LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用

目的通过活体阿霉素（ADR）大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的 表达、尿蛋白变化相关性及其意义。方法应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组（NC组）,阿霉素肾病组（ADR组）,阿霉 素+地塞米松治疗组（DEX组）,阿霉素+地塞米松+LY294002干预组（LY294002组）。分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定 量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平。结果ADR组蛋白 尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异（P<0.05）;DEX组 尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT 比值升高和Bad 蛋白表达下调、Bad mRNA 表达减少,与NC 组无统计学差异（P>0.05）; LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差 异（P<0.05）。结论地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002 干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用。这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导 机制之一。     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

PI3K特异性抑制剂LY294002增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）参与非小细胞肺癌A549细胞株抵抗重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白诱导凋亡的机制,寻找增强rsTRAIL蛋白杀伤非小细胞肺癌细胞的新方法。方法：选取对数生长期A549细胞,随机分为rsTRAIL蛋白组和PI3K特异性抑制剂LY294002联合rsTRAIL蛋白（LY294002+rsTRAIL蛋白）组。MTT法检测2组A549细胞生长抑制率,流式细胞技术检测2组A549细胞周期和细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测2组A549细胞中p-Akt(Ser473)、c-FLIPL、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：与rsTRAIL蛋白组(5.16%±0.32%)比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞生长抑制率(74.6%±2.63%)明显升高(P<0.05)。与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组处理2 h后G0/G1期A549细胞百分比增加(P<0.05),S期细胞百分比降低（P<0.05）。LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞凋亡率为(61.50±3.02)%,显著高于rsTRAIL蛋白组(3.21％±0.96％)（P<0.05）。蛋白质印迹检测,与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞中p-Akt、c-FLIPL和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）。结论：LY294002能够抑制PI3K活性,增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对食管癌细胞EC109中FR和hnRNP-E1表达的影响

目的研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响。方法不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,免疫印迹法(Westorn blot)检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、FR和hnRNP-E1的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关趋势,P-Akt和FR蛋白表达明显下降,hnRNP-E1蛋白表达无显著变化。结论阻断PI3K/Akt信号通路可以改变人食管癌细胞EC109中FR的表达,并明显抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化有关。     

PI3K特异性抑制剂对人大肠癌细胞HCT-8生长的影响

目的：研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人大肠癌细胞系HCT-8生长的影响。方法：将对数生长期的HCT-8细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验1～4组加入LY294002,其终浓度分别为5、10、20和40μmol/L,培养24、48、72、96h后,MTT法测定细胞增殖抑制率。取传代培养并贴壁的HCT-8细胞分组培养,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24、48和72h后流式细胞仪检测细胞周期。取对数生长期的HCT-8细胞,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24h,培养前后,免疫细胞化学SP法检测P-Akt和NF-κB。结果：与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HCT-8细胞增殖抑制率增大（P〈0.01）。10μmol/L的LY294002作用于HCT-8细胞,随着作用时间的延长,G0/G1期细胞逐渐增加,S和G2/M期细胞逐渐减少（P〈0.05）。对照组培养前后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达无明显变化,10μmol/L的LY294002作用后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达降低（P〈0.01）。结论：LY294002可能通过抑制P-Akt的表达,从而抑制人大肠癌HCT-8细胞的生长。     

PI3K抑制剂的研究进展

PI3K作为一种胞内磷脂酰肌醇激酶,是细胞内重要的信号转导分子,参与调节细胞的增殖、凋亡与分化等生理过程。众多研究表明PI3K依赖性信号通路(以PI3K-Akt-mTOR通路为主)的过度激活与肿瘤的发生有密切关系。过去的几十年中以PI3K-Akt-mTOR通路为靶点的治疗已经取得了很大进步,使得人们认识到PI3K抑制剂在肿瘤的治疗中发挥的重要作用。本文将对PI3K抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述。     

磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂对人宫颈癌细胞株生长的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K）特异性抑制剂LY294002[2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于宫颈癌细胞株SiHa,探讨其对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法培养宫颈癌细胞株SiHa,分为对照组和LY294002干预组（LY294002 5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）分别作用6h、12h、24h、48h;MTT比色法检测体外使用抑制剂对宫颈癌细胞株SiHa生长的作用;运用流式细胞技术检测SiHa凋亡抑制率。结果 LY294002能抑制宫颈癌体外培养细胞系SiHa的生长,并以剂量-时间依赖方式诱导凋亡,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LY294002能有效抑制SiHa细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。PI3K/Akt介导的信号转导通路可能宫颈癌的发生发展起作用。     

鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对慢性背根节压迫大鼠痛阈的影响

目的 了解鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对慢性背根节压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)Sprague - Dawley (SD)大鼠痛阈的影响,初步探讨PI3K在神经病理性疼痛形成中的作用.方法 鞘内置管成功的SD大鼠32只,随机分为空白对照组,假手术组,CCD组和鞘内LY294002+CCD组(抑制剂组),每组8只,分别于造模前和模型建立后的第1、3、5、7、10、14天测定各大鼠机械痛敏(机械缩腿阈值,mechanicalwithdrawal threshold,MWT)和热痛敏(热缩腿潜伏期,thermal withdrawal latency,TWL),LY294002术前鞘内注射.结果 鞘内注射LY294002能延缓CCD大鼠痛敏的形成.结论 鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002能明显减轻慢性背根节压迫大鼠机械痛敏和热痛敏,提示PI3K在脊髓水平参与了神经病理性疼痛信息传递.     

PI3K/mTOR双靶点抑制剂PI-103在体外对喉鳞癌细胞的作用

 目的    探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)双靶点抑制剂 PI-103 在体外对喉鳞癌细胞的作用。 方法    采用喉鳞癌细胞株 Hep-2 及AMC-HN-8,分别加入LY294002、Rapamycin或PI-103处理培养细胞,DMSO处理作为对照,应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Transwell 小室观察肿瘤细胞迁移及侵袭能力;Western blot测定相关细胞周期、细胞凋亡及 PI3K/Akt/mTOR 信号通路相关蛋白质水平。结果    LY294002、Rapamycin 、PI-103能将喉鳞癌细胞周期阻滞于S期,G2期百分含量较空白对照组显著下降,细胞周期相关蛋白Cyclin E1和 Cyclin D1水平降低。流式细胞术筛选细胞死亡率升高,凋亡相关蛋白Caspase9,Caspase3,Caspase8的表达量升高(P<0.05),然而活性凋亡蛋白active Caspase3并没有显著升高,但PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白质p-AKT和p-4EBP1表达量降低。药物组肿瘤迁移和侵袭细胞数均低于对照组。PI-103在以上事件中作用效率均显著高于LY294002和Rapamycin (P<0.05)。结论    PI-103 能够调节细胞周期蛋白阻滞喉鳞癌细胞周期,促进细胞死亡,抑制细胞迁移及侵袭,且效果优于单靶点抑制剂LY294002和Rapamycin,对头颈部鳞癌的临床治疗有潜在的研究价值。     

LY294002通过PI3K/Akt/Mtor对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响

目的:探讨LY294002对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响及其机制.方法: 通过流式细胞术从人结直肠癌HCT116细胞中分选CD133+CD44+的肿瘤干细胞(CSCs),不同浓度(10、20、30 μmol/L)LY294002作用CSCs,对照组不使用药物.成球实验及有限浓度稀释法检测细胞自我更新能力,细胞活性计数法及平板克隆实验检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及流式细胞术检测PI3K/Akt/mTOR信号通路基因Akt、磷酸化Akt、诱骗受体3(DcR3)、B淋巴细胞瘤-2(Bc--2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达变化.结果: 与对照组相比,30 μmol/L LY294002作用实验组成球能力明显削弱(P＜0. 01),CSCs比例明显下降(P＜0. 05),增殖能力明显削弱(P＜0. 01),G0G1期细胞周期受到阻滞(P＜0. 01);磷酸化Akt表达降低(P＜0. 01),DcR3、Bcl-2、mTOR及Cyclin D1表达量下调(P＜0. 01).结论: LY294002可能通过PI3K/Akt/mTOR通路导致结直肠癌CSCs周期阻滞、抑制其自我更新、增殖能力.     

