短发夹RNA沉默S100A4基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响

目的:观察靶向S100A4基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭的抑制作用.方法:构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,经过脂质体介导将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞.应用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和FCM法检测转染后MCF-7细胞的增殖水平和凋亡率变化.转染细胞经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株, 运用Transwell小室法和划痕实验检测其侵袭力和迁移力的变化,裸鼠体内成瘤实验检测体内细胞增殖情况.结果: 经测序鉴定证实成功构建了S100A4-shRNA表达载体.所构建的S100A4-shRNA表达载体转染MCF-7细胞48 h后,能有效抑制S100A4的表达,并且显著降低MCF-7细胞增殖水平,以及诱导细胞进入晚期凋亡.稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但其侵袭力和迁移力明显下降;裸鼠体内成瘤实验也显示实验组裸鼠移植瘤的体积和质量明显小于空白对照组和阴性对照组. 结论:S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力.     

沉默S100P基因抑制肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的:探讨肺癌组织及细胞中S100P基因表达对增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:在GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库和HPA数据库（Human Protein Atlas）得到肺癌数据,分析S100P 基因在不同分型肺癌组织与正常组织中差异表达。使用shRNA -S100P RNA下调肺癌细胞系中S100P基因表达水平;细胞的增殖活性使用MTS比色法检测;细胞周期变化运用流式细胞仪检测;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。RT-qPCR与Western blot分别验证S100P表达及细胞周期、凋亡蛋白表达水平。结果:S100P基因在肺癌组织中表达水平明显高于正常组织(P＜0.01);不同分型的肺癌组织中S100P基因表达存在差异。与对照组相比,下调S100P使A549增殖、迁移和侵袭能力均降低。结论:S100P基因在肺癌中高表达且下调后可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

沉默S100A4基因对人膀胱癌T-24细胞生物学特性的影响

目的:探讨应用siRNA 技术沉默S100A4基因表达后,对人膀胱癌细胞系T-24增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响。方法:设计并合成S100A4 基因特异性的siRNA 序列,转染人膀胱癌细胞系T-24,48h后应用RT-PCR 和Western blot法检测在mRNA 和蛋白水平siRNA 对S100A4的影响,MTT 法检测T-24细胞增殖能力,流式细胞术检测转染S100A4 siRNA 后T-24细胞凋亡率,Transwell 法观察siRNA 抑制S100A4 后对人膀胱癌细胞系侵袭能力的影响。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组T-24细胞的S100A4基因和蛋白表达降低(P＜0.05)。MTT法检测发现S100A4 siRNA转染组细胞增殖率明显下降（P＜0.01）;流式细胞术检测siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Transwell小室实验检测发现T-24细胞侵袭能力明显下降（P＜0.05）。结论:膀胱癌细胞中S100A4 表达与癌细胞侵袭、增殖和凋亡能力有关。S100A4 siRNA 能够抑制T-24细胞S100A4的表达,进而抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。S100A4基因和蛋白表达与膀胱癌的生物学特性密切相关,可能成为预测其发生转移和复发,以期指导临床治疗的重要指标。     

S100A4蛋白在乳腺癌组织的表达及临床意义

目的：探讨S100A4蛋白在乳腺癌组织的表达、相关性及临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测55例乳腺癌组织和16例乳腺良性病变中S100A4蛋白的表达。结果：S100A4在乳腺癌组织中阳性率55．45％显著高于良性病变组织（P〈0．05），S100A4在腋淋巴结阳性组和复发／远处转移组的阳性表达率明显高于腋淋巴结阴性组和无复发、转移组（P〈0．05）；生存期≥5年组S100A4阳性率明显低于生存期〈5年组（P〈0．05）；与生存期呈负相关。S100A4蛋白与乳腺癌患者年龄、肿块大小、病理学分类、临床分期、ER、PR表达状态及月经状况无关（P〉0．05）。结论：乳腺癌组织S100A4蛋白表达增高与肿瘤的发生发展及预后密切相关，是判断乳腺癌生物学行为、预测转移趋势的有价值的参考指标，并有可能成为乳腺癌基因治疗的新靶点。     

