铁皮石斛花粉活力与种质创制研究

目的:为铁皮石解杂交育种与野生资源保护提供基础.方法:采用过氧化物酶法测定不同花期与不同贮藏条件的花粉活力;在温室大概设施栽培条件下开展杂交、自交、自由授粉,野外昆虫辅助授粉.结果:铁皮石斛有活力花粉比例花蕾期为29.4%,开花当天为70.6%,开花后1周为31.9%,直至花谢花粉仍有活力;离体干燥条件下4℃贮藏20 d后有活力花粉比例仍有21.2%;人工授粉杂交结实率达82.6%,自交结实率7.3%;野外昆虫辅助授粉与温室大棚设施栽培条件下自由授粉结实率均为0.结论:铁皮石斛花粉在整个花期均有活力,石斛花构造的特殊性导致自由授粉与野外昆虫辅助授粉均结实困难,人工杂交授粉是铁皮石斛野生资源的保护与种质创制的有效途径.     

桔梗柱头、花粉活力及自交亲和性研究

目的：为桔梗栽培及品种选育提供基础数据。方法：田间定株、定花观察及人工去雄套袋授粉；花粉活力采用TTC染色法。结果：桔梗柱头寿命长达9 d,但最佳授粉期为花冠开裂后4～6 d,柱头呈微裂或明显裂开状态。花药开裂散粉在开花当天完成,开始散粉时花粉活力81.4%,3 d后花粉活力降为27.6%,干燥剂中贮藏第3天花粉活力仍达64.4%。桔梗天然自花交结果率只有4.8%；但花期人工自株交结果率达62.7%,亲和指数达54.6,蕾期人工自株交结果率12.8%,亲和指数6.5。结论：雌雄蕊异熟及花粉寿命较短导致桔梗天然自花交结实率很低,采用人工授粉,桔梗花期自株交高度亲和；干藏方法可以较好延长桔梗花粉寿命。     

桔梗雄性不育材料的发现与鉴定

目的寻找并确定桔梗雄性不育材料。方法田间发现花药异常桔梗,进行自然授粉、人工辅助授粉和套袋自交处理,分别单收考种。结果发现6株花药异常的桔梗,其中3株花药瘦瘪或不裂药,自交结实率0%,不育度100%,雌蕊正常,自然授粉和人工辅助授粉皆能正常坐果结籽,种子发育良好。结论桔梗雄性不育株的发现,为桔梗种质资源杂交优势的利用开辟了新的途径。     

基于ITS序列的中国药用石斛及其混伪品的分子鉴定

目的:通过测定17种药用石斛的rDNA ITS全序列,构建分子系统树,在分子水平对待检种进行鉴别,为石斛的分子鉴定提供依据.方法:采用改良的CTAB法提取石斛叶片DNA,PCR扩增rDNA ITS区全序列,产物回收纯化后直接测序,运用Bioedit,MEGA 4.0等软件分析石斛属植物的rDNA ITS序列的特征.结果:建立了17种药用石斛rDNA ITS区碱基全序列数据库,其中,ITSl的长度为228～234 bp,GC量为45.7%～53.0%,变异位点167个,占总位点67.34%,信息位点106个,占总位点42.74%;ITS2长度为241～247 bp,GC量为44.8%～55.7%,变异位点165个,占总位点66.27%,信息位点115个,占总位点46.18%.属间的遗传距离为0.295,石斛种间的平均遗传距离为0.142,种内各居群间的平均遗传距离为0.002.结论:利用17种石斛的全序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种rDNA ITS区进行序列测定,可以在分子水平对石斛不同种质进行鉴别,为石斛的分子鉴定提供依据.     

