流式细胞术检测不同RhD血清型红细胞RhD抗原的表达

本研究旨在建立流式细胞术(FCM)检测红细胞表面RhD抗原的实验方法,并研究不同RhD血清型红细胞表面D抗原表达的差异。选取标准的RhD( )和RhD(-)细胞按1∶1比例混合,用间接标记法[一抗为IgG抗-D,二抗为FITC-抗-IgG F(ab′)2]染色,应用FCM检测RhD( )细胞的比例,并确立IgG抗-D的最佳使用稀释度。采用FCM检测RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性红细胞表面D抗原数量。结果显示,IgG抗-D单克隆抗体的最佳使用稀释度是1∶4,1×106/50μl。RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性者RhD( )红细胞百分率分别为(96.8±2.97)%、(79.5±9.88)%、(47.8±11.43)%、(3.7±2.96)%,红细胞表面D抗原平均荧光强度依次为33.3±6.21道、18.6±5.39道、7.10±1.17道、0.79±0.55道。结论:4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量最多,弱D型次之,RhDel型最少。     

流式细胞术检测RhD(-)血液中微量RhD(+)红细胞的研究

目的探讨建立流式细胞术(FCM)检测微量RhD(+)红细胞的试验方法。方法选取标准的RhD(+)和RhD(-)细胞按不同比例混合,用间接标记法一抗为IgG抗-D,二抗为FITC-抗-IgG F(ab’)2染色,应用FCM检测RhD(+)细胞的比例,并确立IgG抗-D的最佳使用剂量。在此实验条件下,作FCM检测值与实际值的相关性分析和FCM的检测重复性分析。结果抗-D的最佳使用剂量是1∶4稀释,50μl/1×106细胞;当RhD(+)细胞占RhD(-)细胞比例范围为2.5%—0.312%时,FCM测定比例与已知实际比例的相关系数(r)=0.987。RhD(+)细胞比例分别为10%、2.5%的同一测定管各重复测定10次,变异系数分别3.4%、4.9%。结论FCM检测微量RhD(+)细胞具有较好的准确度和重复性,可应用于临床检测RHD(-)患者体内的微量RhD(+)细胞。     

流式细胞术检测HLA-B27抗原在强直性脊柱炎诊断中的价值

2005—01／2007—12我们采用流式细胞术（flowcytometry，FCM）对其强直性脊柱炎患者的HLA—B27抗原进行检测，方法简便，稳定性好，重复性高，现报告如下。 1对象和方法 1．1对象 男71例，女10例，年龄15～54（平均33．6）岁。AS的诊断按照1984年修改的纽约标准。     

RhD抗原变异体及其在输血中的意义

<正>Rh血型抗原活性是由红细胞表面上的Rh蛋白和Rh相关糖蛋白(Rhesus associated antigen,RhAG)组装而成的复合物所决定,它们分别受控于1号染色体上2个紧密连锁的     

探讨流式细胞术检测胞浆抗原的方法及其在白血病免疫分型中的意义

为探讨用流式细胞术检测胞浆抗原的方法及其在免疫分型中的意义，采用三色或四色直接免疫荧光标记法检测56例患17种膜抗原表达，并采用4种透膜剂处理细胞后用流式细胞仪测定胞浆（c)CD3,CD22,CD79a，CD13，CD33及髓过氧化物酶（MPO）的表达。结果显示，用FACS透膜液处理细胞后，胞浆抗原的阳性百分比最高，而细胞的光散射（SSC）及CD45的荧光强度不变。18例急性髓细胞白血病（AML）患，16例MPO阳性；4例T－ALL患，虽然膜cCD3阴性，而胞浆cCD3均为阳性；13例B－ALL患中，9例cCD22阳性。对5例B－ALL检测了cCD79a，结果全部阳性。38例急性白血病（AL）患中，18例表达1个系列以上的膜标记；在21例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患中，8例表达CD7；17例ALL中，7例CD13阳性。经胞浆抗原检测后，只有2例分别符合双表型和混合型AL特点，提示cCD3,cCD22,cCD79a和cMPO为系列特异性标志，对诊断及鉴别双表型或双克隆AL尤为重要。     

