Wnt/β-catenin信号通路在幼兔激素性股骨头缺血坏死模型中的表达及意义

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与幼兔激素性股骨头缺血坏死的关系.方法 选用8周龄健康新西兰幼兔35只,体重在1.2～1.7 kg.按照随机数字表法将其分为激素注射组25只,对照组10只.前者臀肌注射糖皮质激素7.5 mg/kg,1周2次;后者注射等体积生理盐水,总共注射8周.分别于注射后4、8周时行双髋关节X线正位片、CT检查.注射8周后处死全部实验动物并立即取出双侧股骨头.根据X线正位片与CT检查结果判断发病与否,并将激素注射组分为发病组和未发病组.用RT-PCR方法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、脂联素(Adipoq)、β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)、骨形成蛋白-2(BMP-2) mRNA在各组股骨头中的表达情况,比较其在各组中的表达差异.结果 激素注射组动物存活22只,被认为发生股骨头坏死6只(发病组),未发病16只(未发病组),股骨头坏死发生率为27.3％ (6/22).RT-PCR示:β-catenin在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.01、0.35±0.09和1.07±0.41,发病组与未发病组、对照组比较,差异有统计学意义(t=4.94、10.60,P＜0.05);LRP5在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.05、0.35±0.12和1.12±0.36;发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=4.39、9.93,P＜0.05);Adipoq在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为17.84±5.51、3.33±1.26和1.11±0.27,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=5.88、12.01,P＜0.05);Caspase-3在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为3.10±0.90、1.29±0.35和1.06±0.24,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=7.15、7.75,P＜0.05);BMP-2在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.08±0.05、0.31±0.21和1.12±0.32,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=2.93、8.08,P＜0.05).在对照组、未发病组及发病组中,β-catenin与LRP5的表达均呈正相关关系,Caspase-3与β-catenin呈负相关关系,Caspase-3与LRP5呈负相关关系,Adipoq与β-catenin呈负相关关系,Adipoq与LRP5呈负相关关系,BMP-2与β-catenin呈正相关关系,BMP-2与LRP5呈正相关关系.结论 糖皮质激素对Wnt/β-catenin信号通路的抑制可能促进股骨头骨和软骨细胞的凋亡以及脂肪细胞的形成,抑制其成骨能力.     

细胞凋亡与自噬在激素性股骨头缺血坏死中的作用机制研究进展

激素性股骨头缺血坏死（Steroid—inducedavas—cularnecrosisoffemoralhead,SANFH）是指因长期或短期大量使用肾上腺皮质激素（以下简称激素）后造成股骨头活性成分的死亡而引起的病理过程。SANFH占非创伤性股骨头缺血坏死病因的首位。近年来由于临床中激素的广泛应用,使得SANFH发病率逐年增高,因此尽快探明SANFH的发病机制显得更加重要。     

颅咽管瘤中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体的表达及意义

目的　研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体 (tumornecorisisfactorrelatedapoptosisinducedligandreceptor,TRAILR)在颅咽管瘤细胞中的表达 ,探讨其临床意义。方法　采用免疫组化方法检测颅咽管瘤细胞及正常脑组织中TRAILR蛋白的表达。同时 ,采用原位杂交方法检测颅咽管瘤中诱骗受体 (Decoyreceptor,DcR)在mRNA水平的表达。 结果　免疫组化染色显示 ,2 4例颅咽管瘤均大量表达死亡受体 (Deathreceptor,DR)DR4和DR5 ,7例 (2 9.2 % )表达DcR1 ,5例 (2 0 .8% )表达DcR2 ,而 1 6例正常脑组织普遍表达DcR ,7例 (43 .8% )表达DR4 ,5例 (31 .3 % )表达DR5。颅咽管瘤组织中DR的高表达以及DcR的低表达不同于正常脑组织中DR的低表达及DcR的高表达 ,两者间有显著差异 (P <0 .0 1 )。原位杂交显示 2 4例颅咽管瘤组织分别有 1 9例 (79.2 % )DcR1和 1 5例 (62 .5 % )DcR2在mRNA水平呈强阳性表达 ,DcR在转录水平的表达明显高于翻译水平 (P <0 .0 1 )。结论　颅咽管瘤细胞中普遍存在DR的高表达和DcR的低表达 ,DcR在颅咽管瘤中限制性表达的调控位于转录后水平。这可能为颅咽管瘤的凋亡诱导治疗提供新的靶点和新的策略。     