朝鲜白头翁开花与繁育特性研究

通过田间定位观察,采用室内检测、套袋实验、人工授粉等方法,对朝鲜白头翁开花习性和繁育系统进行了研究。研究结果表明朝鲜白头翁4月上旬左右开花,花期25 d左右,单花花期约10 d;雄蕊先于雌蕊成熟,花后2～5 d花粉活力和柱头可授性均较强;杂交指数累计分值为4,花粉/胚珠比为412.5,结合授粉处理的结果认为朝鲜白头翁不存在无融合生殖,繁育类型为兼性异交,自交亲和,需要传粉媒介,天然异交率24.6%。推断朝鲜白头翁为常异花授粉植物,研究结果为今后朝鲜白头翁的栽培和品种选育提供理论基础。     

丹参授粉特性研究

目的探讨丹参的授粉特性。方法调查自然传粉及不同方式的人工辅助授粉,通过丹参结实率、千粒重等性状,研究丹参的授粉特性。结果自然传粉条件下丹参结实率62.2%,整个花序套硫酸纸袋后的平均结实率49.4%,单花套袋结实率为0,若辅以人工授粉结实率可达到80%。结论自然条件下,自花无法授粉的原因是花药和柱头的空间距离较远所致,而不是由于时间上雌雄蕊花期不遇或自交不亲和造成。     

蒙古黄芪传粉特性研究△

目的:研究蒙古黄芪的传粉特性,为蒙古黄芪的新品种选育和良种繁育提供依据.方法:以蒙古黄芪为试材,采用自由授粉和套袋自花授粉2种授粉方式,研究黄芪的传粉特性;并通过剥蕾自交和花期喷施NaCl溶液,研究克服蒙古黄芪自交不亲和性的方法.结果:2种授粉方式的蒙古黄芪的亲和指数差异明显,自由授粉、套袋自花授粉的亲和指数分别为1.26和0,可见蒙古黄芪为异花授粉植物.剥蕾自交后,蒙古黄芪亲和指数为0.37,表明剥蕾自交是克服蒙古黄芪自交不亲和性的有效方法.而花期喷施NaCl溶液处理后,蒙古黄芪亲和指数仍为0.结论:黄芪是自交不亲和的异花授粉植物,剥蕾自交是克服蒙古黄芪自交不亲和性的有效方法.     

紫堇的花部综合特征与繁育系统的研究

目的:通过研究紫堇的花部综合特征和繁育系统,来了解其生物学特性,为其人工培育提供理论基础。方法:通过野外观察,运用杂交指数、花粉-胚珠比、花粉活力和柱头可授性、人工授粉和套袋实验等研究方法,对安徽师范大学赭山校区荷园内紫堇自然种群的开花动态及繁育系统进行了研究。结果:紫堇在3—5月份开花,群体花期72 d,一个总状花序花期14～24 d,单花花期5～10 d。开花过程中柱头与花药无明显空间隔离现象,由花粉活力检测和柱头可授性观察,可知雌蕊先于雄蕊成熟。杂交指数(OCI)为3,繁育系统为自交亲和,有时需要传粉者;花粉-胚珠比(P/O)857.14,为兼性异交;人工套袋和授粉实验证明其繁育类型倾向于自交。结论:紫堇的花部自身结构和传粉昆虫单一可能对结实率有一定的影响。     

蒙古黄芪传粉特性研究

目的：研究蒙古黄芪的传粉特性,为蒙古黄芪的新品种选育和良种繁育提供依据。方法：以蒙古黄芪为试材,采用自由授粉和套袋白花授粉2种授粉方式,研究黄芪的传粉特性;并通过剥蕾自交和花期喷施NaCl溶液,研究克服蒙古黄芪自交不亲和性的方法。结果：2种授粉方式的蒙古黄芪的亲和指数差异明显,自由授粉、套袋自花授粉的亲和指数分别为1．26和0,可见蒙古黄芪为异花授粉植物。剥蕾自交后,蒙古黄芪亲和指数为0．37,表明剥蕾自交是克服蒙古黄芪自交不亲和性的有效方法。而花期喷施NaCl溶液处理后,蒙古黄芪亲和指数仍为0。结论：黄芪是自交不亲和的异花授粉植物,剥蕾自交是克服蒙古黄芪自交不亲和性的有效方法。     

