热缺血损伤对大鼠无心跳供体供肝质量及肝移植预后的影响

目的 探讨不同热缺血时间条件下,无心跳供体(NHBD)的供肝质量与耐受热缺血的安全时限。方法实验动物大鼠按供肝热缺血时问分别为0、10、15、20、30、45、60min,随机分为7组(n=12)。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察肝移植术后各组组织形态、肝脏功能状态和能量代谢的恢复性变化,并统计生存时间。结果在热缺血30min以内,肝组织损伤仍处在可复性阶段,复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能。供肝热缺血损伤的时问与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。供肝经受30min以内热缺血损伤,各组移植术后生存天数无明显差异。热缺血时间超过45min后,虽仍可获较短期的存活,但移植术后的长期存活时间明显缩短。热缺血60min以后,供肝已发生不可逆性损伤。结论供肝组织三磷酸腺苷(ATP)含量、能荷(EC)水平和肝糖原含量、酶组织化学活性的变化以及移植术后上述指标恢复性的潜能叮作为衡量供肝质量的重要标准。大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。     

同种异体肝移植供肝灌注不理想时的补救措施

目的探讨在心脏停搏同种异体供体肝移植获取中灌注不理想时的补救措施及其临床意义。方法对2001年和2004年杭州市第一人民医院开展完成的人原位肝移植的资料进行回顾性分析，2例供肝的最初灌注由于多方面原因均未达到满意的要求，及时通过门静脉灌注的补救措施，冲洗出其内的血凝块或红细胞等直至流出道清亮。结果2例供肝虽经历心脏停搏和灌注不理想等情况，但及时补救，2例供肝移植后肝功能无明显损害，肝细胞穿刺病检未见不可逆转变化，患者分别随访4年余和20个月至今均存活，生活质量良好。结论供肝最初灌注不理想时，及时采取适宜速度和压力门静脉灌洗不仅可以减轻对供肝在灌洗这一环节的损伤，又能保证供肝充分的灌洗，对减少供肝质量的损失和提高此类肝移植术后的存活率十分必要。     

同种异体肝移植供肝灌注不理想时的补救措施

目的探讨在心脏停搏同种异体供体肝移植获取中灌注不理想时的补救措施及其临床意义。方法对2001年和2004年杭州市第一人民医院开展完成的人原位肝移植的资料进行回顾性分析,2例供肝的最初灌注由于多方面原因均未达到满意的要求,及时通过门静脉灌注的补救措施,冲洗出其内的血凝块或红细胞等直至流出道清亮。结果 2例供肝虽经历心脏停搏和灌注不理想等情况,但及时补救,2例供肝移植后肝功能无明显损害,肝细胞穿刺病检未见不可逆转变化,患者分别随访4年余和20个月至今均存活,生活质量良好。结论供肝最初灌注不理想时,及时采取适宜速度和压力门静脉灌洗不仅可以减轻对供肝在灌洗这一环节的损伤,又能保证供肝充分的灌洗,对减少供肝质量的损失和提高此类肝移植术后的存活率十分必要。     

热休克蛋白70对大鼠心脏停搏供体肝移植的保护作用

目的：采用心脏停搏供体大鼠原位肝移植模型,观察热休克蛋白70（HSP70）对心脏停搏后不同时间的供肝缺血再灌注损伤的影响。 方法：以缺血预处理方法诱导大鼠肝脏组织产生HSP70,以预处理(IP)与否及供体心脏停搏45 min或60 min的不同,将供体大鼠分为4组(IP-45,IP-60,C-45和C-60)。于肝移植术后1 h采血检测肝功能,术后1 h及7 d切取肝脏,观察肝脏病理学改变,并观察各组大鼠术后存活时间。结果：缺血预处理后24~48 h,肝组织HSP70表达明显增强;肝移植术后1 h,血清ALT和AST水平IP组明显低于对照(C)组（P<0.05）;术后7 d,IP组移植肝光学显微镜下肝小叶结构完好,汇管区有少量淋巴细胞浸润,C组移植肝则出现了较多的肝细胞坏死和气球样变。C-45和C-60组1周存活率分别为12.5%和0;而IP-45和IP-60组1周存活率分别为62.5%和37.5%。 结论：HSP70明显改善术后肝脏功能和减轻肝脏病理学改变,显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率,HSP70对心脏停搏供体肝移植缺血再灌注损伤具有明显保护作用。     