地塞米松对胎粪吸入幼兔肺表面活性物质相关蛋白B的影响及意义

目的：胎粪吸入综合征合并肺动脉高压发病机制不明,治疗上缺乏有效的措施。曾有学者试用地塞米松治疗胎粪吸入猪,能降低肺高压,减轻肺水肿,但其机制不十分清楚。为进一步探讨地塞米松的作用机制,该文利用胎粪吸入模型观察地塞米松对幼兔胎粪吸入后肺表面活性蛋白B的影响。方法：通过气管内灌入胎粪0 .6ml/kg 和4ml/kg 建立轻、重幼兔胎粪吸入模型,根据是否应用地塞米松分为轻度胎粪吸入治疗组、对照组;重度胎粪吸入预防组、对照组。应用右心室穿刺法测定右心室收缩压。用RT PCR检测技术检测肺组织表面活性蛋白B(SP B)mRNA在转录水平的基因表达。结果：①轻度胎粪吸入组肺组织SP BmRNA表达量较未治疗组升高,2 4h达高峰 (0 .89± 0 .0 4 ) ,72h为 (2 .0 5± 0 .10 )仍高于对照组 (1.84± 0 .10 ) ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。②重度胎粪吸入预防组 (0 .38± 0 .0 5 )高于对照组 (0 .2 0± 0 .0 5 )差异有非常显著性意义(P <0 .0 1)。③地塞米松治疗后轻度胎粪吸入组 2 4 ,4 8h及重度胎粪吸入预防组右心室压力明显低于对照组。结论：地塞米松可促进幼兔胎粪吸入肺组织SP B表达增加,降低右心室收缩压,显示地塞米松对预防和治疗胎粪吸入综合征及其并发的肺动脉高压具有一定临床价值。     

闭合复位治疗发育性髋关节脱位发生股骨头缺血坏死的相关因素分析

目的 研究闭合复位术治疗发育性髋脱位(DDH)的长期随访结果,评估导致股骨头缺血坏死(AVN)的相关因素.方法 对DDH闭合复位后81例(106髋)进行平均3.6年的随访,Kalamchi and MacEwen分级评定缺血坏死,总结临床记录和影像学资料,统计分析缺血坏死的相关因素.结果 106髋中39髋发生缺血坏死(36.8%).其中,股骨头骨化中心发育基本正常的59髋中,7髋发生缺血坏死(11.9%);骨化中心发育偏小的40髋中,27髋发生缺血坏死(67.5%);骨化中心延迟未出现的7髋中5髋发生缺血坏死(71.4%).脱位程度越高发生缺血坏死的风险越大(P＜0.05).其他因素:性别、复位年龄、石膏固定类型、内收肌合并髂腰肌切断与缺血坏死的发生均无显著统计学意义.结论 闭合复位治疗发育性髋脱位,股骨头骨化中心发育延迟和高脱位与股骨头缺血坏死的发生相关.     

β抑制蛋白2及微管相关蛋白轻链3在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的改变及意义

目的 探讨β抑制蛋白2(β-arrestin2)及微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)在急性肾脏缺血再灌注损伤中的表达及与肾脏损害程度的相关性.方法 选用生后3~4周的雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、急性缺血再灌注损伤组.通过右侧肾脏切除,无创动脉夹夹闭左侧肾动脉45 min之后松开动脉夹,恢复肾脏血流,建立肾脏急性缺血再灌注损伤模型.并在恢复肾脏血流后12、24、36、48、72、96 h取肾脏及血液样本.采用免疫组织化学方法及West-ern blot方法检测各组肾组织中β-arrestin2及LC3蛋白的表达水平,检测各组的肾功能,并对各组肾脏病理学进行评分.结果 与正常组及假手术组相比,缺血再灌注损伤组血肌酐及肾脏病理学评分均有显著升高,其中肾脏损伤程度以缺血再灌注损伤后24 h最为明显;β-arrestin2及LC3蛋白在正常组及假手术组肾脏中的表达较少,在缺血再灌注损伤后的肾脏中表达显著升高,其中以缺血再灌注损伤后12 h时表达上调最为显著;β-arrestin2及LC3的表达改变先于肾脏病理改变,并且与肾脏损害程度呈正相关(r=0.821,P<0.05;r=0.913,P<0.05).结论 在肾脏急性缺血再灌注损伤时,β-arrestin2可能作为一个上游调控蛋白,通过对自噬的调节参与急性肾损伤的病理过程.     

