组化SP法检测48例胆囊癌、32例癌旁组织、20例正常胆囊组织p53、p73和p21WAF1蛋白的表达,分析p73和p21WAF1相互关系.结果 48例胆囊癌中,p53、p73和p21WAF1蛋白阳性表达率分别为56.2%、52.1%和43.8%,均高于癌旁组织和正常组织(P<0.01).胆囊癌中p73蛋白的表达与Nevin分期有关(P<0.05),p21WAF1蛋白的表达与淋巴结转移、Nevin分期有关(P<0.05).结论 p53、p73和p21WAF1基因在胆囊癌高表达,提示三者在胆囊癌发生发展中起重要作用.胆囊癌中p73与p21WAF1表达无相关性.     

乳腺癌MCF-7细胞p21~(WAF1/CIP1)启动子区HDAC1高功能结合位点的研究

目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21~(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L~(-1)0.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L~(-1)10μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Realtime PCR法检测p21~(WAF1/CIP1)启动子区从TSS到其上游(+2~-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析。结果 B组中,HDAC1抗体在p21~(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达最高。S组中,HDAC1抗体与p21~(WAF1/CIP1)启动子区f1~f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达最低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达最大值。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21~(WAF1/CIP1)启动子区,该启动子区上游-2 800 bp至-3 200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区。     

p21WAF1和p53在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨p21WAF1和p53蛋白在宫颈鳞癌发生发展中的表达以及相互关系。方法采用免疫组化方法研究50例宫颈鳞癌和30例正常子宫颈组织p21WAF1和p53蛋白的表达。结果宫颈鳞癌组织中p21WAF1蛋白阳性表达率42.0%,明显低于正常对照组73.33%(P<0.05);p53蛋白的阳性表达率为54%,明显高于正常对照组6.67%(P<0.05)。p21WAF1与p53表达存在明显负相关。结论 p21WAF1蛋白的低表达和p53蛋白的高表达与宫颈鳞癌的发生发展相关。     

稳定表达siRNA-ARK5基因的胃癌SGC-7901细胞系的构建

目的构建稳定表达siRNA-ARK5基因的人胃癌SGC-7901细胞系,为研究ARK5在胃癌发生发展中的作用与机制奠定基础。方法把pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-ARK5重组质粒通过脂质体转染胃癌SGC-7901细胞,利用不同浓度的G418筛选获得稳定转染细胞株,挑取单克隆细胞系进行培养,应用荧光显微镜和RT-PCR技术确定是否获得了ARK5基因被稳定抑制的单克隆细胞系。结果成功挑取的4株单克隆细胞中2株细胞的ARK5基因的表达被显著抑制。结论通过siRNA干扰技术成功构建了稳定表达siRNA-ARK5基因的胃癌SGC-7901细胞系,为研究ARK5在胃癌发生发展中的作用与机制奠定了基础。     

西达本胺对胃癌细胞株SGC-7901的体外抗增殖作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂西达本胺对胃癌细胞株体外抗增殖作用及其可能机制.方法 用西达本胺终浓度为0、16、32、64、128、256μmol/L(分别为B、A1、A2、A3、A4、A5组)处理SGC-7901细胞24、48、72 h.采用MTT法及流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡,反转录PCR(RT-PCR)检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)及HDAC11 mRNA表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测表皮生长因子受体(EGFR) mRNA表达,Western blot检测Notch1蛋白的表达.结果 与B组相比,西达本胺呈浓度依赖性地抑制SCC-7901细胞增殖(P＜0.05),提高SGC-7901细胞凋亡率(P＜0.05),阻断SIRT1、HDAC11、EGFR mRNA以及Notch1蛋白表达(P＜0.05).结论 西达本胺可抑制SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能是降低SIRT1、HDAC11基因的表达或与Notch及EGFR信号通路相关.     

