大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的　观察大黄素(emodin)对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用特点及量效关系,并观察大黄素对骨保护蛋白(Osteoprotegerin,OPG)mRNA表达的影响。方法　在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,加药后 1、2、3d用MTT法检测细胞增殖, 3、5、7、9d用PNPP法检测细胞内碱性磷酸酶含量,加药后 7d检测细胞内OPGmRNA表达的量, 24d检测细胞上清中钙和细胞内羟脯氨酸含量。结果　大黄素能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性,实验中最佳作用浓度为 1×10-6 mol·L-1,最佳作用时间是 7d。大黄素能增加细胞内羟脯氨酸含量,促进OPGmRNA的表达。结论　大黄素可促进成骨细胞分化,增加OPGmRNA的表达。     

巴戟天对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

目的：观察巴戟天对体外培养成骨细胞(OB)增殖及其活性的影响，探讨巴戟天补肾壮骨作用的实质。方法：取新生SD大鼠头盖骨提取成骨细胞，进行生长曲线分析，测定巴戟天对细胞增殖及分泌ALP、BGP、TGF-β1的影响。结果：巴戟天能显著刺激OB增殖；巴戟天与密钙息均可促进分化中的OB分泌ALP和骨钙素，促进OB表达TGF-β1。结论：巴戟天具有与密钙息相同的作用，即促进OB分泌ALP和骨钙素，促进OB表达TGF-β1mRNA，从而大量分泌Ⅰ型胶原，以利钙盐沉积。     

大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞的分离纯化与比较研究

目的探讨大鼠颅骨中骨细胞和成骨细胞的分离纯化方法,并分别比较细胞形态、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和成骨特异性蛋白的表达情况。方法分别采用序列酶消化和EDTA螯合法,从SPF级新生SD大鼠的颅骨中分离培养骨细胞和成骨细胞,对其进行HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、骨钙素(BGP)免疫荧光染色;采用偶氮偶合法对两种细胞ALP进行染色,并检测其活性;应用蛋白质印迹(Western blot)检测两种细胞的Ⅰ型胶原和BGP的表达量。结果细胞形态学观察及HE染色表明,骨细胞多呈星状或树枝状且有较多突触,而成骨细胞呈长梭形且突触较少;Ⅰ型胶原免疫组化染色与Western blot结果表明,Ⅰ型胶原在成骨细胞中表达量较高,呈棕黄色,骨细胞中表达量较低;而BGP免疫荧光染色与Western blot显示,成骨细胞中BGP表达较低,而在骨细胞中表达较高,细胞荧光染色与HE染色结果相似;ALP染色结果表明,ALP在成骨细胞中表达较高,骨细胞中表达较低;ALP活性检测与ALP染色结果相似。结论采用序列酶消化及EDTA螯合法,可以从大鼠颅骨中分离得到较纯的骨细胞及成骨细胞,利用HE染色、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot等技术,可以对骨细胞和成骨细胞进行分离纯化与研究。     

非病毒载体携带Cbfa1诱导成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:观察核心结合因子a1(Cbfa1)对成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞定向分化的诱导作用。方法:经密度梯度离心法和贴壁筛选法获得hBMSCs。非病毒载体FuGene HD携带Cbfa1转染hBMSCs后7、14d,经Real-time PCR分析hBMSCs成骨细胞标志基因表达,包括Cbfa1、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原;培养1、2和3周,ALP染色、钙结节染色检测成骨分化。结果:培养的hBMSCs阳性表达CD73,阴性表达CD34。第3代细胞增殖曲线呈"S"形,符合对数生长曲线。Cbfa1转染hBMSCs表现出与成骨细胞相似的形态,成骨细胞标志基因ALP、OC、OPN和Ⅰ型胶原的表达均明显上调,ALP染色阳性,并且有明显的钙结节形成。结论:非病毒载体携带Cbfa1转染hBMSCs可诱导其向成骨细胞分化。     

补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究

目的比较研究中药补骨脂中两种重要组分——补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat cal-varial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响。方法取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养。以1×10-5mol.L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况。West-ern blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素。结论异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。     

淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Cbfa1基因表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞功能及对转录因子核心结合因子a1（Cbfa1）mRNA表达的影响,探讨淫羊藿甙抗骨质疏松的作用机制。方法用酶消化法获得新生（〈24 h）SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行体外原代培养。将不同浓度的淫羊藿甙（1,10,100 ng/ml）分别加入培养液中,观察成骨细胞的形态、增殖和分化功能。用RT-PCR法测定成骨细胞Cbfa1、碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA表达水平的变化。结果 1、10和100 ng/ml淫羊藿甙均可促进Cbfa1、ALP和ColⅠmRNA表达（P〈0.05）,且以10 ng/ml组作用最显著。结论淫羊藿甙能促进体外培养成骨细胞增殖与分化,通过提高成骨细胞转录因子Cbfa1的基因表达水平诱导骨形成,是其抗骨质疏松作用机制之一。     

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号传导通路的影响

目的研究外源性转移生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活作用,观察鬼针草总黄酮(total flavonoids of Bidens Bipinnata L,TFB)对HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响,以探讨TFB抗肝纤维化的作用及分子机制。方法采用Collagenase Ⅳ胶原酶原位肝灌注法分离HSC,MTT法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC增殖的作用,ELISA法检测HSC自分泌TGF-β1和产生Ⅰ型胶原的影响;RT-PCR法观察分析TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原基因表达的影响;Westernblot法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2蛋白表达的影响。结果TGF-β1明显促进HSC增殖、自分泌TGF-β1和产生胶原,促进HSCsmad2、Ⅰ型胶原mRNA及smad2蛋白的表达,明显抑制smad7mRNA表达(P<0.05),TFB作用后,TGF-β1刺激的HSC中smads2mRNA、蛋白和Ⅰ型胶原mRNA表达受到抑制,smad7mRNA表达明显上调。结论TFB抗肝纤维化作用可能与其阻断HSCTGF-β1通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。     

重组腺病毒Ad-hBNP对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡因子及Ⅱ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察外源基因人B型利钠肽对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法 30只慢性心力衰竭模型大鼠,随机分为携带人B型利钠肽基因重组腺病毒组(Ad-hBNP组,14只)、重组空白腺病毒组(Ad-Track组,8只)、生理盐水组(NS组,8只),分别给予腹腔注射人B型利钠肽基因重组腺病毒、重组空白腺病毒及生理盐水1mL,每周1次,共4周。另设10只未造模但实行了假手术的大鼠为假手术组;4周后处死大鼠,行RT-PCR检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA含量。结果 Ad-hBNP治疗后,Ad-hBNP组大鼠心肌组织Bcl-2mRNA表达较Ad-Track组及NS组升高;BaxmRNA表达较假手术组升高;Caspase-3mRNA表达较Ad-Track组、NS组及假手术组均升高。Ad-hBNP组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较Ad-Track组降低。结论间断给予Ad-hBNP能够影响慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡相关基因的表达,减少心肌细胞间质Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。     

低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响

目的从牛骨制备低分子多肽,并观察其对体外培养新生大鼠的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原,超滤法得到相对分子质量(Mr)10000以下的牛骨多肽,经Sephadex G-10脱盐,浓缩后用Tricine-SDS-PAGE电泳对Mr进行检测。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定牛骨多肽对成骨细胞增殖的影响,ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性,RT-PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达。结果建立了牛骨多肽的制备方法。低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著(P>0.05),高浓度具有显著的增殖作用(P<0.05),并呈现出剂量依赖性;中、高浓度(50~400μg/mL)牛骨多肽组可提高成骨细胞ALP的活性(P<0.05),低浓度组(10μg/mL)提高ALP的活性不显著(P>0.05);牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达。结论牛骨多肽的制备工艺简单,适合规模化生产;牛骨多肽能促进成骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达。     