大鼠肝移植并发症的预防

目的探讨如何从手术操作过程中,减少大鼠原位肝移植术的并发症。方法采用二套管法共行大鼠原位肝移植术72次,其中24次为大鼠心脏停搏供体肝移植,热缺血时间分别为15、30和45min不等。结果术后受体的主要并发症为出血、血栓形成、感染和胆道梗阻;而对于心脏停掉供体肝移植,受体更易产生原发性移植肝无功能。结存减少游离肝脏时的机械损伤、防止血管套管的扭曲或成角、提高吻合口质量、以及缩短无肝期时间是预防并发症的关键。     

热缺血时间对无心跳供体肺移植再灌注后Ⅱ型细胞凋亡的影响

目的研究热缺血时间对无心跳供体肺移植后Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法将经历不同热缺血时间(30min、60min、120min)间隔Wister大鼠的左肺移植到同系Wister大鼠受体。再灌注2h后,提存肺泡Ⅱ型上皮细胞并进行分析。结果流式细胞计数结果:对照组(心跳组)移植再灌注2h后凋亡细胞率(0.093 1±0.007 7);热缺血-30min组移植再灌注2h后凋亡细胞率(0.166 5±0.014 8);热缺血-60min组移植再灌注2h后凋亡细胞率(0.227 5±0.020 1);热缺血-120min组移植再灌注2h后凋亡细胞率(0.436 5±0.033 7)。各组之间比较P均<0.05。且随着热缺血时间的延长,凋亡率成上升趋势。结论无心跳供体肺移植后原发性移植物失功能的发生率高的一个可能原因是随着热缺血时间的延长造成了移植后II型细胞凋亡比例增高使得移植肺处于失功能状态。     

无心跳供体大鼠同种异体左肺原位移植模型的热缺血时限

 目的 建立无心跳供体（NHBD）大鼠同种异体左肺原位移植模型,比较不同热缺血时间（WIT）对大鼠移植肺功能和结构的影响。方法 将32只SD大鼠按供受体随机配对成16对,分成4组,分别为有心跳供体组（对照组,HBD）、NHBD热缺血1 h组、（实验组,NHBD1h）、热缺血2 h组（实验组,NHBD2h）和热缺血3 h组（实验组,NHBD3h）,每组4对。供肺摘取后置于4℃低钾右旋糖苷（LPD）液中4 h。采用三“袖套”套管法行左肺原位移植术。测定和观察移植前、移植后10 min、1 h和2 h的右颈动脉血气,移植后2 h的左肺静脉血气、移植肺湿/干重比和组织形态学改变。结果 NHBD1h组移植肺再灌注10 min、1 h和2 h所采集的右颈动脉血PaO2数值（177.8 ± 15.5、162.0 ± 19.3和195.5 ± 26.4）和对照组HBD组（187.3 ± 34.4、191.8 ± 36.6和198.8 ± 36.6）的差别没有统计学意义;再灌注10 min和2 h,NHBD2h组右颈动脉血PaO2数值（154.8 ± 25.2和116.5 ± 32.1）以及NHBD3h组（121.0 ± 28.2和88.3 ± 23.6）和对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。移植肺再灌注2 h后,NHBD1h组左肺静脉血PaO2数值与对照组的差别没有统计学意义（132.3 ± 33.8 vs. 143.8 ± 17.1）,NHBD2h和NHBD3h组与对照组的差别均有统计学意义（78.8 ± 16.1 vs. 143.8 ± 17.1,70.8 ± 15.5 vs. 143.8 ± 17.1,P<0.05）。NHBD3h组的湿/干重比数值和肺损伤程度病理评分与对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。结论 本实验成功建立了NHBD大鼠同种异体左肺原位移植模型,在本实验动物模型中,大鼠可以耐受的WIT为1 h。     

热缺血时间对循环停止猪心供体冠状动脉内皮功能的影响

目的探究热缺血时间对循环停止猪心供体(DCD)冠状动脉内皮细胞功能的影响。方法将18头健康瑞典家猪随机分为对照组、热缺血30 min组、热缺血40 min组,每组6只。将对照组冠状动脉前降支远端血管截成血管环进行器官浴槽实验;另外两组采用腔静脉插管将循环血液排空建立失血DCD模型,将心脏遗留在胸腔内,分别在30 min和40 min后进行器官浴槽实验(方法同对照组)。比较3组内皮依赖性舒张功能(EDR)。结果对照组、热缺血30 min组和热缺血40 min组最大内皮依赖性舒张百分数(EDRmax)分别为(95.72±0.95)%、(95.09±0.85)%和(94.41±1.06)%,3组EDRmax比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、热缺血30 min组和热缺血40 min组P物质半最大效应浓度负对数(p EC50)分别为(6.53±0.07)%、(6.43±0.02)%和(6.38±0.04)%,3组p EC50比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在实验条件下,热缺血30 min及40 min对猪循环停止猪心供体冠状动脉内皮细胞功能无显著影响。     