lncRNA LINC00969抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：探讨lncRNA LINC00969在乳腺癌细胞增殖和迁移中的作用及其相应机制。方法: qPCR检测LINC00969在42例乳腺癌组织和对应癌旁组织（标本收集自 2017 年 9 月至 2019 年 12 月福州市第一医院普外科手术患者）,以及正常乳腺细胞MCF-10A和5种乳腺癌细胞MCF-7、BT-20、MAD-MB-231、ZR-75-1、SKBR3中的表达。以过表达LINC00969质粒和空载体Vector转染乳腺癌MCF-7细胞,以qPCR验证转染效率;以CCK-8法、平板克隆和EDU实验检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting实验检测细胞中PCNA、CyclinD1和MMP2、MMP9水平,划痕修复实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭。结果: 与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LINC00969表达显著降低（P<0.05）;与乳腺细胞MCF-10A比较,5种乳腺癌细胞中LINC00969表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）,而以MCF-7细胞中最低;过表达LINC00969使MCF-7细胞的增殖、集落形成和DNA合成能力均受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,使MCF-7细胞周期明显阻滞于G1期,使细胞的划痕愈合和侵袭能力明显降低（P<0.05或P<0.01）。过表达 LINC00969 使 MCF-7 细胞中 PCNA、CyclinD1、MMP2和MMP9的表达受到明显抑制（均P<0.05）。结论: LINC00969在乳腺癌中低表达,上调LINC00969表达可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能涉及细胞周期与迁移相关蛋白表达的异常。     

miR-100抑制乳腺癌细胞迁移的作用和机制

目的:探究miR-100对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移能力的调节与机制.方法:Real time-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-100的基础表达水平.应用脂质体法将 miR-100 mimic及阴性对照分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过real time-PCR检测转染后miR-100的表达水平,细胞划痕实验检测过表达miR-100对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,Western blot方法检测slug、snail和E-cadherin等EMT蛋白表达水平的变化.结果:miR-100在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A.转染miR-100 mimic的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的miR-100表达水平明显增高,细胞划痕实验显示过表达miR-100的MDA-MB-231细胞划痕愈合速度明显减慢.过表达miR-100的MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白表达水平明显增加,而slug和snail蛋白表达水平明显降低.结论:miR-100抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移能力与其上调E-cadherin,下调slug、snail蛋白表达,抑制EMT有关.     

S100A7和S100A4在外阴鳞癌与外阴硬化性苔藓中的表达及意义

目的:检测外阴鳞癌（vulvar squamous cell carcinoma,VSCC）及外阴硬化性苔藓（vulvar lichen sclerosus,VLS）中S100A7和S100A4蛋白的表达,探讨其与疾病的发生发展关系。方法:采用免疫组化方法测定S100A7及S100A4蛋白在25例VSCC、20例VLS及15例外阴正常皮肤组织中的表达,并结合临床病理资料进行分析。结果:S100A7蛋白在VLS和VSCC中的表达明显高于正常皮肤（P＜0.05）,且早期VLS中的表达高于进展期（P＜0.05）;Ⅲ期VSCC中的表达高于Ⅰ-Ⅱ期（P＜0.05）,高分化VSCC中的表达高于中低分化（P＜0.05）。S100A4蛋白在VLS中的表达与正常皮肤无明显差异（P＞0.05）,但早期VLS中的表达高于进展期（P＜0.05）;S100A4在VSCC的癌巢中几乎不表达,但在间质细胞中的表达高于正常皮肤（P＜0.05）,中低分化VSCC中的表达高于高分化（P＜0.05）。S100A4表达与临床分期无关。结论:S100A7和S100A4蛋白高表达与VSCC的发生、发展有关,与VLS的进展呈负相关。     

