抗人肿瘤细胞核单克隆抗体的制备及鉴定

抗人肿瘤细胞核单克隆抗体的制备及鉴定万文徽，韩燕，张宏，魏淑敏，张梅敏，董志伟北京市肿瘤防治研究所（北京１０００３４）以抗肿瘤细胞膜抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）为载体的导向治疗虽然在动物实验治疗中取得相当进展，但在人实体瘤的临床研究中，其效用却是颇...     

抗人骨唾液蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高亲和力、高特异性的抗人骨唾液蛋白（BSP）单克隆抗体（mAb）,并对其生物学特性进行鉴定,为BSP作为乳腺癌骨转移临床诊断靶点的研究奠定基础。方法重组BSP蛋白免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与Sp2／0细胞融合,经筛选建立可稳定分泌抗BSPmAb细胞株,制备腹腔积液,ProteinG纯化。ELISA检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定mAb的亚型。应用Western blotting检测mAb的特异性,进一步利用纯化的mAb经免疫组织化学法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中BSP的表达情况。结果获得9株抗BSPmAb细胞株,选择其中2株（D001和D002）进一步鉴定,其上清效价分别为1：5120和1：10240,腹腔积液效价分别为1：25600和1：51200。2株抗体亚型均为IgG1型,轻链均为K型。Western blotting结果均在预期位置出现阳性条带。利用此2株细胞株所得抗体均可在乳腺癌细胞MDA-MB-231中检测到BSP的表达。结论成功制备能特异性识别BSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能以及对BSP作为乳腺癌骨转移的标志物进行临床评价奠定基础。     

人源性抗肝癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的建立产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤.方法用IL-2和美洲商陆(PWM)体外刺激肝癌病人外周血淋巴细胞,再与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,待杂交瘤生长进行筛选、克隆化及特性分析.结果建立了3株产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤-AF3,CB7、CH1.三种单抗均识别肝癌细胞表面抗原,并具有显著的补体依赖的细胞毒活性.其中AF3的效价最高.结论通过人-鼠杂交瘤技术获得了产生人源性抗肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系.抗体效价高,是一种较理想的单克隆抗体.     

抗人微管不稳定蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备人微管不稳定蛋白（Stathmin）的单克隆抗体,检测Stathmin蛋白在真核细胞中的表达,为探讨Stathmin 生物学功能奠定基础。方法利用重组Stathmin蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗Stathmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫组织化学实验等方法分别对其效价和特异性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗Stathmin的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。两株单克隆抗体通过免疫组织化学实验和Western blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的Stathmin蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗Stathmin蛋白的单克隆抗体,为进一步研究Stathmin的生物学功能及其与肿瘤的关系创造了条件。     

抗p16单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗Ｐ１６单克隆工进行鉴定。方法：以Ｐ１６合成肽为抗原免疫纯系小鼠。利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并利用亲和层析等法纯化抗体。通过酶免疫测定及免疫印迹等法对单克隆抗体进行分析及鉴定,并通过免疫组化方法与进我克隆抗体进行比较。结果：获得４株稳定分泌抗Ｐ１６单克隆抗体杂交瘤株,与进口多克隆坑体比较,检测阳性及阴性符合率达１００％,但使用单克隆抗体时,组织切片不需进行抗原修复,染色效果稳定。结论     

抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480 bp的原核表达载体pQE30-ANXⅠ,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni-NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白Ⅰ作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体。用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ⅠmAb的杂交瘤细胞,分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgG1亚型,轻链均为κ链,亲和力为(2．3～3．03)×10~8 L/mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs,为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。     

抗人乳腺癌单克隆抗体BG6的制备与鉴定

用乳腺癌患者转移淋巴结单细胞悬液对BALB/C小鼠进行初次免疫,3周后改用人乳腺癌细胞系MCF-7再次免疫。末次免疫后3天取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。经筛选和5次克隆化后,得到一株分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤BG6。间接免疫过氧化物酶染色显示31例乳腺癌原发灶和转移淋巴结均为BG6阳性着染,而乳腺良性增生、非乳腺来源肿瘤以及正常组织则为阴性或弱阳性着染。初步证实单克隆抗体BG6对乳腺癌具有一定的特异性,因而在乳腺癌的免疫病理诊断中可能颇具意义。     