骨金散对去卵巢大鼠Ⅰ型胶原交联N-端肽、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的：复制去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨中药骨金散对去卵巢雌性大鼠血清Ⅰ型胶原交联N-端肽（NTX）和骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法：6月龄雌性SD大鼠40只,随机分为去势组和假手术组。去势组切除双侧卵巢,假手术组切除部分脂肪。大鼠去势后1个月,将去势组随机分为3组：模型组、雌激素组和骨金散组,雌激素组每日灌服己烯雌酚0.05m g/kg,骨金散组按1.8g/kg剂量灌服骨金散,其余各组灌服等量生理盐水。2个月后,酶联免疫吸附法测量血清碱性磷酸酶（ALP）、NTX水平,RT-PCR方法检测右侧股骨骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果：与假手术组比较,模型组血清ALP、NTX含量明显升高（P〈0.01）,Ⅰ型胶原mRNA水平显著下降（P〈0.01）。雌激素组和骨金散组大鼠体内的ALP、NTX水平显著低于模型组（P〈0.01）,骨金散组大鼠体内的ALP水平高于雌激素组（P〈0.05）。雌激素组和骨金散组实验大鼠骨组织中Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达含量明显高于模型组（P〈0.01）。结论：骨金散可减轻去卵巢大鼠ALP、NTX水平的提高,上调骨组织Ⅰ型胶原mRNA的表达水平,这可能与其治疗骨质疏松的机制有关。     

卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化和Ⅰ型胶原基因表达水平影响。方法在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、RT-PCR的方法观察卡托普利对MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果 10-11 mol.L-1浓度的卡托普利作用24 h能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,作用3 d能明显促进MC3T3-E1细胞表达碱性磷酸酶。卡托普利可刺激MC3T3-E1细胞表达Ⅰ型胶原,以10-11 mol.L-1作用最强。结论卡托普利有促进MC3T3-E1细胞增殖、促进碱性磷酸酶表达和增加Ⅰ型胶原mRNA表达的作用。     

高糖环境中吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用及其机制

目的观察高糖环境下吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用并探讨其可能机制。方法高糖(22.5 mmol·L~(-1))环境培养MC3T3-E1细胞,分为对照组,吡格列酮2.5、5、10μmol·L~(-1)组,干预24、48 h。检测细胞增殖活性、凋亡率、骨钙素和碱性磷酸酶(ALP)分泌水平,以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)和骨形态蛋白2(BMP-2)mRNA的表达水平。并分析PPARγ、Runx2的表达与骨钙素、ALP、BMP-2的相关性。结果在相同干预时限,吡格列酮各组MC3T3-E1成骨细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌水平、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均低于对照组,凋亡率和PPARγmRNA的表达高于对照组(P<0.05)。随吡格列酮浓度增加,细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均降低,而细胞凋亡率和PPARγmRNA的表达增高(P<0.05)。与干预24 h相比,干预48 h时相同浓度吡格列酮组细胞增殖活性,骨钙素和ALP的分泌水平,PPARγ、Runx2、BMP-2 mRNA的表达或无变化或略增加。结论高糖环境下吡格列酮对成骨细胞有损害作用,促进PPARγ表达、抑制Runx2的表达可能为其作用机制之一。     

吗啡对体外培养正常女性成骨细胞的增殖及BGP mRNA表达的影响

目的:观察阿片类药物是否对体外培养正常女性成骨细胞增殖有影响。方法:用胰酶-胶原酶消化法从正常女性松质骨中分离培养成骨细胞,用茜素红染色法、改良Gomonri钙钴法鉴定成骨细胞;制备不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮,作用于体外培养的成人正常成骨细胞上,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吗啡对其的影响;通过RT-PCR法半定量分析不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮对成骨细胞骨钙素(BGP mRNA)表达的影响。结果:用酶消化法分离的人成骨细胞,在体外培养时可合成碱性磷酸酶(ALP)、形成钙化结节。不同浓度的吗啡组与对照组OD490(optical density,OD)值相比差异有显著性(P<0.001);1×10-7mol·L-1、1×10-6mol·L-1、1×10-5mol·L-1和1×10-4mol·L-1吗啡组的细胞增殖速度依次降低(P<0.001);而吗啡(10-5mol·L-1)+纳洛酮(10-5mol·L-1)组与对照组OD490值相比差异不明显(P>0.05)。吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制BGPmRNA的表达。结论:用酶消化法进行人成骨细胞培养,简捷易行,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用;外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人成骨细胞的增殖。阿片类物质可以抑制成骨细胞内BGP mRNA的表达。     