PI3K/Akt抑制剂联合西妥昔单抗对人肺癌细胞的体外抑制作用

目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002单独或联合西妥昔单抗对人肺癌细胞株A549的作用,以期为肺癌临床治疗方案的选择、用药顺序提供新的理论依据。方法选用西妥昔单抗和LY294002,分析单药及不同浓度和联合作用方式对A549细胞增殖的影响;计算IC50值和CI值,分析药物联合作用的效应是协同、相加抑或拮抗。结果单独作用时,西妥昔单抗与LY294002最大抑制率分别为(57.3±6.2)%、(56.2±6.0)%;联合作用时,LY294002→西妥昔单抗序贯给药(CI=0.41)比同步应用(CI=0.73)可增强疗效,其最大抑制率分别为(84.9±7.5)%和(79.0±7.3)%。结论两药对A549细胞增殖均具有抑制作用,LY294002→西妥昔单抗序贯联合应用对A549细胞的增殖抑制率最高。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[（42.50±2.63）%,P...     

Apoptosis inducing effects of arsenic trioxide on human bladder cancer cell line BIU-87

Objective　To explore the apoptosis inducing effects of arsenic trioxide (As2O3) on human bladder cancer cells and elucidate possible mechanisms. Methods　After treatment with As2O3, the growth inhibition rates of human bladder cancer cell line BIU-87 were studied by MTT and cell counts methods. DNA synthesis rates were detected by 3　H-TdR assay. The morphological changes of cancer cells were observed by light and electronic microscopy and cell apoptosis rates were detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). bcl-2 gene expression of BIU-87 cells was observed by strept avidin-biotin complex (SABC) immunohistochemical method. Results　As2O3 could effectively inhibit the growth of BIU-87 (P&lt;0.05), which were time and concentration dependent. The inhibition rate of 4.0?μmol/L As2O3 for DNA synthesis of cancer cells was 55.64% (P&lt;0.01). Partial cancer cells presented the characteristic morphological changes of apoptosis which depended on the time of exposure to drug (P&lt;0.05). bcl-2 expression of BIU-87 cells was decreased significantly (P&lt;0.05). Conclusion　As2O3 can significantly induce apoptosis in bladder cancer cells by down-regulating the expression of the bcl-2 gene and inhibiting DNA synthesis. This provides a potentially effective method for prevention and cure of human bladder cancer.     

LY294002抑制PI3K-Akt信号通路对人甲状腺癌细胞的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮(LY294002)对人甲状腺未分化癌HTH-15细胞中PI3K-丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞生长、细胞凋亡及细胞侵袭性的影响.方法:HTH-15细胞用不同浓度(O～100 μmol/L)LY294002处...     

抑制P13K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的 观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制. 方法 通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)埘SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01). 结论 抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bel-2的表达有关.     

Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor, LY294002, induced senescence-like changes in human diploid fibroblasts

Objective To reveal the role of Phosphatidylinositol 3-kinases (PI3Ks) in regulating human diploid fibroblast (2BS cell) senescence as well as the possible mechanisms involved.Methods Using a PI3Ks specific inhibitor, LY294002, cell cycle, apoptosis, proliferation, senescence association β-galactosidase staining as well as senescence association CKIs, p16INK4 and p21Cip1 protein expressions were all measured in the low passages of 2BS cells.Results Both 25 μmol/L and 50 μmol/L concentrations of LY294002 could cause a significant decrease in cells entering into S phase, and this cell cycle of G1 phase arrest was dose-dependent. Meanwhile, LY294002 contributed to apoptosis, caused 2BS cell growth arrest, and activated senescence association β-galactosidase (P&lt;0.05). In addition, LY294002 could induce time-course expressions of p16INK4 and p21Cip1 in 2BS cell lines. Conclusions PI3Ks inhibitor LY294002 could induce senescence-like changes in 2BS cell lines. Two senescence associated CKIs, p16INK4 and p21Cip1, might be involved in this senescence phenotype proceeding in 2BS cell lines.