抗人双特异性蛋白磷酸化酶18单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高亲和力、高特异性的抗人双特异性磷酸化酶18（Dusp18）单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定,为Dusp18功能的研究奠定基础。方法重组Dusp18免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,经筛选建立可稳定分泌抗Dusp18的单抗细胞株,制备腹腔积液,ProteinG纯化所得腹腔积液,ELISA及Westernblotting检测抗体的效价和亲和力,用亚型鉴定试纸条鉴定单克隆抗体的亚型。应用免疫组织化学检测Dusp18在肝癌组织中的表达情况。结果获得两株（F003和F004）单抗,上清效价分别为1：5120和1：10240,腹腔积液效价分别为1：25600和1：51200,Westernblotting结果均在预期位置出现阳性条带。利用两株抗体均可在肝癌组织中检测到Dusp18的表达。两株抗体亚型均为IgG1型,轻链均为k型。结论成功制备能特异性识别Dusp18的单克隆抗体,为进一步研究Dusp1的生物学功能,揭示其与肿瘤发生、发展之间的关系奠定了基础。     

抗人纤维连接蛋白(FN)单克隆抗体(McAb)的制备与应用

FX是存在于多种细胞表面和细胞外液中的高分子糖蛋白.与细胞的许多生物活性有关。近年来发现血浆FN含量对多种疾病的诊治和预后有重要意义。我们用连续亲和层析法自人血浆中提取纯化FN,用以免疫BALB/C小鼠.用细胞融合技术建立了分泌抗人FN McAb的杂交瘤细胞株;并制备出高效价的抗     

抗人结肠癌单克隆抗体的制备及应用的研究

本研究利用手术中取得的新鲜结肠癌组织免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。制得一株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系。经过１８０天连续培养，单克隆抗体ＭＣ６分泌稳定，选择性强、效价高。     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗白细胞介素24（Interleukin 24,IL-24）的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法：应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果：获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论：成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

抗镰刀菌T_2毒素单克隆抗体的制备及鉴定

抗镰刀菌Ｔ_２毒素单克隆抗体的制备及鉴定曲平，夏求洁，孙宗棠用镰刀菌Ｔ２毒素牛清蛋白复合物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，加强免疫前取少量尾静脉血，用３Ｈ标记的镰刀菌毒素Ｔ２藉放射免疫测定法测定抗体水平。然后选择免疫反应性强的小鼠进行加强免疫。加强后第４天按常?..     

抗人乳腺癌单克隆抗体MD_5的制备

用不同乳腺癌细胞系475A、231和乳癌患者的原发瘤组织制备的单细胞悬液免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0融合,融合率为50％。获得3株与乳腺癌细胞系有反应的杂交瘤,择其1株培养上清与免疫原呈强阳性反应而与混合淋巴     

抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定

Objective:To prepare and identify monoclonal antibodies(McAbs)against the capsid proteins of adenovirus vector.Methods:BALB/c mice were immunized with a mixture of the purified adenovirus vector(Adv)and Al(OH)3.McAbs were produced using cell fusion technique in a conventional way.The sensitivity and specificity of monoclonal antibodies was identified by indirect enzyme linked immunosorbent assay(ELISA),immunocytochemical staining and Western blotting. Results:Six strains of hybridoma cells(A4H11,A8C7,F1H5,G1D2,G4E3 and H2G8)that can stably secrete the IgG1 McAb against Adv were obtained.After 3 months subculture and low concentration of serum adapting culture,six strains retained their stability to secrete McAb.The ascites titers were between 1:106 and 1:108.Western blot analysis demonstrated that all the McAbs reacted with one protein(about 114 kDa)which is present in wild type 3 adenovirus(wtAd3),wild type 5 adenovirus (wtAd5),wild type 7 adenovirus(wtAd7)and adenovirus vector.Conclusion:Successfully prepared six strains of hybridoma cell secreted monoclonal antibodies against the hexon proteins of adenovirus vector,and provided the substantial foundation of preclinical research of adenovirus vectors.     