非小细胞肺癌患者血清中 S100 A4和 S100 A6表达及其临床意义

目的：探讨S100A4和S100A6在非小细胞肺癌患者血清中的表达及其临床意义。方法筛选非小细胞肺癌患者共36例,同期纳入健康体检者50例为对照组。采取酶联免疫吸附试验（ ELISA）法测定2组血清S100A4和S100A6水平;比较2组血清S100A4和S100A6水平,分析血清S100A4和S100A6水平与患者临床特征的相关性。2组随访2年,比较死亡患者与存活患者的血清S100A4和S100A6水平。结果与对照组比较,非小细胞肺癌组患者血清中S100A4和S100A6水平明显升高（P＜0．01）。血清S100A4和S100A6水平与非小细胞肺癌患者的年龄、性别及病理类型无相关性（P＞0．05）,而与肺癌患者的分化程度、TNM分期及淋巴结转移有显著性相关（P＜0．01）。随访2年共有10例患者死亡,26例存活;死亡患者入院时血清S100A4和S100A6水平明显高于存活组（P＜0．01）。结论非小细胞肺癌患者血清S100A4和S100A6水平明显升高,对非小细胞肺癌的诊断和预后判断具有一定临床价值。     

大黄素联合survivin短发夹RNA对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的探讨大黄素与survivin短发夹RNA(shRNA)联合应用对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响。 方法先用MTT法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7生长抑制的影响,为后续联合用药实验筛选出适宜浓度(40 μmol/L)的大黄素。然后,将人乳腺癌细胞株MCF-7分为以下5组：空白对照组,细胞未做任何处理;阴性对照组,即NC shRNA组,加入空载质粒;大黄素处理组,用40 μmol/L大黄素处理细胞;survivin shRNA处理组,转染survivin shRNA质粒;联合处理组,用40 μmol/L大黄素与survivin shRNA联合处理细胞。利用MTT法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖(用吸光度值表示)和凋亡能力,用real-time PCR及蛋白质印迹法(Western blot法)分别检测细胞中survivin的mRNA和蛋白表达。由于细胞增殖活性检测结果显示空白对照组与阴性对照组差别不显著,故流式细胞术中不再设置阴性对照组。多组细胞间凋亡率及survivin的mRNA和蛋白表达量比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT法显示,不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素作用24、48、72 h后,各组细胞间吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 873.565, P<0.001),并且,40 μmol/L大黄素对细胞增殖的抑制率为(53.6±1.2)%(>50.0%),因此选择该浓度进行后续实验。用不同方法处理细胞24、48、72 h后,空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组及联合处理组细胞的吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 686.953, P<0.001),不同时间点间细胞吸光度值的差异也有统计学意义(F＝288.790, P<0.001),分组与时间点存在交互作用(F＝67.916, P<0.001)。流式细胞检测结果显示：空白对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组细胞凋亡率分别为(0.57±0.10)%、(5.96±0.56)%、(9.00±0.73)%和(18.33±0.98)%,4组比较,差异有统计学意义(F＝114.848, P<0.001);大黄素处理组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001);联合处理组细胞凋亡率明显高于其他各组(P均<0.001)。real-time PCR结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的mRNA表达量分别为1.000±0.000、0.968±0.033、0.774±0.049、0.483±0.026和0.364±0.012,5组比较,差异也有统计学意义(F＝284.199, P<0.001),进一步两两比较发现,联合处理组survivin mRNA表达量低于大黄素处理组(P<0.001)和survivin shRNA处理组(P＝0.001)。Western blot结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的survivin蛋白表达量分别为1.000±0.000、0.987±0.031、0.696±0.050、0.534±0.065和0.312±0.039,5组比较,差异有统计学意义(F＝142.311, P<0.001),进一步两两比较显示,联合处理组survivin蛋白表达量明显低于大黄素处理组和survivin shRNA处理组(P均<0.001)。 结论大黄素与survivin shRNA两者联合应用可明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖。     

miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭行为及其作用机制。方法:qPCR检测miR-149-3p的过表达情况;CCK-8细胞增殖实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞的增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与S100A4的相互作用;Transwell侵袭实验检测S100A4的异位表达逆转miR-149-3p的抗肿瘤作用。结果:miR-149-3p过表达显著抑制培养的膀胱癌细胞48小时的生长能力;过表达miR-149-3p后在膀胱癌细胞中具有抗迁移和侵袭作用;miR-149-3p能与S100A4的3' UTR特异性结合,调控S100A4的表达活性;S100A4的过表达可以逆转由miR-149-3p引起的细胞迁移和侵袭能力的抑制。结论:miR-149-3p在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节S100A4的表达影响膀胱癌细胞的增殖和迁移。     

