EZH2对人喉鳞状细胞癌HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在人喉鳞状细胞癌组织和HEP-2、SCC10A细胞中的表达及其对人喉鳞状细胞癌细胞HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集宣城中心医院30例喉鳞状细胞癌和10例癌旁正常喉黏膜组织标本,qRT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织以及喉鳞状细胞癌细胞HEP-2、SCC10A中EZH2的表达。采用Lipofectamine2000将EZH2 shRNA质粒转染至HEP-2细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测EZH2 shRNA的转染效率,并通过Western blot检测EZH2下游相关信号分子的表达水平。CCK8实验检测HEP-2细胞的增殖,划痕实验和 Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力。运用裸鼠体内成瘤实验检测EZH2对HEP-2细胞体内成瘤能力的影响。结果：EZH2在喉鳞状细胞癌组织及细胞中显著高表达(P＜0.01)。EZH2 shRNA质粒转染后可抑制细胞的增殖能力,细胞的迁移和侵袭也均受到明显抑制。裸鼠体内成瘤实验结果显示,EZH2 shRNA组的HEP-2细胞肿瘤形成能力明显减弱。结论：EZH2在喉鳞状细胞癌组织和细胞中高表达;EZH2 shRNA能够在体外抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的增殖、迁移和侵袭,并抑制RAF1-ERK信号通路的活化;EZH2能够在体内抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的成瘤能力。     

熊果酸对喉癌 Hep-2细胞侵袭的影响及机制研究

目的：探讨熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞侵袭能力的影响及机制。方法不同浓度熊果酸处理人喉癌 Hep‐2细胞不同时间后,采用 M TT 法检测细胞的增殖活性,Boyden chamber 检测细胞的侵袭能力,Western blot 检测周期相关基因 NF‐κB蛋白表达的变化。明胶酶谱检测细胞培养上清液基质金属蛋白酶（MM P）‐9和 MMP‐2活性的变化。结果熊果酸对人喉癌Hep‐2细胞的生长具有明显的增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性（P＜0．01）。 Boyden chamber 结果显示以熊果酸处理 Hep‐2细胞后,侵袭能力呈浓度依赖性下降（P ＜0．01）。 Western blot 结果显示熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞 NF‐κB蛋白表达呈浓度依赖性下调（P＜0．01）。明胶酶谱结果显示熊果酸对人喉癌 Hep‐2细胞 MM P‐9和 MMP‐2活性呈浓度依赖性下调（P＜0．01）。结论熊果酸通过降低 MMP‐9和 MMP‐2活性及 NF‐κB 蛋白表达来抑制人喉癌 Hep‐2细胞的增殖和侵袭。     

DRB对人喉癌Hep-2细胞系增殖、凋亡及侵袭作用的研究

目的探讨5，6二氯-1-β-D-呋喃核糖苯并咪唑（DRB）对人喉癌Hep-2细胞系增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人喉癌Hep-2细胞，加入不同浓度的DRB，采用MTT法检测Hep-2细胞的增殖情况，流式细胞术观察Hep-2细胞凋亡率的变化，体外侵袭实验观察Hep-2细胞侵袭力的改变。结果DRB可抑制Hep-2细胞的增殖，呈时间和剂量效应关系。流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰，10、20、40、80μmol／LDRB与Hep-2细胞共孵育24h后的细胞凋亡率分别为8．51％、11．26％、14．99％、25．31％。体外侵袭实验显示，DRB在10μmol／1，时即能抑制Hep-2细胞的体外侵袭力，随浓度提高，抑制作用增强。结论DRB能抑制Hep-2细胞增殖，降低细胞侵袭性，诱导细胞凋亡。     