抗KDR3单克隆抗体的制备和生物活性的鉴定

目的：制备抗KDR3单克隆抗体，研究其阻断VEGF受体的作用。方法：将抗KDR3单克隆抗体腹水，采用ELISA酶免疫分析方法．测定其效价，提取ECV304细胞膜蛋白用Western blot方法进行识别抗原的鉴定，并测定抗KDR3单克隆抗体的活性。结果：获得一株稳定分泌抗KDR3的杂交瘤细胞株，所产生抗体可阻断VEGF对人脐静脉内皮细胞系ECV304的刺激增生作用。结论：抗KDR中和抗体IMC-ICI和抗KDR3单克隆抗体同样对ECV304细胞都表现出对外源性VEGF有明显抑制作用，而且对内源性VEGF也有明显抑制作用．抗KDR3单克隆抗体在肿瘤治疗的过程中将起一定的作用。     

分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体细胞系的建立

作者应用B淋巴细胞杂交瘤技术,以ELISA筛选阳性克隆,获得了分泌抗人的hCG、敏感性、特异性与单抗产量均较好的杂交瘤细胞株。现小结如下: 1:应用大剂量和多次加强免疫注射的方法,明显地提高了杂交瘤阳性克隆的百分率(特异性效率)。在本组检测的227孔中,阳性率达78.4％阳性标准:OD值>阴性对照的算术平均值X+3标准差(SD),本组X+3SD=0.28。 2、对重复检测强阳性的三个杂交瘤细胞株作连续的克隆选择培养,系统地观察其演化规律,其中二个细胞株分别在第三、第四次克隆选择时转阴,而杂交瘤细胞系D_8,在连续8次克隆选择,培养3个月以上仍保持强阳性。培养上清的滴度为1:512—2048,癌性腹水滴度1:1.25×10_6—3.12×10_7。 3、核型研究表明,亲本骨髓细胞系NS—1的染色体众数为52,具有2—3条标记染色体,杂交瘤细胞株D_8的染色体众数为98,并具有NS—1的标记染色体。这提示,杂交瘤细胞株D_8是NS—1细胞与致敏脾细胞间融合细胞的后代。     

自制抗人雌激素受体单克隆抗体的鉴定及临床应用研究

目的：对自制抗人雌激素受体Ｄ段合成肽（ｈＥＲＤ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹特异性分析,显示自制单抗与野生型ＥＲ有特异性反应。方法：对５１例乳腺癌组织石蜡切片或冰冻切片进行免疫组化（ＩＨＣ）检测,并与葡聚糖包裹活性炭吸附法（ＤＣＣ）进行比较,符合率９２％（４７／５１）。间接荧光免疫反应检测自制抗ＥＲ单抗对ＭＣＦ－７培养细胞的荧光标记为阳性,以已知ＥＲ检测值的三个不同石蜡组织为     

抗人小细胞肺癌独特型单克隆抗体的制备

抗人小细胞肺癌独特型单克隆抗体的制备杨瑶琴胡晶莹莫忠根张中华李斯德作者单位：上海市肿瘤研究所免疫及细胞生物学研究室（上海２０００３２）关键词抗体，单克隆肺肿瘤癌，小细胞抗独特型抗体的应用是近年来肿瘤免疫治疗的一种新方法［１］，抗肿瘤特异性抗体（Ａｂ１...     

抗精胺单克隆抗体的制备及特性

多胺(polyamine)是一个胺类家族的总称。其主要成员有腐胺(putrescine,简称PUT),精脒(spermidine,简称SPD)和精胺(Spermine,简称SPM),它们都是一类直链小分子有机碱,参与DNA、RNA和蛋白质合成的调控,影响其结构与功能。1971年,Russell等首次发现,肿瘤病人或其它组织增生患者的尿液中多胺水平升高,此后有文献相继报导:癌症病人的血清、尿液及体液中各类多胺水平均升高,近年来开展了多胺作为恶性肿瘤诊断指标的研究。