胎粪吸入幼兔外周血及支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α的表达

目的 探讨TNF-α在胎粪吸入幼兔肺部炎症反应中的表达水平及意义.方法 将20只日龄21～30 d幼兔随机分为模型组和对照组,每组10只.模型组经气管导管注入胎粪悬混液,复制胎粪吸入性肺炎模型;对照组手术操作与模型组相同,但无胎粪悬液注入,不复制模型.酶联免疫吸附法检测2组幼兔外周血和支气管肺泡灌洗液TNF-α表达水平,并行统计学分析.结果 模型组幼兔肺组织出现Ⅰ型肺泡上皮细胞变性,Ⅱ型肺泡内板层小体呈空泡样改变等炎性损伤表现,且外周血和支气管肺泡灌洗液中TNF-α表达水平均高于对照组(Pa<0.05).结论 TNF-α参与介导了胎粪吸入后肺部的炎症反应.     

紧密连接蛋白在缺血再灌注肾损伤小鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨紧密连接蛋白claudin-2、claudin-10和claudin-17在缺血再灌注肾损伤模型小鼠肾脏中的表达及意义。方法 将152只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（n=8）、假手术组（n=72）及模型组（n=72）。采用夹闭小鼠双侧肾蒂30 min的方法建立缺血再灌注肾损伤小鼠模型,假手术组及模型组依据再灌注后时间点（0、3、6、12、24、48、72 h及5 d、7 d）分为9个亚组,每组8只小鼠。分别采用RT-PCR法及免疫组化法分别检测各组小鼠肾组织紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平。结果 对照组及假手术组小鼠肾组织claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平随再灌注时间点无明显变化（P > 0.05）。与对照组及假手术组比较,再灌注后模型组claudin-2、-10 mRNA及其蛋白表达水平降低,且随着再灌注时间的推移逐渐减弱,至再灌注24 h时达到最低水平（P < 0.05）;再灌注后模型组claudin-17 mRNA及其蛋白表达水平增高,且随再灌注时间的推移逐渐增高,至再灌注12 h时mRNA及24 h时蛋白水平达到最高（P < 0.05）。结论 缺血再灌注肾损伤与紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17的异常表达密切相关。     

皮肤血管瘤患儿肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体的表达与细胞凋亡的关系

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体4、5(DR4、DR5)在小儿皮肤血管瘤各阶段的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学法检测增生期、消退期血管瘤和正常皮肤组织中TRAIL和DR4、DR5蛋白的表达,并采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术(TUNEL法)检测各组织细胞凋亡情况。结果TRAIL、DR4、DR5蛋白的阳性表达率及细胞凋亡指数(AI)在血管瘤消退期明显高于血管瘤增生期和正常皮肤组织(P<0.05)。结论血管瘤的各个阶段均存在细胞凋亡现象,在由增生期转变为消退期的过程中出现细胞凋亡的上调,TRAIL及DR4、DR5参与细胞凋亡的调节,其与血管瘤的自行消退过程有关。     

胰岛素样生长因子-1在DDH并发股骨头无菌性坏死中意义

目的观察血清胰岛素样生长因子-1（Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1）在发育性髋关节脱位（developmental dislocation of hip，DDH）保守治疗中并发股骨头无菌性坏死时的变化和早期诊断意义。方法本组87例DDH患儿，治疗前骨盆片均未见股骨头无菌性坏死，随访6个月，根据随访时骨盆X线片征象，分为DDH并发股骨头无菌性坏死组和DDH骨盆片阴性组；对照组87例，为年龄、性别等条件相匹配的内科患儿．采用酶联免疫吸附法检测血清IGF-1。结果发现DDH并发股骨头无菌性坏死组的IGF-1显著高于DDH骨盆片阴性组和术前组，DDH骨盆片阴性组与术前组及对照组之间的IGF-1差别没有显著意义；有9例DDH患儿，3个月随访时IGF-1异常升高，到6个月时有3例发生股骨头无菌性坏死。结论IGF-1在DDH并发股骨头无菌性坏死时明显增高，在早期诊断中有～定意义。对于IGF-1的异常升高，宜密切随访。     

Aseptic necrosis of the femoral head in a white boy with S-D hemoglobinopathy

A case of aseptic necrosis of the femoral head is reported in a 10 and 1/2 year old white male with hemoglobin S-D disease. The patient also had functional asplenia and a history of hand-foot syndrome in infancy. The radiographic, clinical, and hematologic similarities, as well as the differences between S-D and S-S hemoglobinopathy are discussed.     