靶向下调Cav3.1诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡

目的 探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法检测30例喉癌患者中Cav3.1在喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况;siRNA瞬转技术构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用Western blot检测各组细胞BAX、Cleaved-caspase-3、BCL-2的表达情况,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的情况,Annexin V-PI染色技术检测喉癌Hep-2细胞凋亡的情况.结果 相对癌旁组织,Cav3.1在喉癌组织中高表达(P＜0.05);下调组Cav3.1在喉癌细胞中mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05);下调Cav3.1可抑制喉癌细胞的增殖(P＜0.05),促进喉癌细胞的凋亡(P＜0.05),Western blot验证下调Cav3.1,BAX、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,BCL-2表达明显下降(P＜0.05).结论 Cav3.1在喉癌组织和喉癌细胞系中高表达,下调Cav3.1抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞凋亡.     

丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响及机制研究

目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养Hep-2细胞,细胞分为3个组:对照组、实验分为50、100μmol/L组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测不同浓度PDTC对Hep-2细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测PDTC对Hep-2细胞凋亡的影响;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测PDTC对Hep-2细胞Bcl-xL和XIAP的mRNA表达的影响;蛋白印迹(Western-blot法)检测p-IκB、Bcl-xL及XIAP的蛋白表达及活化。结果 PDTC对50μmol/L组和100μmol/L组的Hep-2细胞生长抑制与对照组比较,差异有统计学意义,PDTC的浓度越大,抑制效果越明显(P<0.05)。Hep-2细胞经PDTC处理24h后,50μmol/L组和100μmol/L组细胞凋亡率分别为(25.1±2.18)%和(35.4±2.62)%,与对照组(3.12±1.07)%比较,差异有统计学意义。PDTC能导致Hep-2细胞生长抑制和凋亡增加且呈量效关系。结论 PDTC能够通过阻断Hep-2细胞NF-κB的活化,降低与抗凋亡相关基因Bcl-xL及XIAP的表达,抑制Hep-2细胞增殖并促进凋亡。     

超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的 观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用.方法 金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24 h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72 h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况.结果 ①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P＜0.01).②抑制作用呈现时间的依赖性.③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1 μg/ml、72 h培养时抑制率最高,达82.83%.结论 超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长.     

Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因Kail对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及生长周期的影响.方法:本研究以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kail基因的重组腺病毒(rAd-Kail)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kail转染人喉癌Hep-2细胞株,利用RT-PCR技术对转染效果进行检测,以未转染Kail的喉癌细胞株为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术测定转染组细胞株的增殖抑制率和细胞周期.结果:rAd-Kail经扩增、纯化后,滴度可达1010 PFU/ml,当病毒量为30MOI时,对Hep-2细胞的转染率达93%以上.MTT实验显示转染Kail的Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于对照组(P＜0.01),抑制率可达29%.流式细胞术显示与对照组比较,转染组G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,差异有显著性(P＜0.05 o结论:通过重组腺病毒介导,成功地将Kail基因转入喉癌Hep-2细胞株,Kail对喉癌细胞体外增殖能力具有抑制作用,其机制可能是将Hep-2细胞生长周期阻滞于G0/G1期,提示:Kail抑癌基因可能通过阻滞肿瘤细胞生长周期实现抑制肿瘤细胞增殖.     

Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响

目的探讨肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响。方法以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kai1基因的重组腺病毒(rAd-Kai1)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kai1转染人喉癌Hep-2细胞株,以转染空病毒载体及未转染Kai1的喉癌细胞株为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Kai1对细胞增殖能力的影响,用RT-PCR技术对转染后的细胞进行检测。结果rAd-Kai1经扩增、纯化后,滴度可达6×1010PFU/ml,当病毒量为30 MOI时,Hep-2细胞的转染率可达90%以上。MTT实验显示转染空腺病毒组与未转染组比较,Hep-2细胞株体外增殖能力无统计学差异,转染Kai1组Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于未转染组(P<0.05),抑制率可达29%。结论肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对喉癌细胞株体外增殖能力具有抑制作用。     