供心热缺血耐受时限的实验研究

供体心脏(供心)的心肌保护是心脏移植成功的重要保证,心脏移植术中心肌保护虽然与常规的心内直视手术大致相同,但有其特点:包括1热缺血期;2冷缺血期;3手术缺血和再灌注期[1],在供体为脑死亡患者对其血流动力的稳定性可作出相应的处理,如监测及心血管药物的应用[2],在我国...     

Detection of bronchial function of NHBD lung following one-h warm ischemia by organ bath model

This study investigated the feasibility and effects of organ bath to be used for detection of bronchial function of non-heart-beating donor （NHBD） lung after 1-h warm ischemia. Sixteen Swedish pigs were divided into two groups randomly： heart-beating donor （HBD） group and NHBD with 1-h warm ischemia （NHBD-1 h） group. The bronchial rings whose lengths and inner diameters were both 1.5 mm were obtained from isolated left lungs of all the pigs. Acetylcholine, arachidonic acid natrium and papaverine were used to test and compare the contractile and relaxant function of bron- chial smooth muscles and epithelium-dependent relaxation （EpiDR） response between HBD and NHBD-1 h groups. The results showed that there was no significant difference in the values of bronchial precontraction between HBD and NHBD-1 h groups （5.18±0.07 vs 5.10±0.11 mN, P〉0.05）. No significant difference in the values of EpiDR responses between HBD and NHBD-1 h groups （1.26±0.05 vs 1.23±0.07 mN, P〉0.05） was observed either. During the process of EpiDR induction, the tings had no spontaneous relaxation in two groups. In addition, papaverine solution completely relaxed the bronchial smooth muscles of all bronchial tings. It was concluded that after warm ischemla for 1 h, the contractile and relaxant abilities of bronchial smooth muscles, and the epithelium-dependent adjustment both kept intact. Organ bath model could be a liable and scientific way to evaluate the bronchial function of NHBD lung.     

体外肝脏灌流复苏无心跳供肝功能的实验研究(英文)

目的探讨利用ECLP系统来复苏经历了较长热缺血时间的无心跳供肝功能的可能性和机制，为临床有效地利用热缺血时间超过安全时限的无心跳供肝提供一种思路和理论依据。方法实验动物为普通健康的天津白猪，体重在20-25kg之间，雌雄不拘。无心跳供肝按热缺血时间和保存方法的不同随机分为3组，再根据不同的阶段进行设计。A组（n=4）无心跳供肝的热缺血时间在安全时限内，用HTK液低温保存10h；B组（n=4）无心跳供肝的热缺血时间为60min，用HTK液在低温保存10h；C组（n=4）无心跳供肝的热缺血时间为60min，用ECLP系统常温灌流10h。经过60min冷缺血期后，连接ECLP系统再灌流。观察再灌流时间和1h、2h、3h、4h四个时间点的胆汁分泌量和门静脉和肝动脉的压力，耗氧率的变化，以及灌流液中ALT、LDH、葡萄糖水平和灌流后的常规病理和超微病理变化。结果B组（HTK液保存组）肝脏在再灌流后短时间内肿胀，没有胆汁分泌，常规病理和超微病理显示正常结构破坏，出现不可逆性的损伤。C组（ECLP系统灌流组）肝脏在再灌流初期胆汁分泌量、门静脉和肝动脉的压力、耗氧率和灌流液中葡萄糖水平和A组（安全时限组）差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01），但随着再灌流时间的延长，在4h两组差异没有显著性（P〉0．05）。常规病理和超微病理变化显示肝脏结构完整，较轻度病变。结论热缺血时间为60min的无心跳供肝在HTK液低温保存10h后已基本失去生理活性与功能，利用ECLP系统灌流能够在一定程度上复苏热缺血时间较长的无心跳供肝。     