不同真菌对2种药用石斛种子共生萌发的效应

兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum和齿瓣石斛D.devonianum均为传统中药材,有着极高的药用价值。研究利用3种从不同兰科植物中分离得到的内生真菌在不同光照条件下与这2种石斛植物种子在树叶、松树皮和椰糠混合基质上进行共生萌发试验。研究结果表明,胶膜菌属Tulasnella FDaI7菌株及瘤菌根菌属Epulorhiza FDd1菌株分别能有效地促进兜唇石斛和齿瓣石斛种子的萌发及幼苗建成,石斛与真菌存在共生专一性。共生培养60 d,接菌FDaI7的兜唇石斛种子,原球茎或幼苗形成率分别为14.46%,12.07%;接菌FDd1的齿瓣石斛种子,二者形成率分别为44.36%,42.91%。在2种光照条件下,已形成的原球茎均能够进一步发育为幼苗,而持续黑暗条件会导致幼苗白化或畸形。研究结果为2种石斛的野外回归奠定了理论基础,也为这2种药用石斛人工仿生态栽培的种苗扩繁提供了新的方法。     

丹参生殖生物学特性研究

目的　本文通过对大田丹参开花习性、花粉形态、花粉活力、传粉方式等生殖生物学特性的研究观察 ,弄清楚了丹参开花动态特性及其传粉方式 ,为中药材规范化生产质量管理 (GAP)建立丹参规范化栽培(SOP)提供理论依据。方法　在丹参花期定株定点观察其小花、整个花序开放时间 ,及小花花序开放时间对结实率的影响。取新鲜花粉粒用 0 .5 % TTC染色观察各个时期花粉活力 ;在花期对田间丹参分 10点、13点、17点三个时间点进行人工授粉 ,统计结实率 ;大田套袋计数自交结实率和自然结实率。结果　丹参的花粉活力在 80 %以上 ,授粉时间对丹参的结实率影响不大 ;丹参的自然杂交结实率为 75 .4 % ,自交结实率为 4 6 .16 % ,表明丹参为常异花授粉植物。结论　这些规律的研究 ,为丹参规范化栽培及良种繁育提供了理论依据     

柱前衍生HPLC分析铁皮石斛多糖中单糖组成的变异规律

通过采集铁皮石斛不同种质、年龄及近缘种的药材,采用柱前衍生HPLC法测定多糖中的单糖组成.结果表明,铁皮石斛与近缘种间,铁皮石斛种质与年龄间各种单糖的绝对量和相对量均存在显著的差异,其中甘露糖绝对峰面积,铁皮石斛近缘种间变幅为0.854×107～10.340×107,铁皮石斛种内为1.467×107～8.475×107,一至三年生样品分别为4.411×107 (2.577 × 107～6.516×107),5.528×107 (3.179×107～8.475×107),3.601×107(1.467×107～5.888×107);甘露糖与葡萄糖比值(相对峰面积),铁皮石斛近缘种间为0.976～16.599,种内为2.679～7.831,在供试样品中只有肿节石斛、报春石斛的相对峰面积与铁皮石斛重叠.研究结果揭示了铁皮石斛多糖中的单糖组成的变异规律,通过品种选育、采收期的控制可改变铁皮石斛中单糖的组分;利用铁皮石斛甘露糖与葡萄糖的相对峰面积可排除多数铁皮石斛混淆品,为铁皮石斛质量控制、资源培育提供依据.     