MRI follow-up and natural history of avascular necrosis of the femoral head in Kuwaiti children with sickle cell disease

PURPOSE:: To document the MRI progression and the natural history of avascular necrosis of the femoral head (AVNFH) in Arab children with sickle cell disease. PATIENTS AND METHODS: Twenty-three SS and 7 SbetaThal patients (aged 6-17 years) were screened for AVNFH between 1998 and 1999. Eight (26.7%) were identified with varying degrees of AVNFH. Seventeen of the original 30 patients have now been followed for 1 to 4 (mean 2.0 +/- 1.2) years, with repeat MRI of the hips. Spin-echo T1-and T2-weighted images and T2 fat-saturation sequences were obtained using a 1.5-Tesla GE unit with superconductors. AVNFH was graded I (mild), II (moderate), or III (severe). RESULTS: Eleven (64.7%) of the 17 patients had significant progression of their lesions; at the initial study, 9 were normal, 7 were grade I, 1 was grade II, and none was grade III. At the end of the follow-up period, two were normal, seven were grade I, one was grade II, and seven were grade III. Of the nine who were initially normal, two still had no lesions, while four were grade I and three were grade III on follow-up. Of the seven who were classified as grade I initially, four remained at grade I, one moved to grade II, and two became grade III. The one patient who was initially grade II progressed to III. CONCLUSIONS: AVNFH is a common, chronic, and unrelenting complication in children with sickle cell disease, and it is usually progressive.     

幼年特发性关节炎白介素6、γ干扰素诱导蛋白10和白介素17的表达及意义

目的 研究幼年特发性关节炎(JIA)患儿外周血及关节液中白介素6(IL-6)、γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)及白介素17(IL-17)的表达差异.方法 收集JIA患儿血清27例[其中全身型JIA (sJIA) 13例、多关节型JIA(pJIA) 14例]及关节液18例;疑诊sJIA患儿血清19例.另收集健康体检儿童血清28例作为对照.采用酶联免疫吸附法检测血清及关节液上清IL-6、IP-10及IL-17的浓度.结果 (1)血清细胞因子浓度:sJIA组血清IL-6浓度明显高于健康对照组[28.0(4.2 ～59.2)ng/L vs.12.3(2.1 ～ 13.8) ng/L,P＜0.05],但疑诊sJIA组与健康对照组相比无明显升高[11.8(7.7～39.2)ng/Lvs.12.3(2.1 ～13.8)ng/L,JP＞0.05].sJIA组血清IL-17浓度高于健康对照组[14.0(9.8～ 34.3)ng/L vs.9.8(7.9 ～ 16.2)ng/L,P＜0.05],pJIA组血清IL-17浓度与健康对照组相比无明显升高[14.2(9.9 ～ 16.9)ng/L vs.9.8(7.9 ～ 16.2)ng/L,P＞0.05].(2) sJIA及pJIA组关节液中IP-10的浓度均分别高于两组血清[619.7(160.9,873.1)ng/L vs.64.8(27.4 ～ 111.9) ng/L,P＜0.01;660.9(401.9,1349.8)ng/L vs.97.4(41.9 ～222.1)ng/L,P＜0.01].关节液中IL-17浓度仅pJIA组显著高于血清[22.9(17.1,45.8) ng/L vs.14.2(9.9 ～ 16.9)ng/L,P＜0.01].结论 (1)IL-6在sJIA发病中起重要作用,并且可能成为关节炎症早期的重要生物学标记.(2) sJIA发病机制中可能共同存在自身炎症反应和自身免疫反应.(3) IL-17在pJIA关节液局部高表达,而在外周血表达并不升高.(4)趋化因子IP-10在关节液和外周血中存在显著浓度梯度,可能是其发挥趋化作用,进而致sJIA关节损害的基础.     

中枢神经系统感染脑脊液肿瘤坏死因子及其意义

探讨化脓性脑膜炎、病毒性脑膜炎或脑炎患儿脑脊液肿瘤坏死因子（TNF）的临床意义。方法采用TNF放免药盒，测定化脑组21例、病毒脑28例、对照组20例的脑脊液TNF。结果化脑组脑脊液TNF阳性率显著高于病毒脑组，化脑组脑脊液肿瘤坏死因子升高的平均浓度显著高于病毒脑组，差异有高度统计学意义。结论对接受过抗生素治疗而诊断不明者，可行脑脊液TNF检测，高水平则提示化脓性脑膜炎。     