热缺血对大鼠肝移植术后胆管周围血管丛的影响

目的 初步探讨供肝热缺血损伤对大鼠肝移植术后胆管周围血管丛的影响.方法 108只受体SD大鼠平均分为假手术组(正常组)、无热缺血组(对照组)及热缺血10 min组(实验组).分别于术后第1、3、7、14天取9只大鼠处死,检测各组血清碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL).另取肝组织行石蜡切片,分别以HE染色和纤维素染色观察移植肝胆管周围血管丛及胆管结构的形态学改变.电镜检测各组各时相点胆管上皮细胞及胆管周围血管丛血管内皮细胞超微结构.结果 实验组术后各时相点血清胆道酶谱和胆红素较相应时相点的对照组和正常组显著升高(P<0.05),恢复至正常的时间延迟;实验组HE和纤维素染色可见术后胆管周围血管丛损伤及胆管损伤较对照组及正常组严重,且实验组胆管周围血管丛内观察到微血栓形成;电镜下可见实验组术后早期血管内皮细胞损伤严重,且胆管上皮细胞出现缺血缺氧性改变.结论 热缺血再灌注损伤可致胆管周围血管丛损伤及胆管上皮细胞缺血缺氧性改变,可能是肝移植术后缺血型胆管病变和一过性肝内胆汁淤积的重要原因.     

脑死亡供肝与无心跳供肝对肝移植患者近期预后的影响

目的 比较腩死亡供体与无心跳供体来源供肝对肝移植患者术后短期预后的影响,初步探讨脑死亡供体来源供肝应用于临床的安全性.方法 2006年1月至2007年12月中山大学附属一院器官移植科共实施成人首次全肝移植130例,其中9例接受脑死亡供体供肝(脑死亡供体组),121例接受无心跳供体供肝(无心跳供体组),回顾性分析了以上130例患者的术中、术后情况,比较两组患者术中出血量、手术时间、无肝期时间、术后SICU治疗时间、各种并发症的发生率及术后近期生存情况(围手术期、术后6月及术后12月生存率)的差异.结果 两组间手术时间、无肝期时间和术中出血量无明显差异,术后1月、6月、12月生存率无明显差异(P>0.05),术后各种并发症的发生率无明显差异.结论 脑死亡供体来源的供肝与无心跳供体来源的供肝相比,移植肝及受者术后早期预后无明显差异.     

温血停跳液再灌注对大鼠热缺血供心的心肌保护作用

 目的 研究温血停跳液再灌注对大鼠热缺血供心的心肌保护作用。方法 24只SD大鼠随机分为对照组（A组,n=8,无热缺血,冷缺血4 h,常规心肌保护）、热缺血组（B组,n=8,热缺血10 min,冷缺血4 h,常规心肌保护）、温血停跳液再灌注组（C组,n=8,热缺血10 min,冷缺血4 h,常规心肌保护后添加温血停跳液再灌注）。保存结束后建立Langendorff模型：观察复苏情况,检测冠状静脉窦溢出液（C组检测冠状静脉窦回血）内心肌酶水平,测定平均冠脉流量,描记左室内压波形,计算相应血流动力学指标,测定心肌组织含水量,行组织学检查。结果 A组、C组心脏复苏显著优于B组,前者在复灌初始即全部恢复窦性心律,后者复灌初始全部为室颤,须经历15～20 min恢复窦性心律,其中一只经反复按压至实验结束仍未复律。A组、C组心肌酶漏出水平分别如下。CK：（2191.25±1408.08）U/L,（2918.63±1194.55）U/L;CK-MB：（82.13±37.08）U/L,（472.25±133.74)U/L;AST：(71.25±27.91)U /L、(323.38±102.98) U/L;LDH：（189.50±71.34) U/L、（1548. 38 ±943.62）U/L,均显著高于A组;A组[CK：（94.00±99.42）U/L;CK-MB：（14.75±9.33）U/L;AST：（12.13±28. 59）U/L;LDH：（35.75±28.95）U/L]（P＜0.01）。A组平均冠脉流量为（8.71±1.42）mL/min显著大于B组流量（6.56±1.54）mL/min（P>0.05）,C组平均冠脉流量为（7.96±1.17）mL/min,与A组无统计学差异（P>0.05）。A组和C'组心率（HR）、左室内压上升支最大斜率（+dp/dt max）、左室内压下降支最大斜率（-dp/dt max）分别为HR：（248.22±36.56） bpm、（266.07±27.75) bpm,+dp/dt max：（144.32±32.89）kPa/s、（147. 04±27.04）kPa/s,-dp/dt max：（126.81±35.07）kPa/s,（141.96 ±31.83）kPa/s,两组之间无统计学差异（P>0.05）。B组HR、+dp/dt max、-dp/dt max分别为（177.88±83.96）bpm、（41.33±42.13）kPa/s,（31.77±31.14）kPa/s,显著低于A组（P>0.05）。B组、C组心肌含水量分别为（81.10±1.24）%和(80.52±0.90)%,均显著高于A组（78.90±1.33）%（P>0.05）。B组较A组、C,组心肌及冠脉内皮组织学损伤严重。结论 温血停跳液再灌注显著减少大鼠热缺血供心缺血再灌注损伤,改善复苏及复苏后血流动力学。     