夏枯草繁育系统的初步研究

目的:对夏枯草的繁育系统进行初步研究.方法:对夏枯草的开花特性进行观察,测定单花期内夏枯草的花粉活力和柱头可授性,测定夏枯草的花粉-胚珠比和杂交指数,进行套袋实验测定夏枯草结实率并检验种子品质.结果:夏枯草单花花期为1～2 d,主茎花序的花期为7 ～14 d;夏枯草的花粉胚珠比为1 046±148.26,繁育系统为兼性异交;杂交指数为2,繁育系统为兼性自交;套袋实验结果表明,在没有昆虫传粉的情况下,有较高的结实率,且所结种子有较高的发芽率.结论:夏枯草的繁育系统为自交、异交混合型,自交亲和.     

党参交配系统及自花结实率低的初探

目的:为党参的栽培及常规育种提供帮助.方法:用TTC染色法和联苯胺-过氧化氢法测定各种质党参花粉活力和对应柱头的町授性;估算花粉-胚珠比、杂交指数的值;田间进行人工去雄、直接套袋传粉结实特性实验.结果:党参花粉在开花前2～3 d,花药未裂时即有很高的活力,达80%,到开花前1 d活力最高达95%;柱头在开花第1天具有最佳可授性,此时花粉活力下降,且柱头上的花粉大量散失,柱头活力持续到开花第3天;理论上估测党参各种质的花粉-胚珠比(P/O)达104.84～185.75,杂交指数(OCI)为4;党参去雄天然异交结实率达25.6%～42.4%,套袋自交的结实率达3.3%～6.7%,自交亲和指数达3.0～21.8.结论:结合P/O,OCI和传粉结实试验推测党参的交配系统为自交、异交综合特征并存,倾向于异交;自交亲和,雌雄蕊成熟期的不完全同步及柱头最佳可授期时柱头上白花的花粉量不足是导致党参自花结实率低的主要原因.     

几种人工栽培“枫斗类”石斛的多糖含量分析

目的:对比不同产地栽培铁皮石斛及其他3种"枫斗类"石斛药材的质量,为药用石斛资源的评价和开发利用提供依据和参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定不同来源石斛的多糖含量。结果:来自7个不同产地的人工栽培铁皮石斛多糖含量在24.32%-38.55%之间,以云南普洱样品多糖含量最高,贵州遵义样品多糖含量最低;采用植株分生苗栽培的齿瓣石斛多糖含量要高于组培苗栽培的样品;人工栽培不同品种石斛的平均多糖含量分别为:铁皮石斛29.30%、兜唇石斛50.12%、齿瓣石斛41.89%及晶帽石斛27.98%。结论:栽培在不同地区的铁皮石斛多糖含量有明显差异;以石斛多糖含量为指标,齿瓣石斛和兜唇石斛具有较大开发价值和应用前景。     

广金钱草生殖生物学探索

目的:考察广金钱草生殖生物学特征,为该药材的资源开发与利用提供参考。方法:通过野外观测、室内分析及人工套袋授粉等方法研究广金钱草的繁育系统、开花习性、传粉方式及花粉-胚珠比、杂交指数等生殖生物学特性。结果:广金钱草的花为两性花,开花高峰时间9:30~11:00,日开花数量随开花天数的变化近似于正态分布曲线,单花花期1~2 d,种群开花历时45 d;柱头在花即将开放到开后8 h内均具有可授性;花粉-胚珠比8 000±1 225;杂交指数4;人工套袋试验显示以自交为主,异交亲和;传粉昆虫为双翅目的蜂类和膜翅目的蝇类。结论:广金钱草繁育系统以自交为主,异交亲和,需要传粉者。     