淫羊藿总黄酮对体外培养骨细胞功能的影响

目的 :观察淫羊藿总黄酮 (HEF)对体外培养成骨细胞以及破骨细胞功能的影响。方法 :分别用酶消化法和体外机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞、破骨细胞 ,在培养液中分别加入不同浓度的HEF ,观察成骨细胞的增殖功能、分化功能和矿化功能。以抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目、形态 ,Image ProPlus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的数目和面积。结果 :增殖率测定HEF浓度为 10 - 4mol·L- 1时与对照组比较差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;碱性磷酸酶活性浓度≥ 10 - 8mol·L- 1,差异有显著意义 ;矿化结节面积/孔HEF 10 - 10mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比均增加(P <0 .0 1)。骨片培养 3d ,吸收陷窝计数的结果显示 ,各浓度对破骨细胞吸收功能均有抑制作用 ,仅10 - 4mol·L- 1组有统计学意义 (P <0 .0 5 )。陷窝面积 10 - 10 mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比 ,均无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 :HEF可以通过影响成骨细胞增殖、分化、矿化促进骨形成 ;而在体外减少破骨细胞数目 ,减弱破骨细胞吸收功能。     

染料木素促成骨样细胞增殖作用及其机制研究

目的观察染料木素(genistein)对成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖及骨形成蛋白-2(BMP-2)、β-连环素(β-catenin)表达的影响。方法培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的染料木素(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol·L-1),以1×10-9mol·L-1雌激素(β-estradiol,E2)作为阳性对照组,采用MTT比色试验法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,观察染料木素作用后MC3T3-E1的增殖及分化情况,以Westernblot方法检测成骨样细胞中BMP-2和β-catenin蛋白的表达。结果染料木素可促进MC3T3-E1细胞增殖,染料木素作用后细胞的ALP值也明显升高,呈浓度依赖性;染料木素可增加BMP-2和β-catenin表达,且呈浓度依赖性。结论染料木素促进MC3T3-E1细胞增殖与分化,可通过调节BMP-2和Wnt/β-catenin信号通路而影响成骨样细胞的活性。     

蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。     

葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响

目的 研究葛根素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rats osteoblast,ROBs)增殖和分化及cAMP/PKA信号通路的影响.方法 体外分离培养ROBs,观察不同浓度(1×10-4～1 ×10-8 mol/L)葛根素对ROBs增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响;分析葛根素对骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP-2)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、成骨特异性转录因子-2(Runx-2)和Oxterix mRNA表达水平的影响;观察1×10-6 mol/L葛根素对BMP-2、Col-Ⅰ、Runx-2、Oxterix、PKA和磷酸化PKA(p-PKA)蛋白表达水平,测定细胞中cAMP的变化.结果 细胞增殖结果显示1×10-7 mol/L ROBs细胞浓度高于对照组,1×10-4 mol/L组ROBs细胞浓度低于对照组(P＜0.01).1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L组ROBs ALP活性均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).1×10-6 mol/L葛根素处理ROBsRunx-2、Oxterix、BMP-2、Col Ⅰ mRNA和蛋白及p-PKA、cAMP表达水平均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 1×10-6 mol/L葛根素为促进ROBs增殖和分化的最适浓度,其可促进体外培养ROBs分化过程中cAMP/PKA信号通路的激活.     

大黄素对HT-29细胞IL-8分泌及NF-κB活化的影响

目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察HT-29细胞NF-κB核转位。结果大黄素在10～80mol.L-1能降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系;大黄素不同浓度组可抑制IFN-γ+LPS刺激造成的NF-κB激活,;有剂量依赖关系。结论大黄素能有效抑制IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌和NF-κB激活。     

西地那非促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化

目的研究西地那非对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow stromal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,贴壁筛选法培养rBMSCs,每3天换液1次,9d后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1的西地那非进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养后9d的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较西地那非组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取Total RNA,Real-Time PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果西地那非剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进成骨性分化,最佳药物浓度为1×10-5mol·L-1。该浓度下的西地那非可明显增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨相关的转录因子Runx-2与Osterix mRNA的表达,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌。结论浓度为1×10-5mol·L-1的西地那非可明显促进rBMSCs的成骨性分化,提示西地那非在具备其他药理作用的同时,也有较强的抗骨质疏松活性,具备开发为抗骨质疏松药物的潜力。