MiR-155对喉鳞癌细胞株Hep-2细胞增殖与侵袭能力的影响

目的探讨miR-155对喉鳞癌Hep-2细胞增殖与侵袭的影响。方法应用LipofectamineTM2000将miR-155inhibitor和miR-155阴性对照(NC)转入Hep-2细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Hoechst染色检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测信号传导与转录激活因子3(STAT3)和细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)的表达水平。结果与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor能显著抑制肿瘤细胞增殖能力,提高肿瘤细胞凋亡率,降低细胞侵袭能力,并上调SOCS1,下调STAT3表达水平,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-155可能通过SOCS1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞增殖,抑制凋亡,并能提高细胞的侵袭能力,进而发挥致癌作用。     

Effect of DRB on the Biological Characteristics of Human Laryngeal Carcinoma Hep-2 Cell Line

In order to study the effect of 5, 6-Dichloro-1-β-D-ribofuranosyl-benzimidazole (DRB) on the biological characteristics of human laryngeal carcinoma Hep-2 cell line in vitro, Hep-2 cells cultured in vitro were treated with different concentrations of DRB. Changes in cell proliferation, apoptotic rate and invasiveness were detected by MTT assay, flow cytometry (FCM) and matrigel in vitro invasion assay, respectively. It was found that DRB inhibited the proliferation of Hep-2 cells in a dose- and time-dependent manner. After being treated with 0, 10, 20, 40, 80 μmmol/L DRB for 24 h, the apoptotic rate in Hep-2 cells was (0.68±0.19)%, (1.95±0.12)%, (8.51±0.26)%, (11.26±0.17)% and (14.99±0.32)%, respectively. The matrigel in vitro invasion assay revealed that DRB began to inhibit the invasion of Hep-2 cells at the concentration of 5 μmmol/L, and with the increase of DRB concen-tration, the inhibitory effect was enhanced. It was suggested that DRB could influence the essential biological characteristics of Hep-2 cells, inhibit Hep-2 cells proliferation, reduce invasive ability and induce apoptosis of Hep-2 cells.     

2-脱氧葡萄糖对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖 迁移和侵袭的影响

目的 探讨糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-Deoxy-D-glucose,2-DG）对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 用不同浓度的2-DG（0, 05, 1, 2, 4, 8, 16, 32 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用MTS试剂盒测定细胞的增殖;用Transwell实验检测不同浓度2-DG（0, 0.5, 1, 2 mM）对MCF7/ErbB2细胞的迁移和侵袭的影响;用不同浓度2 DG（0, 0.5, 1, 2 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,并计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量;用1 mM 2 DG处理MCF7/ErbB2细胞0、4、8、12、24h后,用Western blot检测己糖激酶II（hexokinase II,HKII）蛋白表达水平。结果 与2-DG未处理组比较,2-DG（0.5~32 mM）能抑制MCF7/ ErbB2细胞的增殖;2-DG（0.5, 1, 2 mM）能显著抑制MCF7/ ErbB2细胞的迁移和侵袭（P＜0.001）,同时显著降低葡萄糖摄取量和乳酸生成量（P＜0.001）,而且上述抑制作用均表现出对2-DG剂量的依赖性;1 mM 2-DG 显著下调MCF7/ ErbB2细胞中HKII的蛋白水平。结论 2-DG通过下调HKII蛋白表达降低糖酵解水平,从而抑制乳腺癌MCF7/ ErbB2细胞的增殖、迁移和侵袭。     