结肠癌组织中S100A4基因的表达及其意义

目的:检测S100A4基因在结肠癌细胞系及结肠癌组织中的表达,探讨其与结肠癌的关系。方法:运用RT-PCR法检测不同结肠癌细胞系S100A4基因的表达;选取结肠癌及其相应癌旁组织各61例,通过原位杂交方法检测S100A4基因的表达。结果:S100A4基因在癌旁正常结肠组织中不表达,而在结肠癌中阳性率为34.4%,明显增高,P<0.05。在存在淋巴结转移的患者中16例(55.2%)S100A4基因阳性表达,而在无淋巴结转移者中只有5例(15.6%)阳性,P=0.001。Dukes分期A期的4例患者表达均为阴性,B期25例患者中3例(12.0%)阳性,C期15例患者中7例(46.7%)阳性,D期17例患者中11例(64.7%)阳性。此外,肿瘤长径>3cm、大体病理分型为隆起型以及病理分级差的患者,S100A4基因阳性率较高,但是差异无统计学意义,P>0.05。结肠癌中S100A4基因表达增高,S100A4的表达与肿瘤的临床分期和淋巴结转移密切相关。临床分期晚及伴有淋巴结转移的患者S100A4基因表达明显增高。结论:S100A4基因与肿瘤的侵袭及转移密切相关,是判断结肠癌生物学行为及预后的有价值指标。     

S100A4蛋白在结肠腺瘤和结肠癌中的表达

[目的]探讨S100A4蛋白在结肠腺瘤和结肠癌中的表达及其临床意义。[方法]用免疫组化法检测S100A4在15例正常肠黏膜、80例结肠腺瘤和60例结肠癌中的表达。[结果]S100A4蛋白在正常肠黏膜中无表达,在结肠腺瘤中阳性率为16.25%,在结肠癌中阳性率为56.67%。[结论]S100A4与结肠腺瘤和结肠癌的发生发展密切相关,是预测结肠肿瘤进展的有用指标。     

抵抗素13肽对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的影响

目的研究人工合成抵抗素13肽对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的影响。方法根据人抵抗素cDNA编码的氨基酸序列合成抵抗素分子22—34位的13个氨基酸的多肽（CSMEEAINERIQE）。采用MTT法检测细胞的增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果50、500、5000和10000ng／ml抵抗素13肽均能抑制MCF-7细胞生长,抑制率为46％到92％,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。诱导凋亡,四个浓度诱导的细胞凋亡率分别为6．7％、6.9％、7.5％和9．8％,与对照组0．6％的凋亡率比较P〈0．01。结论抵抗素13肽可以抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,促进细胞凋亡。     

S100A4蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的　研究S10 0A4蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组织化学SP法检测 65例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织中S10 0A4蛋白。结果　在正常宫颈组织中S10 0A4蛋白不表达 ;在宫颈鳞癌组织中S10 0A4蛋白的表达率为3 5 .4% ( 2 3 /65 ) ;与正常宫颈组织比较 ,差异具有显著性 (P <0 .0 1)。S10 0A4蛋白在宫颈鳞癌中的表达与临床分期和淋巴结转移有关 (P <0 .0 1) ,与组织学分级无关 (P >0 .0 5 ) ;阳性细胞在血管平滑肌细胞以及淋巴细胞中亦有表达。结论　S10 0A4蛋白和宫颈鳞癌的侵袭和转移密切相关 ;S10 0A4蛋白可作为判定宫颈鳞癌临床病理特征的重要指标     