热缺血对兔肾表面微循环的影响

作者用10只家兔.观察了不同时限热缺血对兔肾表面微循环的影响。将动物分四组。A组为手术对照,不阻断肾动脉。其余B、C、D组分别阻断左肾血流10min、30min和60min。在阻断前和恢复血流10min后,分别用显微镜观察肾表面微循环。行右肾切除。动物观察14天。结果表明,10min缺血组动物仅有轻度毛细血管收缩。30min以上热缺血.不仅引起更明显的微血管收缩,还可引起不同程度的血管扩张和血流淤滞现象。微循环紊乱尤其是血流淤滞的程度.与术后肾功能及组织学检查结果一致。提示缺血后肾皮质微循环状况与肾功能恢复密切相关。肾保存时,保存液中加入适当保护剂保护肾脏微循环,对于移植后肾功能的恢复具有重要意义。     

Organ bath in detecting the effect of one-hour warm ischemia on pulmonic arteries and bronchi from non-heart-beating donor lungs

Background Non-heart-beating donor lung has been a promising source of lung transplantation. Many studies on non-heart-beating donor lungs are based on animal lung transplantation. In this study, we assessed by organ bath the effect of one-hour warm ischemia on the non-heart-beating donor lung in terms of the integrity of contractile and relaxant functions and tissue structures of pulmonic arteries and bronchi. Methods Sixteen Swedish pigs were randomly classified into two groups： heart-beating donor group and 1-hour warm ischemia non-heart-beating donor group. Pulmonic and bronchial rings were taken from the isolated left lungs of the pigs. The pulmonic rings were stimulated by U-46619 （5.7 mol/L） and acetylcholine （104 mmol/L） to assess the contractile abilities of smooth muscle and the endothelium-dependent relaxation response, respectively. As such, acetylcholine （10^-5 mmol/L） and natrium arachidonic acid （0.01%） were used to detect the contraction of bronchial smooth muscle and epithelium-dependent relaxation response. Meanwhile, the variances of precontraction tension of control groups were recorded to measure whether there was spontaneous relaxation during endothelium/epithelium-dependent relaxation course. Finally, papaverine solution （10.4 mmol/L） was used to detect the non-endothelium/epithelium-dependent relaxant abilities of pulmonic and bronchial smooth muscles. Results There was no significant difference in the tension values of precontraction of pulmonic rings （P 〉0.05）, endothelium-dependent relaxation （P 〉0.05）, precontraction of bronchial rings （P 〉0.05） and epithelium-dependent relaxation （P 〉0.05） between the heart-beating donor group and the 1-hour warm ischemia non-heart-beating donor group. And the pulmonic and bronchial rings of each subgroup B had no spontaneous relaxation. Finally, papaverine solution relaxed the smooth muscle of all the rings completely. Conclusions The results of this experiment suggest that the contractile and relaxant functions and tissue structures of pulmonic arteries and bronchi are not damaged after warm ischemia for 1 hour, and support the further study of non-heart-beating donor lung.     

供体肝缺氧时间对肝移植大鼠生存率的影响

目的: 研究肝移植围手术期的缺氧损伤对肝移植大鼠生存率的影响.方法: SD大鼠随机分为4组,对照组:不进行低氧处理的原位肝移植组;A组:50只,供肝大鼠先进行10 min的低氧适应后在低氧处置下按传统的Kamada法行供肝切取;B组:40只,低氧处置同A组,但供肝切取按改进的取肝法,即不过度游离肝动脉,于灌肝后离断肝动脉.C组:15只,假手术组.观测各组大鼠手术后24 h和1 w的生存率.结果: 在低氧条件下,采用改进的快速取肝法手术的B组与采用常规的Kamada取肝法的A组大鼠相比,B组大鼠供肝切取时间显著缩短,一周生存率明显提高,但仍低于对照组的一周生存率.结论: 肝移植大鼠一周存活率与供肝的实际热缺血时间呈负相关.肝移植围手术期中各种因素引起的肝脏缺氧是导致供肝实际热缺血损伤的主要原因.