股动脉药物灌注治疗激素性股骨头坏死的实验研究

目的探讨股动脉药物灌注治疗实验性激素性股骨头坏死的机理。方法新西兰兔48只,耳缘静脉注射50μg/kg大肠杆菌内毒素(LPS),24h后重复,在第2次注射LPS后,臀肌注射甲基强的松龙(MP)3次,每次间隔24h。造模4周后随机分为动脉治疗组:经左侧股动脉注射尿激酶3万u和丹参注射液2ml;静脉治疗组:经耳缘静脉注射尿激酶3万u和丹参注射液2ml;对照组:经股动脉注射生理盐水4ml。在治疗后的1、2、3和4周,对股骨头标本分别进行HE染色、苏丹Ⅲ染色、纤维蛋白血栓染色和VEGF免疫组化染色。计数股骨头软骨下骨的空骨陷窝率、脂栓栓塞率、血栓栓塞率、VEGF阳性成骨细胞率、阳性软骨细胞率和阳性血管率,并进行统计学分析。结果动脉治疗比静脉治疗能更快、更有效的降低空骨陷窝率、脂栓栓塞率和血栓栓塞率,提高VEGF阳性成骨细胞率、阳性软骨细胞率和阳性血管率。结论股动脉灌注治疗股骨头坏死比静脉治疗更快速有效。其机理在于溶解血栓和脂栓,再通已经阻塞的血管,促进VEGF等细胞因子的分泌,从而加速股骨头的再血管化和再骨化进程。     

激素性和酒精性股骨头坏死组织形态学的比较研究

目的对激素性和酒精性股骨头坏死(ONFH)进行组织形态学比较研究。方法将13个坏死的股骨头按程序制成普通病理切片,进行HE、改良Masson染色,在光学显微镜下对ONFH的组织形态学进行定量分析,实验数据采用单因素方差分析统计处理。结果激素性ONFH组骨小梁面积、空骨陷窝率、脂肪细胞长径、新生骨小梁面积均低于酒精性ONFH组(P<0.05),而软骨成骨指数高于酒精性ONFH组(P<0.05);两组骨陷窝面积和长径、同源软骨细胞数、有效血管和无效血管数无显著性差异(P>0.05),但激素性ONFH组有效血管和无效血管数在数值上均高于酒精性ONFH组。结论激素性和酒精性ONFH的坏死表现形式不同,修复的方式也不同。     

激素性和酒精性股骨头坏死组织形态学的对比分析

目的比较分析激素性股骨头坏死和酒精性股骨头坏死的组织形态学特点。方法选取自2012-12—2013-12诊治的股骨头坏死26例,激素性股骨头坏死14例(激素组),酒精性股骨头坏死12例(酒精组),将同期行THA的6例股骨颈骨折(股骨头正常)作为对照组。将26例坏死股骨头及6例正常股骨头制备成病理切片标本进行HE染色、改良Masson染色,通过光学显微镜进行组织形态学定量分析。结果与对照组相比,激素组和酒精组同源软骨细胞数减少、骨小梁面积减小,而空骨陷窝率、骨陷窝面积及长径、软骨成骨指数、脂肪细胞长径、血管形成量及新生骨小梁面积等均高于正常水平,差异有统计学意义(P0.05)。激素组空骨陷窝率、骨小梁面积、新生骨小梁面积及脂肪细胞长径等均低于酒精组,而软骨成骨指数高于酒精组,差异有统计学意义(P0.05);2组在骨陷窝面积及长径、有效血管及无效血管数、同源软骨细胞数方面差异无统计学意义(P0.05)。结论酒精性股骨头坏死在组织形态学表现上更为复杂,坏死程度更加严重,在修复过程中也不同于激素性股骨头坏死。     