流式细胞术检测狼疮患者白细胞分化抗原40配体

目的　了解在系统性红斑狼疮（ Ｓ Ｌ Ｅ） 患者血液中辅助性 Ｔ细胞（ Ｔｈ） 与 Ｂ 细胞间的白细胞分化抗原（ Ｃ Ｄ）４０ Ｃ Ｄ４０ 配体（ Ｌ） 的共刺激作用。方法　用抗 Ｃ Ｄ３ 单克隆抗体（ 单抗） 刺激 Ｓ Ｌ Ｅ 活动期和缓解期各１０ 例患者外周血单个核细胞（ Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ） ,采用流式细胞术检测不同时段 Ｃ Ｄ４０ Ｌ 的表达水平,并与正常对照组比较。结果　活动期 Ｓ Ｌ Ｅ 组 Ｃ Ｄ４０ Ｌ 的表达在抗 Ｃ Ｄ３ 单抗刺激前后均显著高于正常对照组,差异均有非常显著意义;而缓解期 Ｓ Ｌ Ｅ 组 Ｔ 细胞在抗 Ｃ Ｄ３ 单抗刺激前的 Ｃ Ｄ４０ Ｌ 表达在正常范围内,在刺激后显著高于正常对照组,差异有非常显著意义。结论　 Ｃ Ｄ４０ Ｌ Ｃ Ｄ４０ 共刺激作用在 Ｓ Ｌ Ｅ发病机制和病程中起着重要作用。     

流式细胞术检测人类白细胞抗原-B27在诊断强直性脊柱炎中的价值

目的 探讨应用流式细胞术检测人类白细胞抗原-B27（HLA-B27）对临床强直性脊柱炎（AS）的诊断价值.方法 应用流式细胞仪检测947例临床疑似AS患者的T淋巴细胞上的HLA-B27抗原,采用流式细胞仪（FCM）自带的数据获取与分析软件获取数据并进行分析.结果 947例患者HLA-B27抗原阳性率为44.8%,男女比例为4.3∶1,其中95.6%HLA-B27抗原阳性的患者确诊为AS.结论 利用流式细胞术检测HLA-B27有助于AS的诊断,检测快速,特异性、稳定性均较好.     

PCR-ELOSA方法检测RhD血型的研究

目的　建立一种产前RhD血型基因诊断的方法 ,评价其在临床应用的可行性。方法　采用PCR ELOSA(Enzyme linkedOligonucleatide)寡核苷酸探针捕获方法 ,对 4 89例供血者外周血DNA标本进行RhD基因的扩增 ,同时以RhCE基因为内对照 ,PCR产物用微孔板杂交后经酶标仪检测 ,依各孔OD值判断结果。结果　 4 89例供血者外周血DNA标本 ,2 2例符合RhD(- )判断 ,4 6 7例符合RhD(+)诊断 ,与血清学方法比较 ,该方法对RhD(- )标本的诊断符合率为 95 .6 5 % ,对RhD(+)标本的诊断符合率为 10 0 % ,假阳性率为 4 .35 %。结论　PCR ELOSA方法检测RhD血型 ,灵敏度高 ,特异性强 ,与血清学方法诊断符合率接近 ,可应用在产前诊断     

流式细胞术和血清学方法检测HLA-B_(27)抗原的初探

HLA-B27抗原的表达与强直性脊柱炎(ankyloasing spondylitis,AS)有高度相关性(相对危险因子RR=87.4),超过90%的AS患者其HLA-B27抗原表达为阳性[1].对疑似AS患者进行HLA-B27检测,已成为临床重要的辅助诊断手段.我室已采用常规的微量淋巴毒试验[2～4](血清学法)进行了2000多例HLA-B27分型.近来笔者应用流式细胞术[5] (流式法,FCM)进行HLA-B27抗原分型,并与血清学法结果进行比较,报告如下.     