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。     

阿司匹林-烟酰胺-锌络合物对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用

目的：探讨阿司匹林-烟酰胺-锌络合物（商品名：佛立沙,WUY）对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用。方法：用MTT法考察WUY对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,用流式细胞技术检测WUY对胃癌细胞周期的影响。结果：WUY在2、4、8、16mmol/L剂量时对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率分别为9.95%、19.28%、37.36%、63.47%（P〈0.05）,平均IC50为11.06mmol/L。增殖抑制曲线表明,WUY对胃癌细胞有抑制作用且呈明显的量效和时效关系。流式细胞仪检测显示,WUY对胃癌细胞作用24h后,呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例和G2/M期细胞比例升高。结论：WUY能显著抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖,其作用可能与影响细胞周期有关。     

Toxicarioside N induces apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cell by activating the p38MAPK pathway

Natural plant compounds with potent proliferation inhibition and apoptosis induction properties have been screened as novel anticancer drugs. Toxicarioside N (Tox N) was isolated from the seeds of the tropical plant Antiaris toxicaria in Hainan province, China. To our knowledge, the effects that Tox N has on the apoptosis of SGC-7901 cells and its potential mechanism have never been investigated. In this study, we detected the anticancer activities of Tox N and explored the potential mechanism in the human gastrointestinal cancer cell line SGC-7901. Here, we found that Tox N inhibited SGC-7901 cell growth in a dose- and time-dependent manner and induced apoptosis in cells based on cell morphology and flow cytometry analyses. Additionally, the SGC-7901 cell treated with Tox N up-regulated the expression level of cleaved caspase-3/9 and PARP, increased the Bax/Bcl-2 ratio, and led to the release of cytochrome c into the cytoplasm. In addition, Tox N treatment led to the phosphorylation of p38MAPK. SB203580, a p38MAPK inhibitor, partially attenuated Tox N induced apoptosis by preventing the activation of caspase-3/9 and PARP. Our results indicated for the first time that Tox N can induce SGC-7901 cells apoptosis by activating the p38MAPK pathway.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。     

三氧化二砷联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC-7901的作用

目的:体外观察三氧化二砷及木黄酮对人胃癌细胞株(SGC-7901)的相互作用。方法:采用MTT法检测药物效应,利用中效原理判定两药合用的效果。结果:两种药单独应用时随着药物剂量增加,其效应也增加,呈剂量-效应关系;两药合用时合用指数均小于1(CI<1)。结论:三氧化二砷联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC-7901的作用是协同作用。     

海嘧啶注射剂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机理。方法：采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响，采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源，结果：海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡，升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i浓度，[Ca^2 ]i升高来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放，结论：海嘧啶的抗肿瘤作用机理为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i，启动细胞凋亡机制，从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

叶酸对人胃癌SGC-7901细胞株增殖及ABCG2表达的影响

目的 观察叶酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖及ABCG2表达的影响.方法 应用叶酸处理人胃腺癌SGC-7901细胞;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学SP法和RT-PCR分别检测ABCG2蛋白及mRNA的表达.结果 (1)MTT法证实,与空白对照组相比,叶酸组SGG-7901细胞的增殖明显受抑制,差异有统计学意义(P＜0.01),且随时间的延长和剂量的增加,胃癌SGC-7901抑制率呈上升趋势.(2)免疫细胞化学和RT-PCR结果分别显示,叶酸为低浓度时(10、50μg/ml),虽然随着浓度增加,ABCG2蛋白及mRNA表达有增强趋势,但与空白对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);当叶酸为高浓度时(250 μg/ml),ABCG2蛋白及mRNA表达增加显著,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 叶酸对胃癌细胞存在抑制作用,但叶酸能促进ABCG2表达.表明叶酸对肿瘤具有一定的治疗作用,但高剂量叶酸可促使肿瘤发生耐药,导致肿瘤复发.     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨SW体外诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC7901细胞的作用剂量,通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53、cmyc、Bcl2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式,同时利用激光共聚焦显微镜对细胞内Ca2 浓度的监测,研究SW与细胞内Ca2 超载的关系。结果:SW体外抗SGC7901细胞的完全致死剂量为6.2μg·ml-l,高于0.05μg·ml-l时抑制作用明显(P<0.05),其LC50为0.84μg·ml-l;经SW0.5～1.5μg·ml-l处理24h可引起凋亡抑制基因p53、Bcl2的明显下降、凋亡促进基因cmyc的明显升高以及肿瘤细胞内Ca2 超载,最终诱导SGC7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。