血管内皮细胞生长因子促进激素性股骨头坏死修复

[目的]探讨应用血管内皮细胞生长因子治疗激素性股骨头坏死的方法。[方法]新西兰兔30只，22只兔耳缘静脉注射马血清，臀肌注射醋酸泼尼松龙，制造激素性股骨头坏死动物模型。动物随机分为3组：A组：VEGF治疗组，B组：对照组，C组：正常对照组。治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体至股骨头。于治疗后5周，采用影像学方法观察股骨头结构变化，病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化。[结果]VEGF治疗组，X线及CT检查显示：模型股骨头结构变清晰，骨质破坏明显修复；HE染色结果：VEGF治疗组可见软骨细胞修复性增生，骨髓腔造血组织出现增生，栓塞的血管旁边出现新生的血管。[结论]VEGF治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复。     

激素性股骨头坏死病程中股骨头局部VEGF mRNA表达的变化及意义

目的：探讨激素性股骨头坏死病程中股骨头局部血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA）表达的变化及意义，方法：新西兰大白兔36只，随机均分成正常对照组和模型组，每组18只。模型组用内毒素加激素注射造成股骨头坏死。两组动物分别于造模后6、10、14周各处后6只行股骨头组织学检查和VEGFmRNA原位杂交观察。结果：光镜观察示模型组股骨头骨小梁变细、空骨陷窝增加，成骨细胞数量减少，这些表现随着时间的推移逐渐加重，软骨下血窦计数减少，各时段均低于正常组，差异有显著性意义（P＜0．05或P＜0．01）。原位杂交显示，模型组兔的股骨头6周时血管周围有VEGFmRNA阳性表达，10例时血管、成骨细胞的表达逐渐减少，14周时稍有所增加，结论：股骨头坏死后血管修复能力下降，血管内皮细胞的功能受到破坏影响，增加股骨头局部VEGF可能有助于股骨头坏死的修复。     

介入治疗激素性股骨头坏死血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的：观察股动脉药物灌注治疗实验性激素股骨头坏死过程中血管内皮细胞生长因子的表达，探讨介入治疗对骨坏死再血管化和再骨化的机理，方法：新西兰兔48只，利用Shwartman反应和大剂量甲基强的松龙造成兔股骨头坏死模型后，随机分为动脉组、静脉组和对照组。在治疗后的1、2、3和4周，观察股骨头VEGF阳性成骨细胞率，阳性软骨细胞率和阳性血管率，结果：动脉比静脉治疗能更快，更有率提高VEGF阳性成骨细胞率，阳性软骨细胞率和阳性血管率，结论：股动脉介入股骨坏死比静脉治疗更快速有效，其机理在于疏通已经阻塞的血管，促进VEGF等细胞因子的分泌从而加速股骨头的再血管化和再骨化。     

VEGFmRNA与BMP-2在非创伤性股骨头坏死中表达的研究

[目的]探讨非创伤性股骨头发生坏死后局部的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)mRNA与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenic proteins,BMP-2)表达的变化及其意义.[方法]收集经全髋置换术取下的非创伤性股骨头坏死的股骨头标本16例作为实验组,新鲜股骨颈骨折标本10例作为对照组.将股骨头自冠状面对半剖开,于坏死区、健存区各取1骨块,经固定、脱钙,制作切片,光镜、电镜观察其病理变化,并运用免疫组化及原位杂交技术分别对其BMP-2蛋白和VEGF mRNA表达情况进行检测.[结果]实验组组织结构紊乱,破碎,骨小梁稀疏、不完整,有大量的空骨陷窝,而对照组骨小梁相对较完整、排列整齐,骨小梁中的骨细胞清晰可见,核大,位于中央.实验组BMP-2蛋白和VEGF mRNA阳性表达的强度及面积均明显低于对照组,结果有统计学意义(P<0.05).[结论]非创伤性股骨头坏死股骨头局部的BMP-2及VEGF mRNA表达降低,极有可能是导致其自身修复能力不足的重要原因.     