流式细胞术应用于Kidd血型Jka抗原检测的建立

目的:建立流式细胞术鉴定Kidd血型Jka抗原的实验方法,并验证其准确性。方法:随机选取96(人)份无偿献血者血液样本,将红细胞与IgG性质抗-Jka混合孵育,随后结合荧光素Alexa Fluor 647标记的羊抗人IgG二抗,采用流式细胞术检测样本红细胞表面Jka抗原。通过流式细胞术获得每个样品的荧光直方图。利用血清学凝集试验比较衡量流式细胞术检测Jka抗原强度的准确性,利用PCR-SSP与基因测序分型验证流式细胞术检测Jka抗原阴阳性的正确性。结果:流式细胞术对于红细胞Jka抗原强度的检测与血清学鉴定结果相一致,血清学凝集强度越高,流式细胞术检测荧光强度也越高,Jka抗原强度也越高。流式细胞术检测灵敏度优于血清学方法,Jka抗原阳性包括弱阳性样本与阴性样本的荧光强度差别很大,极易区分。全部样本流式细胞术检测结果与基因分型结果完全一致,证实了流式细胞术的准确性。结论:成功建立了流式细胞术鉴定红细胞Kidd血型Jka抗原的方法,灵敏度优于传统的血清学方法,可以准确区分不同强度的Jka血型抗原。     

流式细胞仪检测白细胞胞浆内抗原髓过氧化物酶的实验研究及其应用

目的评价流式细胞仪检测胞浆内抗原髓过氧化物酶（MPO）的方法,探讨实验中各因素对检测结果的影响。方法以HL-60细胞为模型,多参数流式细胞仪分析,比较FACS、Fix＆Perm、Fixation＆Permeabiliza-tion 3种破膜剂处理及不同处理时间、不同荧光染料对实验结果的影响。检测正常人和急性白血病患者的MPO表达情况。结果FACS破膜剂对细胞的前向散射角/侧向散射角（FSC/SSC）影响最小,相对荧光强度（RFI）明显高于其他两者。3种破膜剂在破膜时间15 min时均可达到最佳效果。藻红蛋白（PE）标记的MPO抗体在荧光强度上明显优于异硫氰酸荧光素（FITC）。41例初发急性白血病患者和20例非白血病患者骨髓检测结果证实,MPO为急性髓系白血病诊断中最为敏感的髓系抗原。结论流式细胞仪检测MPO的标准推荐方法：应用FACS破膜剂15 min,标本必须当天完成检测,尽量采用PE标记的MPO抗体。MPO对急性白血病的诊断和分型非常重要。     

流式细胞仪检测白细胞髓过氧化物酶的方法研究

目的 评价流式细胞仪检测胞浆内抗原髓过氧化物酶(MPO)的方法,探讨实验中各因素对检测结果的影响.方法 以HL-60细胞为模型,多参数流式细胞仪分析,比较3种不同破膜剂处理及不同处理时间,标本不同放置时间,不同荧光染料对实验结果的影响.结果 比较FACS、Fix & Perm、Fixation&Permeabilization 3种破膜剂,得出FACS破膜剂对细胞的前向散射角/侧向散射角(FSC/SSC)影响最小,相对荧光强度(RFI)明显高于其他两者,效果最佳.3种破膜剂均在破膜时间15 min时可达到最佳效果.标本放置在室温条件下,12 h内应对其进行处理,至24 h细胞已出现部分死亡,将影响实验结果的正确性.PE荧光的MPO在荧光强度上明显优于FITC荧光,因此推荐在条件允许的情况下,尽可能地选用PE荧光的MPO抗体.结论 流式细胞仪检测MPO的推荐方法:调整样本细胞数,应用FACS破膜剂15 min,标本必须当天完成检测,尽量采用PE标记的MPO抗体.     

流式细胞术检测单个淋巴细胞内细胞因子表达及其临床应用

目的　寻找一种准确、敏感的检测 T淋巴细胞内细胞因子水平的方法 ,为研究 T细胞极化状态在疾病发生发展过程中的作用提供可靠的手段。　方法　用 PMA、 ionomycin作刺激剂 ,刺激全血中淋巴细胞表达细胞因子 ,以 mon-ensin阻断细胞因子分泌至胞外 ,应用两种免疫荧光抗体同时标记淋巴细胞的膜表面特异的分子和表达并被阻滞在胞内的细胞因子 ,然后用流式细胞仪进行检测和分析。　结果　本方法检测 1 8例正常人淋巴细胞的分泌细胞因子水平 ,其中CD4 + T淋巴细胞中 Th1占 1 9.5 1 %± 4 .96% ,Th2占 1 5 .66%± 3.95 % ;CD8+ T淋巴细胞中 Tc1占 1 6.2 2 %± 1 .78% ,Tc2占 9.2 0 %± 1 .96% ;而 1 2例妊高征孕妇的 Th1、Tc1百分比例明显高于正常人 ( P<0 .0 1 ) ,Th2的比例显著低于正常人( P<0 .0 1 )。　结论　双抗体标记流式细胞仪检测法可以客观、准确地检测淋巴细胞表达细胞因子的水平 ,判断 T淋巴细胞的极化状态。妊高征患者与正常人相比存在 T淋巴细胞的极化水平异常 ,可能与妊高征的发生发展有关     

