四倍体菘蓝毛状根培养系统的建立及外界因子对其生长的影响

用发根农杆菌Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ Ｒ１６０１,Ａ４,ＡＴＣＣ１５８３４菌株感染菘蓝Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ,同源四倍体的子叶１０ｄ后,在子叶切口处均能陆续长出毛状根。转化根在不含激素的ＭＳ固体培养基上快速生长并表现出典型的毛根性状,经冠瘿碱分析证明确已被转化。建立了毛状根培养系统并比较了各种外界因子生长的影响。     

应用发根农杆菌Ri T-DNA建立菘蓝的毛状根优质株系和植株再生系统

目的：建立菘蓝（Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ）的毛状根离体培养系统,并诱导毛状根再生植株。方法：分别用发根农杆菌Ａ４,Ｒ１６０１和ＡＴＣＣ１５８３４三种菌株感染菘蓝的子叶外植体,获得毛状根,并筛选了优质株系;测定了毛状根的生长曲线;在含不同激素的培养基上诱导毛状根再生植株;利用高压纸电泳法对毛状根和再生植株进行Ｔ－ＤＮＡ转化的检测。结果：首次利用发根农杆菌Ａ４,Ｒ１６０１和ＡＴＣＣ１５８３４三种菌株成功地从菘蓝中诱导出毛状根;菘蓝毛状根在含ＢＡ的ＭＳ培养基中成功地诱导出再生植株;经高压纸民泳检测,菘蓝毛状根及其再生植株中均含有甘露三,表明Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＡ已整合进毛状根和再生植株中。结论：菘蓝毛状根离本培养和植株再生系统的建立,为进一步进行药用活性成分的工业化生产和引入外源基因改良性状奠定了基     

高密度脂蛋白的抗内毒素作用

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗内毒素 (LPS)的作用。方法　 (1)用超离心方法分离纯化血浆各脂蛋白 ;(2 )分别给小鼠注射LPS ,HDL +LPS ,HDL +无脂蛋白血浆部分 (LFF ,d >1.2 1g/cm3 ) +LPS后观察各组小鼠的存活时间 ;(3)FITC LPS与人血浆培育后密度梯度离心观察荧光素在人血浆中的分布 ;(4 )FITC LPS、HDL及LFF培育不同时间 (0～ 3h)后密度梯度离心 ,观察不同培育时间HDL中的荧光强度 (FS)。结果　注射HDL +LFF +LPS组小鼠的存活时间 (4 0 .98± 12 .39)h比注射LPS组 (18.4 5± 2 .0 9)h和HDL +LPS组(2 2 .4 8± 12 .81)h小鼠显著性增长 (P <0 .0 1) ,而注射HDL +LPS组小鼠的存活时间与注射LPS组小鼠无显著性差异。FITC LPS在血浆VLDL、LDL层中的含量极低 (2 .77% ) ,主要集中在HDL层中 (6 0 .39% )。FITC LPS在HDL中的含量随培育时间增加而增加 ;而FITC LPS在LFF中的含量随培育时间增加而减少。结论　HDL具有抗内毒素的作用 ,并且HDL是血浆中与内毒素结合的主要组分。LFF参与HDL与LPS的结合过程。     

何首乌毛状根的诱导研究

本文对药用植物何首乌茎段、叶片进行了毛状根的诱导研究.结果 表明,以Murashing＆Skoog(MS)培养基+NAA(乙烯萘乙酸)1.0mg/L,25℃,暗培养条件下能诱导出毛状根.     

四倍体菘蓝转抗虫基因研究Ⅰ.根癌农杆菌介导的转基因菘蓝

目的：将外源半夏凝集素基因（PTA）转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫抗性。方法：构建了以CaMV 35S为启动子，新霉素磷酸转移酶（Npt-Ⅱ）为选择标记，带有半夏凝集素基因PTA的pCAMB I A2200植物双元表达载体，应用根癌农杆菌EHA 105遗传转化四倍体菘蓝。结果：菘 外植体植株再生率达到95％以上，转化率有10％。结论：建立了以6－BA和NAA为主要激素组合的四倍体菘蓝离体分化再生系统和农杆菌介导的转化系统。     

8种中药注射剂体外抗内毒素作用的观察

目的：观察板蓝根、双黄连、清开灵等8种中药注射剂的体外抗内毒素作用。方法：注射剂经稀释后取0．2mL与内毒素0．2mL(1EU/mL）温孵，然后利用鲎试剂定量测定内毒素含量，计算各注射剂对内毒素的清除率，比较不同注射剂的抗内毒素作用。结果：双黄连粉针剂、清开灵注射液、板蓝根注射液、穿琥宁注射液和鱼腥草注射液都有明显的体外抗内毒素作用，其中双黄连、清开灵和板蓝根的抗内毒素作用最强，稀释2500倍仍能够清除70％以上的内毒素；穿琥宁、鱼腥草和鱼金注射液其次；复方大青叶注射液和抗腮腺炎注射液的体外抗内毒素作用较弱。结论：在清热解毒中药中寻找抗内毒素作用的制剂将有一定的发展前景。     