股骨头钻孔液氮冷冻法建立山羊股骨头坏死模型

[目的]研究通过股骨头钻孔液氮冷冻法建立山羊股骨头坏死模型。[方法]12只山羊24髋随机法分配为实验组、对照组。实验组山羊采用股骨头钻孔液氮冷冻灌注法灌注山羊股骨头,对照组山羊采用股骨头钻孔灌注生理盐水法,术后80万IU青霉素连续抗感染3 d,干预2周后行影像学检查,分别行X线、三维CT、大体标本、组织学(HE染色)观察骨结构改变及空骨陷窝率,空骨陷窝率超过50%定义为骨坏死。[结果]山羊手术后完全苏醒后可完全负重站立行走。术后3 d山羊活动、饮食恢复至术前水平。术后山羊伤口干燥,未见明显渗血渗液以及炎症反应等。术后2周山羊X线及三维CT示:实验组股骨头骨小梁稀疏、钻孔通道周围可见明显骨质硬化;对照组骨小梁正常,钻孔通道周围未见骨质硬化。处死山羊后实验组与对照组标本大体形态未见明显改变,但实验组股骨头关节面软骨颜色变暗、光泽度下降。组织切片HE染色提示对照组空骨陷窝率(11.3±1.6)%<50%,实验组空骨陷窝率(59.2±5.2)%>50%,空骨陷窝率实验组明显高于对照组(P<0.05)。股骨头坏死造模成功率91.67%(11/12)。[结论]股骨头钻孔液氮冷冻法可以成功建立山羊股骨头坏死模型,此法安全、简单易行、周期短、造模成功率高,为进一步研究股骨头坏死保头治疗提供有力的途径。     

植入型丹参缓释剂治疗股骨头坏死的实验研究

目的研究丹参缓释剂植入股骨头内治疗股骨头坏死的效果.方法参照Rich等方法,用马血清、醋酸强的松龙复制家兔股骨头坏死的动物模型,造模8周后实验组(A组)将丹参缓释剂40 mg植入到右侧股骨头内.对照组(B组)用同样方法植入赋形剂40 mg.正常对照(C组).术后不同时间做X线摄片、ECT扫描、组织学及扫描电镜检查.结果 X线片示A组右侧股骨头骨密度增高,透光区较小,B组骨密度减低,有大小不等透光区;ECT扫描示A组静态放射性分布中等浓聚,而B组静态图像放射性分布呈炸面包圈样改变,欠均匀;组织学检查显示A组骨空陷窝率、血管数、骨髓腔内脂肪细胞直径较B组明显改善(P＜0.01);扫描电镜检查显示A组松质骨结构较规则,骨陷窝结构完整,部分骨板断裂,骨小管可见.B组结构紊乱不清,骨板断裂,骨陷窝少,骨小管消失.结论丹参缓释剂植入到坏死的股骨头模型内,能改善股骨头血供,促进坏死骨的吸收、修复与重建.为股骨头坏死这种新的治疗方法提供实验依据.     