S100A4 regulates cell motility and invasion in an in vitro model for breast cancer metastasis

Elevated levels of the calcium-binding protein S100A4 are associated with poor patient survival in breast cancer patients and induce metastasis in rodent models. To investigate the effects of S100A4 on different components of the metastatic process, epithelial cells lines have been isolated from nonmalignant tumours in neu transgenic mice and from malignant tumours in neu/S100A4 double transgenic mice. Additional cell lines expressing both Neu and S100A4 have also been derived by transfection of rat S100A4 cDNA into tumour cell lines cloned from neu single transgenic mice. Using these cells in transfilter migration assays, it has been shown that increases in either motility or invasive properties correlate with each other and with the level of S100A4 protein. Injection of three of the cell lines separately into the mammary fat pads of nude mice showed that elevated levels of S100A4 correlated with the degree of metastasis to the lungs. In contrast, changes in cell proliferation and cell-substrate adhesion did not correlate with S100A4 levels. Neither motility nor invasiveness correlated with proteolytic degradation of gelatin as measured by zymography. Thus, the results suggest that the main effect of increases in S100A4 levels in metastasis is to generate increased cell motility and invasion and that this latter change is not dependent upon an increased ability to degrade the intercellular matrix.     

S100A4 Expression is Closely Linked to Genesis and Progression of Glioma by Regulating Proliferation,Apoptosis, Migration and Invasion

Background: The calcium-binding S100A4 protein is involved in epithelial to mesenchymal transition,oncogenic transformation, angiogenesis, cytoskeletal integrity, mobility and metastasis of cancer cells. Thisstudy aimed to clarify the roles of S100A4 in genesis and progression of glioma. Materials and Methods: S100A4expression was examined by real-time RT-CPR and Western blot in glioma and paired normal brain tissue(n=69), and compared with clinicopathological parameters of tumors. In addition, glioma U251 cells transfectedwith an S100A4-expressing plasmid were examined for proliferation by MTT, apoptosis by Annexin V-FITC,and migration and invasion with Transwell chambers. Results: Increased S100A4 mRNA expression was foundin gliomas, compared with paired non-tumor tissue (p<0.001). Gradual elevation of overexpression of S100A4was observed with increasing glioma grade (p<0.001). Astrocytoma showed lower S100A4 mRNA expressionthan oligodendrogliomas, with glioblastomas having highest values (p<0.001). Similar results were obtained forS100A4 protein, a positive link being found between mRNA and protein expression in gliomas (p<0.001). Therewas higher growth, lower apoptosis, stronger migration and invasion of S100A4 transfectants than control andmock transfected cells (p<0.001). Conclusions: These findings indicate that up-regulated S100A4 expression ispositively linked to pathogenesis, progression and histogenesis of glioma by modulating proliferation, apoptosis,migration and invasion.     

胰腺癌患者血清中S100A8与S100A9水平及其临床意义

目的检测胰腺癌患者血清S100A8与S100A9的水平及探讨其临床意义。方法收集胰腺癌患者90例,同期纳入体检健康者50例为对照组。检测两组研究者血清中S100A8和S100A9的水平。分析胰腺癌患者血清S100A8和S100A9水平与其临床病理特征的相关性。对所有患者疗后随访6个月,比较死亡组与存活组患者血清中S100A8和S100A9水平。结果胰腺癌患者血清中S100A8和S100A9水平显著高于对照组(P<0.01)。胰腺癌患者血清中S100A8和S100A9水平与患者年龄、性别、肿瘤部位无显著相关(P>0.05),与其分化程度、临床分期呈明显相关(P<0.01)。6个月随访结果:27例死亡,18例存活,其中死亡组患者入院时血清S100A8和S100A9水平明显高于存活组,比较有显著性差异(P<0.01)。结论胰腺癌患者血清中S100A8和S100A9水平明显提高,且与其恶性程度密切相关,可能对临床评估胰腺癌预后有一定参考价值。