多花黄精生殖特性研究

该文对多花黄精物候期,特别是花芽分化、开花时序、花部特征、花粉活力与柱头可授性、授粉方式等生殖生物学进行研究,结果表明:多花黄精展叶前即形成花序;野外自然状态下主要通过熊蜂等昆虫授粉,结实率达65.12%,室内单株隔离或硫酸纸袋套袋自交授粉结实率均为0,说明其自交不亲和;在浙江临安3月中旬至4月初开始出苗(气温大于7.5℃),3月底至4月中旬开始现蕾,4月中下旬陆续进入盛花期,4月底至5月中旬进入末花期,花期36～45 d,不同种源物候存在明显差异;花由花序轴基部向顶部开放,通常4～22个花序,每个花序(2～)4～10(～21)朵花,单株花期26～38 d;单朵花从现蕾到开放约20～25 d,授粉后2 d花即凋谢,子房逐渐膨大,若未授粉则持续开花3～5 d后凋谢;花发育时期与花粉活力、柱头可授性显著相关,花完全开放之日,花药聚拢于柱头时花粉活力最高,柱头伸出花被外且分泌黏液时可授性最强;果实和种子在10月份成熟,适度遮荫才能确保种子顺利完成发育周期。研究结果为多花黄精杂交育种和种子生产提供了基础。     

石斛不同种、不同药用部位中多糖含量测定

目的 测定不同种石斛及金钗石斛、马鞭石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛的不同药用部位中多糖的含量.方法 采用紫外-可见分光光度法.结果 不同种石斛茎中多糖含量为:球花石斛18.96 %,马鞭石斛24.89 %,金钗石斛20.49 %,报春石斛15.83 %,肿节石斛8.27 %,叠鞘石斛16.32 %,鼓槌石斛15.33 %,美花石斛28.28 %,兜唇石斛9.26 %;4种石斛不同药用部位多糖的含量:金钗石斛根15.36 %,茎20.49 %,叶22.30 %;马鞭石斛根17.56%,茎24.89 %,叶20.88 %;叠鞘石斛根9.48 %,茎16.32 %,叶17.42 %;鼓槌石斛根10.06 %,茎15.33 %,叶19.81 %.结论 该实验方法简便、快速、准确.各种石斛及其根茎叶中多糖含量均比较高,从资源的综合和可持续利用的角度考虑,建议可以全草入药;美花石斛、球花石斛、报春石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛、肿节石斛茎在进行药效研究的提前下,确认是否可以替代当前<中国药典>品种入药.     

铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究

目的:研究铁皮石斛种胚萌发和快速繁殖的组织培养技术,为铁皮石斛的繁殖建立最佳培养条件。方法:以成熟的铁皮石斛种胚为研究材料,以1/2MS为基本培养基,接种到含有不同植物生长物质BA(6-苄基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)组合及含有马铃薯提取液、香蕉提取物及活性碳的培养基上,诱导铁皮石斛种胚的萌发、原球茎增殖、分化及试管苗生根。结果与结论:添加20%马铃薯液有利于种胚的萌发,种胚萌发率为79.37%;BA 1.0 mg.L^-1和NAA 0.1 mg.L^-1最有利于原球茎增殖,培养基中添加2%活性碳原球茎增殖倍数高;NAA有助于试管苗的生根,不同含量NAA以0.5 mg.L^-1时试管苗平均根数最多和平均根长最长。     

11种药用石斛根的形态组织学研究

目的观察药用石斛根的内部结构,以期辅助鉴定生药石斛。方法利用形态组织学方法,对茎多肉质的束花石斛Dendrobium chrysanthum及其易混的玫瑰石斛D.crepidatum、报春石斛D.primulinum、重唇石斛D.hercoglossum、晶帽石斛D.crystallium;茎粗硬的流苏石斛D.fimbriatum及其易混的叠鞘石斛D.aurantiacumvar.denneanum;茎节或节间肿胀的棒节石斛D.findlayanum、杯鞘石斛D.gratiosissimum、肿节石斛D.pendulum和大苞鞘石斛D.wardianum共11种药用石斛根进行显微结构研究;对根横切面结构相似的流苏石斛和叠鞘石斛,配合进行了根被表面制片观察。结果根被细胞的形状及皮层厚度,中柱的木质部束数、导管的直径、髓的构成,晶体的类型与大小存在种间差异。流苏石斛和叠鞘石斛根被表面观结构不同。结论根的组织构造特征可用于药用石斛的辅助鉴别。