股骨头缺血性坏死骨质含量与VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达的相关性研究

目的坏死骨的血管再生及骨修复能力与VEGF、bFGF与BMP-2多种生长因子关系密切,通过观察股骨颈骨折、创伤性及非创伤性股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的股骨头局部上述因子的表达变化,并与其组织病理学的骨质含量指标进行相关性分析,为进一步探讨ANFH的发病机制及临床针对不同病因进行个性化治疗提供实验依据。方法取59例人工全髋关节置换术患者自愿捐赠的股骨头标本进行观察。创伤性ANFH 22例(A组),Ficat分期:Ⅲ期13例,Ⅳ期9例。非创伤性ANFH 19例(B组),Ficat分期:Ⅲ期11例,Ⅳ期8例;其中激素性10例,酒精性7例,原因不明2例。新鲜股骨颈骨折18例(C组)。3组患者性别、年龄等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。采用双能X线骨密度仪测量股骨头负重区骨密度;大体观察组织病理学改变,HE染色光镜及扫描电镜下观察其病理变化,计算空骨陷窝百分比及骨小梁面积百分比,并采用原位杂交技术分别对其VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达进行检测。结果 A、B组骨密度均低于C组,B组低于A组,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B组股骨头形态不规则,光镜下见坏死区骨小梁稀疏、不完整,有大量空骨陷窝;健存区A组有较多纤维组织增生,B组髓腔内脂肪细胞增生、肥大。扫描电镜示A、B组大多骨细胞脂肪变性、坏死,骨基质内见脂肪细胞增生。C组均呈正常股骨头结构。A、B组空骨陷窝百分比均高于C组,骨小梁面积百分比均低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B组间仅空骨陷窝百分比差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组VEGF、BMP-2、bFGF mRNA阳性染色面积百分比及吸光度(A)值均明显低于C组(P<0.05);A组BMP-2、bFGF mRNA两指标均较B组高(P<0.05),但VEGF mRNA A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。上述各因子表达强度与骨密度、骨小梁面积百分比成正相关,而与空骨陷窝百分比成负相关。结论创伤性ANFH的股骨头修复能力强于非创伤性ANFH,创伤性与非创伤性ANFH股骨头局部VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达均降低。     

磷酸钙骨水泥/丹参缓释系统植入治疗股骨头缺血性坏死

目的探讨应用磷酸钙骨水泥，丹参缓释系统治疗早、中期股骨头缺血性坏死的效果。方法2000年5月-2005年6月，对48例（54髋）股骨头缺血性坏死患者行病灶清除、磷酸钙骨水泥，丹参缓释系统植入治疗。男32例（36髋），女16例（18髋）；年龄26～62岁，平均38．7岁。有烟酒史21例，接受激素治疗史15例，髋关节轻微扭伤史2例，余患者无明显诱因。病程2～32个月。按世界骨循环研究学会国际骨坏死分期标准，Ⅰ期9髋，Ⅱ期31髋，Ⅲ期14髋。采用95丹东成人股骨头缺血性坏死疗效评价标准进行评分，Ⅰ期患者平均76．94分，Ⅱ期平均62．38分，Ⅲ期平均55．64分。均经X线、CT或MRI检查，证实为股骨头缺血性坏死。术后随访观察疗效。结果患者术后均未发生下肢深静脉血栓、异物排斥反应等并发症，切口Ⅰ期愈合。48例均获随访22～73个月，平均42．5个月。采用上述疗效评价标准进行评分，Ⅰ期患者平均96．89分，Ⅱ期平均92．54分，Ⅲ期平均78．46分。优33髋，良17髋，可3髋，差1髋，优良率为92．6％。结论磷酸钙骨水泥，丹参缓释系统植入治疗股骨头缺血性坏死，在髓芯减压、死骨清除的基础上，提供了骨修复的力学支撑，避免了股骨头塌陷，同时通过中药的局部释放改善股骨头微循环，有利于股骨头的修复重建，手术创伤小、操作简便，适合于治疗早、中期股骨头缺血性坏死患者。     

Core decompression and implantation of calcium phosphate cement/Danshen drug delivery system for treating ischemic necrosis of femoral head at Stages Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ of antigen reactive cell opsonization

Objective: To introduce a new method using calcium phosphate cement/Danshen drug delivery system for treating ischemic necrosis of the femoral head and evaluate its curative effect.Methods: From May 2000 to June 2005, 48 adult patients (54 hips) with ischemic necrosis of the femoral head at Stages Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ of antigen reactive cell opsonization (ARCO) were treated with implantation of calcium phosphate cement/Danshen drug delivery system in the involved femoral head. The operation consisted of removal of the necrotic bone under weight-loading cartilage and the implantation of phosphate cement/Danshen drug delivery system, and all manipulations were made percutaneously through a bone tunnel in the trochanter. The functions of the hip joint were evaluated and X-ray films were taken preoperatively and postoperatively.Results: Postoperative follow-up was 45.5 months on average, ranging from 27 to 78 months. According to the evaluation criterion of "Dandong 1995" for therapeutic effect of adult ischemic necrosis of the femoral head, the therapeutic effects were excellent in 33 hips, good in 17, fair in 3 and poor in 1, with the excellent and good rate of 92.6 %.Conclusions: This method is relatively simple with little invasion. It not only improves the microcirculation of the femoral head by local application of traditional Chinese medicine, but also provides mechanic buttress in the weightloading area to prevent collapse during repairing, which is beneficial to repair and reconstruction of femoral head. It may be a choice of minimal invasion surgery for ischemic necrosis of the femoral head at Stages Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ of ARCO.     

