公共场所相关土壤样品中嗜肺军团菌的调查

目的采用巢式PCR和荧光定量PCR方法检测公共场所相关土壤样品中嗜肺军团菌的污染状况。方法于2012年8—10月,在我国南北方2个城市共选取3种类型的公共场所16家,采集空调风管积尘、场所内花卉土和场所周边景观土;同时选取3个居民区,采集小区内的浅层地面土作为环境背景土;分别应用巢式PCR和荧光定量PCR方法检测样品中的嗜肺军团菌。结果公共场所空调积尘、场所内花卉土和周边景观土嗜肺军团菌巢式PCR的阳性检出率分别为45.8%(11/24),34.5%(10/29)和44.4%(4/9),荧光定量PCR测定嗜肺军团菌的浓度水平为1.1×103~8.1×105 copies/g。结论通过本次调查,公共场所空调积尘、场所内花卉土和周边景观土存在嗜肺军团菌污染。     

空调风管内壁积尘中的嗜肺军团菌巢式PCR检测研究

目的应用巢式PCR方法检测集中空调风管内壁积尘中嗜肺军团菌的污染情况。方法于2009年8月随机抽取上海市4个城区集中空调冷却水嗜肺军团菌培养法阳性的公共场所,采集集中空调风管内壁积尘。巢式PCR方法扩增嗜肺军团菌种Mip基因,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果共采集空调风管内壁积尘40份,嗜肺军团菌阳性样品11份,阳性率为27.5%(11/40)。4个城区风管内壁积尘中嗜肺军团菌阳性率的差异没有统计学意义(χ2=7.446,P=0.064)。当冷却塔与新风口直线距离处于0～4m范围内,风管内壁积尘中嗜肺军团菌的阳性率随距离增加有升高趋势。结论巢式PCR方法检测积尘中嗜肺军团菌特异性较好,集中空调风管内壁积尘中存在嗜肺军团菌污染。     

空气中嗜肺军团菌的巢式PCR和荧光定量PCR测定方法比较

目的评价巢式PCR和荧光定量PCR方法在嗜肺军团菌气溶胶检测中的应用。方法于2012年8—10月在北京、南京、苏州和深圳四城市选取38家公共场所,使用带有虚拟浓缩器的Bio-sampler生物冲击式采样器采集气溶胶样品,分别应用巢式PCR和荧光定量PCR法检测样品中的嗜肺军团菌。结果共采集气溶胶样品165份。巢式PCR法测定嗜肺军团菌的阳性率为8.5%(14/165),荧光定量PCR法测定嗜肺军团菌的阳性率为26.1%(43/165),后者高于前者,差异有统计学意义(P0.05)。结论采用荧光定量PCR法测定空气中嗜肺军团菌的灵敏度优于巢式PCR法。     

环境水中嗜肺军团菌的分离培养法和巢式PCR法比较

目的应用传统分离培养法和巢式PCR法检测环境水中嗜肺军团菌污染状况,并比较两种方法的检测效果。方法于2012年7-10月,采集北京市丰台区商场和超市、宾馆和饭店、综合性医院三类场所的中央空调冷却水、自来水、淋浴水、景观水,分别使用培养法及巢式PCR法检测嗜肺军团菌。结果共检测187件水样,传统分离培养法对嗜肺军团菌的检出率为2.67%(5/187),低于巢式PCR法[19.79%(37/187)],差异有统计学意义(χ~2=27.465,P0.01)。结论北京丰台区多种环境水体存在嗜肺军团菌污染;巢式PCR法对环境水中嗜肺军团菌的灵敏度优于传统分离培养法。     