早期脑损伤新生大鼠脑白质神经蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖表达及意义

目的观察宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质Neurocan和Versican表达情况。方法 40只受孕母鼠随机分为对照组(n=10)和脂多糖组(n=30),给予受孕18 d的脂多糖组孕鼠脂多糖(血清型055)380μg/kg,连续2 d腹腔注射;对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水。每组随机选取幼鼠各60只,于0,1,7,14,21,28日龄各处死10只仔鼠,HE染色法检测脑组织病理变化,荧光定量RT-PCR方法测定Neurocan和Versican相对表达量。结果对照组孕鼠无死亡及提前分娩,共娩出活产足月仔鼠124只;脂多糖组中孕鼠5只死亡,6只提前分娩,剩余19只共娩出活产足月仔鼠132只,死亡24只。与对照组比较,0,1,7,14,21,28日龄脂多糖组新生大鼠脑白质Neurocan mRNA和Versican mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内感染致脑损伤后,脑白质区Neurocan和Versican的表达明显上调。     

细胞外信号调节激酶信号转导途径在哮喘大鼠气道重塑中作用及糖皮质激素的调控

目的研究细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导途径在支气管哮喘气道重塑过程中作用,探讨糖皮质激素对ERK信号转导途径及哮喘气道重塑的调控。方法SD大鼠随机分为对照组（30只）、哮喘组（30只）、治疗组[包括地塞米松干预组（DM组）及布地奈德干预组（BUD组）,各10只]三大组,通过卵白蛋白（OVA）致敏和激发复制哮喘模型;分别在雾化激发4周、8周及12周三个时间观察点取哮喘组、对照组鼠各10只（DM组在雾化8周、BUD组在雾化12周取标本）各组均在末次激发后取血及肺组织用于指标测定。图像分析软件测定支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（w锄）,ELISA法测定血清中AB型血小板源性生长因子（PDGF—AB）的含量,免疫组化测定肺组织中磷酸化的ERK（Phospho—ERK,P—ERK）与原癌基因c-fos产物即c-Fos蛋白表达水平,Western Blot法测定ERK的磷酸化水平。结果各时间点哮喘组Wat和Wam均高于相应对照组（P〈0．01）。治疗组低于哮喘组（P〈0．01）;各时间点哮喘组血清PDGF—AB含量均较相应对照组高（P〈0．01或P〈0．05）,DM组较低于8周哮喘组（P〈0．01）,BUD组与12周哮喘组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;各时间点哮喘组P-ERK和c—Fos的平均吸光度（4、8、12周哮喘组分别为27．2±4．5、31．1±2．2、32．5±2．1和32．5±4．8、30．0±2．0、30．9±1．6）均较相应对照组高（P〈0．01）,治疗组低于哮喘组（P〈0．01）;各时间点哮喘组P—ERK的吸光度值（4、8、12周哮喘组分别为3．54-0．4、3．8±0．4、3．5±0．5）较相应对照组高（P〈0．01）,治疗组低于哮喘组（P〈0．01）。结论哮喘大鼠PDGF—AB含量、ERK磷酸化水平及c-Fos表达高;糖皮质激紊抑制了哮喘大鼠ERK磷酸化及c-Fos表达,同时Wat、Wam也明显抑制,提示糖皮质激素在哮喘气道重塑过程中具有抑制作用。     

TRAIL及其受体DR5在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中的表达和意义

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体5(DR5)在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中病变不同时期的表达及与细胞凋亡的关系.方法 建立病毒性心肌炎小鼠模型,于注射病毒后第7、10、14、21、28天取心肌组织,HE染色做心肌病理积分,TUNEL法检测凋亡细胞百分率,免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中TRAIL和DR5蛋白及mRNA的表达.结果 病毒感染组小鼠和正常对照组小鼠心肌组织中均存在TRAIL和DR5蛋白和mRNA的表达.病毒感染后第14天,病毒感染组小鼠心肌组织中TRAIL蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.05)和第7天病毒感染组(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(F=9.17,P<0.01).病毒感染后第10、14、21天,病毒感染组小鼠DR5蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=13.32,P<0.01).且TRAIL和DR5蛋白的表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡率密切相关(P<0.05).病毒感染组第10天TRAIL mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=10.86,P<0.01).病毒感染组第10、14天DR5 mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=22.75,P<0.01).结论 病毒性心肌炎小鼠发病中期,TRAIL及其受体DR5在心肌组织中出现高表达,且与病理积分、心肌细胞凋亡率成正相关,TRAIL及其受体DR5可能通过调控心肌细胞凋亡参与病毒性心肌炎的病理过程.