流式细胞仪法用于血小板相关抗体检测和血小板交叉试验

目的 应用流式细胞仪(FCM)进行血小板相关抗体检测和血小板交叉试验。方法 利用血小板抗体阳性、阴性血清探寻FCM法实验条件,血小板经血清致敏,洗涤后,加入荧光标记鼠抗人IgG反应,由FCM获取和分析。52人次正常人血清经FCM法检测后,统计界定正常值范围。1份阳性血清经9个稀释度倍比稀释,分别用FCM法和固相ELISA抗体筛选法检测。31名临床血小板输注无效患者分别用FCM法和抗原捕获酶免分析法(MACE)进行102人次血小板交叉配合试验。结果 FCM法检测正常值为荧光强度比值R<1.156,9个稀释度的阳性血清检测表明,FCM法最高可检稀释度为86.67,固相ELISA法最高可检稀释度为56.34(抗-HPA)和67.25(抗-HLA)。102人次血小板交叉结果显示,FCM法和MACE法无显著性差异(P>0.05)。结论 FCM法可用于血小板相关抗体检测和血小板交叉配血,是一种快速、灵敏的新方法。     

流式细胞术检测活化血小板

建立了流式细胞术检测活化血小板的方法并作了方法学方面的探讨，同时比较了几种抗活化血小板特异性单克隆抗体的特点。实验结果表明：该法结果准确，特异性和灵敏度高，能检出２％以上的活化血小板，并可反映单个或亚群血小板质膜上活化抗原的变化，为研究血小板活化提供了一种新方法。     

应用流式细胞仪检测强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原的表达及临床应用价值

目的:探讨人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的表达对强直性脊柱炎(AS)患者的临床诊断价值。方法:应用流式细胞仪法对328例AS患者1、113例腰背腿疼患者和40例健康体检人员进行了HLA-B27抗原检测。结果AS患者、腰背腿疼患者和健康体检人员HLA-B27抗原阳性率分别为90.2%(296/328)、12.5%(139/1113)和7.5%(3/40);AS患者中男性患者阳性率95.9%,女性患者阳性率77.8%,两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论AS与HLA-B27抗原有高度的疾病相关性,检测HLA-B27对AS的早期诊断、鉴别诊断和治疗都具有重要的临床价值。     

强直性脊柱炎患者应用流式细胞术检测HLA—B27的临床意义

目的分析强直性脊柱炎与人类白细胞相关抗原B27（HLA—B27）的相关性,为临床诊断提供参考。方法应用流式细胞术检测强直性脊柱炎患者的HLA—B27阳性率,并与正常对照组比较。结果强直性脊柱炎患者的HLA—B27阳性率为91．1％（其中男性93．9％,女性85．7％）,而健康对照组为4．2％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA—B27与强直性脊柱炎强相关,检测HLA—B27对于强直性脊柱炎的早期诊断、鉴别诊断具有重要的临床价值。     

Toll样受体4在冠心病患者外周血细胞的表达检测及临床意义

目的探讨Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)在外周血白细胞上的表达及其表达差异在动脉粥样硬化中的意义。方法采用流式细胞术检测50例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者及40名健康对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上TLR4的表达;全自动生化分析仪测定所有入选者血脂水平。结果TLR4在外周血淋巴细胞和中性粒细胞的阳性率平均值低于5%;单核细胞的TLR4阳性率在冠心病组为(55.11±16.30)%,显著高于健康对照组的阳性率(42.91±15.70)%(P<0.01);而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4阳性率无统计学意义[(54.16±14.60)%;(56.41±18.30)%,P>0.05]。结论TLR4主要表达于外周血单核细胞,在动脉粥样硬化患者中其阳性率升高;而且TLR4的阳性率高低与患者血脂正常与否无关;TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性。