半套式PCR检测军团菌方法的建立及应用

目的：建立检测军团菌的分子生物学方法。方法：采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域和嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子（mip）基因编码区域进行扩增，同时采用半套式PCR对常规PCR的扩增结果进行确证。结果：采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域进行扩增，5种军团菌（包括3种嗜肺军团菌）扩增产物均可见654bp的特异性扩增带，非军团菌菌株PCR结果为阴性，采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,扩增产物均可见430bp扩增带，同时采用常规PCR对嗜肺军团菌mip基因 编码区域进行扩增，3种嗜肺军团菌扩增产物均可见649bp扩增带，非嗜肺 军团菌菌株均为阴性，采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证，3种嗜肺军团菌扩增产物均可见399bp扩增带。敏感性为10CFU／ml。并且应用此方法成功检测环境水样中分离的疑似军团菌菌株。结论：半套式PCR经济、简便、快速、敏感、特异，为军团菌的早期检测、环境监测、控制爆发流行提供了有效手段。     

环境水中嗜肺军团菌分离培养与巢式PCR检测研究

] 目的应用分离培养法与巢式聚合酶链反应法(PCR)检测深圳环境水中军团菌最新污染状况.方法 于2012年9月-2012年11月采集商场、宾馆和综合性医院三类场所的中央空调冷却水、淋浴水、自来水、景观水,分别用传统分离培养法与巢式聚合酶链反应法(PCR)检测嗜肺军团菌。结果本次共检测环境水样171份,其中传统分离培养法检出64份嗜肺军团菌,巢式聚合酶链反应法(PCR)检出130份嗜肺军团菌,水样的阳性率分别为37.4%和76%;结论 深圳多种水源存在军团菌污染;巢式聚合酶链反应法(PCR)检出率高于传统分离培养法。     

南京市公共场所嗜肺军团菌污染状况调查

目的了解南京市公共场所的嗜肺军团菌污染状况,为制定其控制措施提供依据。方法选取13家公共场所采集气溶胶、土壤和水样本,采用巢式PCR检测嗜肺军团菌。结果南京市公共场所嗜肺军团菌阳性检出率16.10%,其中空调冷却水为85.71%,花卉土为21.54%,淋浴水为20.00%,景观水旁土为12.50%,自来水为4.00%,风管积尘为1.56%,气溶胶为1.49%。结论南京市公共场所存在较严重的嗜肺军团菌污染,须针对各类环境介质的特点选择适宜方法除菌抑菌,以降低其潜在危害。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测

目的 建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因.方法 嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给.利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等.结果 该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现.检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会.结论 TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测.     

多重PCR快速检测空调冷却塔水中军团菌

目的 传统的方法分离培养军团菌，时间长，价格贵，培养较困难，本文建立多重PCR方法，快速检测空调冷却塔水中军团菌属和嗜肺军团菌种。方法 利用军团菌属保守基因片段16SrRNA和嗜肺军团型菌巨噬细胞感染增强因子（mip）基因序列的特异性引物，对空调冷却塔水样中分离的疑似军团菌株进行特异性扩增，并且为了增强敏感性，运用递减温度PCR扩增。结果：PCR扩增的阳性结果与生化培养和血清学鉴定为军团菌的菌株结果—致。结论：与传统的分离培养方法相比，多重PCR方法检测军团菌，快速敏感，成本低，具有较好的特异性。     

传统细菌培养法与荧光PCR法分离公共场所嗜肺军团菌结果比较

目的：对公共场所环境样本（水、土壤、气溶胶）进行嗜肺军团菌监测,掌握南京市公共场所中军团菌的污染情况和菌型分布。方法：对12家商场、医院中央空调系统采集水样（冷却水、景观水、淋浴水、自来水）,土壤类样品（背景土、花卉土、风管积尘、景观土）,采用传统细菌培养法及荧光PCR法进行嗜肺军团菌的分离鉴定。结果：12家单位共采样234份（水样88份、土壤146份）,传统细菌培养法检出嗜肺军团菌9份（主要类型为Lp1型）,检出率为3.85%;而实时荧光PCR法检出47份阳性（主要类型为Lp1型）,检出率为20.08%。两者检出阳性率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：南京市公共场所存在嗜肺军团菌污染,荧光PCR法总检出率明显高于传统细菌培养法,荧光PCR方法较培养法灵敏性较好。