血卟啉衍生物光动力学疗法体外杀伤人喉癌细胞株Hep-2的实验研究

目的 :探讨使用血卟啉衍生物对喉癌细胞进行光动力学治疗的有效照光时间和有效药物使用量。方法 :使用波长 6 30nm的激光照射同血卟啉衍生物共同培养的喉癌Hep - 2细胞株 ,用MTT法评价不同的用药浓度(0 μg、5 μg、10 μg、5 0 μg、10 0 μg、2 0 0 μg ml)和不同的光照能量密度 (10J cm2 、2 0J cm2 、30J cm2 、4 0J cm2 、5 0J cm2 )细胞毒的作用。结果 :随着药物浓度的增加细胞的死亡率增加 ,但是在 5 0 μg ml以上增加不明显。随着光密度的增加细胞的死亡率增加 ,在 4 0J cm2 以后死亡率没有明显的增加。结论 :血卟啉衍生物在 6 30nm的激光照射下能够有效的在体外杀伤肿瘤细胞 ,其杀伤的最佳效果与用药浓度和照射能量有关     

miRNA-29c在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响

目的 观察miRNA-29c 在喉癌组织和喉癌Hep-2 细胞株中的表达情况,研究其与肿瘤临床分期、淋巴转移及预后等临床病理参数的关系,并探讨miRNA-29c 对喉癌Hep-2 细胞增殖、侵袭的影响。 方法 选取2006 年1 月～2016 年12 月在我院确诊的86 例喉癌患者的蜡块标本,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测喉癌组织和癌旁正常喉黏膜上皮组织中miRNA-29c 的表达,并分析其与临床病理学特征的关系;通过Q-RT-PCR 检测转染后每组细胞中miRNA-29c 的表达;CCK-8 检测细胞增殖能力变化情况;Transwell 实验检测跨膜细胞数量的变化。 结果miRNA-29c 在喉癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达量与不同临床分型、TNM分期、淋巴转移密切相关（P<0.05）;转染miRNA-29c 模拟物组细胞中的miRNA-29c 表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）,并可抑制喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭力（P<0.01）。 结论 在喉癌中,miRNA-29c 是一个抑制性miRNA,miRNA-29c 低表达可能是影响喉癌预后的重要因素;过表达miRNA-29c 可显著降低喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭能力,miRNA 表达水平的下调可能参与了喉癌的发生发展及侵袭转移过程。     

靛玉红对喉癌Hep-2细胞侵袭能力的影响及机制

目的探讨靛玉红甲肟（Indirubin-3＇-monoxime,IRO）对人喉癌Hep-2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响。Boyden chamber实验计算各组穿膜的细胞数以比较靛玉红甲肟对细胞侵袭能力的变化。明胶酶谱检测不同浓度靛玉红甲肟处理喉癌Hep-2细胞后细胞MMP-9和MMP-2活性的变化。结果 MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性（P〈0.01）。Boydenchamber体外迁移和侵袭实验结果显示：靛玉红甲肟可以显著抑制人喉癌Hep-2细胞的侵袭能力（P〈0.05）。明胶酶谱检测发现以靛玉红甲肟处理24h后人喉癌Hep-2细胞MMP-9和MMP-2活性明显降低,不同浓度组间存在显著性差异。结论靛玉红甲肟具有抑制人喉癌Hep-2细胞株增殖和侵袭的作用,其作用机制与显著抑制MMP-9和MMP-2活性有关。     

bax基因转染对人喉癌细胞恶性表型和细胞周期的影响

1　临床资料　人喉癌细胞株 Hep- 2由本校口腔医学院中心实验室提供 ,p MDNA3- Bax质粒由彭玮丹博士惠赠 .脂质体L ipofectamine,RPMI 16 4 0为美国 Gibco公司产品 ,兔抗人Bax多克隆抗体由中山公司分装 ,羊抗兔 Ig G多克隆抗体为军科院产品 .实验中所用其他分子克隆试剂均为华美公司出品 .小牛血清为杭州四季青公司产品 .用含 10 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 4 0培养液 ,喉癌细胞株置入 37℃ ,5 0m L· L- 1 CO2 孵箱中培养 .细胞为贴壁型 ,不规则上皮样 [1 ] .实验中所用细胞均为对数生长期细胞 ,常规转化扩增 ,用碱裂解法提…