大规模培养的黄芪毛状根急性毒性研究

对黄芪毛状根、野生黄芪和栽培黄芪的急性毒性进行了初步研究，结果表明三者均符合药典规定的毒性要求，可安全药用。     

粟米草毛状根的研究

目的：建立粟米草（Ｍｏｌｌｕｇｏ ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌａ Ｌ．）的毛状根培养系统并研究毛状根的生长特性。方法：分别用发根农杆菌Ｒ１６０１,ＡＴＣＣ １５８３４和Ａ４感染粟米草无菌苗的子叶,获得毛状根,并筛选优质株系;用高压纸电泳法对毛状根进行甘露碱检测;测定其生长曲线;比较不同基本培养液、不同ｐＨ 值对毛状根生长的影响。结果：高压纸电泳结果显示,所获毛状根中均含有甘露碱,表明毛状根中确已转入发根农杆菌的Ｔ－ＤＮＡ;１／２ ＭＳ０培养液ｐＨ ５．４～５．８最适合粟米草毛状根的生长。结论：快速生长的粟米草毛状根在药用活性成分的生产上将具有较大潜力。     

异地栽培大青叶和原栽培品种的抗内毒素作用比较

比较异地栽培后的大青叶和其原栽培品种的抗内毒素作用,结果显示生态环境改变后,大青叶仍能保持其原栽培品种品质;不同居群大青叶在药理活性方面的差异也不因生态环境的趋同而丧失。表明大青叶是一类种质主导型的药材,环境因素对药材品质的形成不起主要作用。     

菘蓝不同栽培居群的等位酶分析

目的：对菘蓝Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ,不同栽培居群进行等位酶分析研究。方法;在全国各地采集菘蓝１３个二倍体栽培居群的种了,异地栽培于上海市崇明岛同一块试验田。以水平切片淀粉凝胶电泳方法,对菘蓝等位酶多态性进行研究,分析了８个酶系统的１５个等位酶位点。结果：等位酶多态位点陌分为１３．３％～３３．３％,每个位点的位基因平均数Ａ为１．１～１．５,预期杂合度Ｈｅ为０．０２７～０．１００     

板蓝根的化学成分研究

研究板蓝根乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇萃取层中的化学成分。方法 采用反复硅胶柱色谱、凝胶柱色谱法进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果 分离鉴定了12个化合物,分别为喜果苷（1）、quinovic acid-3β-O-β-D-glucopyranosyl-(28→1)-β-D-glucopyranosyl ester（2）、quinovic acid-3β-O-β-D-glucopyranosyl（3）、棕榈酸甲酯（4）、水杨酸（5）、远志醇（6）、腺苷（7）、靛玉红（8）、靛蓝（9）、大黄素（10）、β-谷甾醇（11）和β-胡萝卜苷（12）。结论 化合物1、2、3为首次从十字花科植物中分离得到,化合物4为首次从菘蓝属植物中分离得到。     

四倍体板蓝根中的有机酸类成分

目的：考察四倍体菘蓝Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ,根的有机酸类化学成分。方法：应用硅胶柱层析对氯仿、乙酸乙－酯萃取部分中化学成分进行分离纯化,应用理化常数测定和光谱分析技术鉴定结构。结果：分离得到６种有机酸,分别鉴定为：吡啶－３－羧酸（１）,顺丁烯二酸（Ⅱ）,２－羟基－１,４－苯二甲酸（Ⅲ）,苯甲酸（Ⅳ）,水杨酸（Ⅴ）,丁香酸（Ⅵ）。结论：化合物１,２,３为首次从该种植物中分离得到     

不同播期菘蓝的生长及结籽差异性研究

目的研究春播和秋播两种不同播期菘蓝生长的差异、生殖生长特性以及这两种播期下菘蓝的结籽情况,为建立科学的规范化栽培技术提供理论依据。方法菘蓝播种出苗之后,定期进行采样,测定根系与苗系生长变化规律,开花后观察测定菘蓝开花结果情况。结果菘蓝经过春化在春季转暖后迅速抽薹,这一时期株高、冠幅等生物量变化非常明显;两种不同播期的菘蓝生长存在明显差异,春播菘蓝开花前生长明显优于秋播菘蓝,但是开花结果后倒伏严重,长势不如秋播菘蓝。结论两种繁殖方式生产的种子千粒质量、单株平均产量、公顷产量均有差异,但种子的发芽率差异不大,不影响来年生产;春播菘蓝生产的种子质量较秋播的高,但是生长后期要注意防倒伏;秋播菘蓝在秦巴山区和秦岭以南可以很好生长,南方地区两种种子繁殖方式均适宜,而北方地区更适宜于春播繁殖方式。     

中药菘蓝过氧化物同工酶的测定

目的:对菘蓝不同器官的POD同工酶进行分析测定。方法:采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳。结果:菘蓝的POD同工酶酶谱具有一定的器官特异性和稳定性。结论:同工酶变化与生物的生长发育之间具有特异性关系,可为生物生长发育的调控研究提供参考。     

板蓝根化学成分研究

目的 分离鉴定板蓝根中的化学成分。方法 用硅胶、ODS等柱色谱分离纯化，以核磁、质谱、紫外、红外光谱及理化常数鉴定结构。结果 分离鉴定了5个化合物，为新橙皮苷(Ⅰ)、甲酸铵(Ⅱ)、异甘草素(Ⅲ)、甘草素(Ⅳ)和腺苷(Ⅴ)。结论 其中新橙皮苷、甘草素和异甘草素为首次从十字花科中分离得到；甲酸铵为首次从该植物中分离得到。