活血化瘀中药联合血管内皮生长因子基因转移促进股骨头坏死处新生血管形成的实验研究

目的:观察活血化瘀中药联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对促进股骨头缺血坏死处新生血管形成情况。方法:日本大耳兔40只,随机分为对照组、模型组、中药组、基因组和综合组。治疗8周后采用免疫组织化学方法观察股骨头滑膜VEGF阳性细胞率及数字减影血管造影股骨头血管数目改变情况。结果:模型组VEGF阳性细胞表达率减低,与对照组、基因组、综合组比较,差异有显著性意义(P<0.01),与中药组比较,有统计学差异(P<0.05),综合组VEGF阳性细胞表达率较高,与中药组及基因组比较,有统计学差异(P<0.05)。血管数目:在A区,各组与模型组比较,均无统计学差异;在B区,各组较模型组血管数目均有增加,对照组、基因组、综合组与模型组比较,有统计学差异(P<0.05)。综合组与基因组比较有统计学差异(P<0.05),中药组虽然血管数目较模型组多,但是无统计学意义。结论:活血化瘀中药及VEGF基因转移均可促进股骨头缺血坏死处局部新生血管形成和侧支循环的建立,尤以活血化瘀中药联合基因疗法效果为好,为临床应用活血化瘀中药联合基因疗法治疗股骨头缺血性坏死提供实验依据。     

丝素蛋白/磷酸钙骨水泥降低椎体成形术中心血管并发症风险的实验研究

[目的]建立骨水泥肺栓塞动物模型,研究聚甲基丙烯酸甲酯、磷酸钙骨水泥及丝素复合磷酸钙骨水泥固相三种材料注射造成肺栓塞后,对血流动力学、肺氧合及凝血活酶的影响,探讨丝素改良骨水泥材料降低心血管系统并发症的可行性。[方法]24只实验用猪随机分为3组,每组8只,在全麻后气管插管,呼吸机维持下,开胸手术经肺动脉干分别注入聚甲基丙烯酸甲酯、磷酸钙骨水泥和丝素复合磷酸钙骨水泥固相,持续监测血流动力学参数,测定不同时间点动脉血pH值、动脉血氧分压(PaO2)和动脉血PaCO2浓度以及注射前后抗凝血酶Ⅲ活性(ATⅢ)。处死后肺标本行CT检查,立体三维重建骨水泥血管内铸形。[结果]注入磷酸钙骨水泥引起了肺动脉高压和低血压,平均肺动脉压的升高最高时比基础值增高(20.93±5.04)mmHg(注射后20 min),平均动脉血压下降最低时比基础值降低(-26.59±6.8)mmHg(注射后50 min);丝素复合磷酸钙骨水泥固相组的变化较轻微,与聚甲基丙烯酸甲酯组类似,丝素复合磷酸钙骨水泥固相组与磷酸钙骨水泥组比较差异有统计学意义(P0.05)。注射骨水泥后磷酸钙骨水泥组血气指标改变明显,造成了严重的低氧血症、高碳酸血症和酸中毒,并引起了AT-Ⅲ明显的下降,丝素复合磷酸钙骨水泥固相及聚甲基丙烯酸甲酯对肺栓塞动物动脉血气和凝血指标的影响则较小。CT三维成像显示磷酸钙骨水泥体内有明显溃散,而丝素复合磷酸钙骨水泥固相则保持了较完整的骨水泥铸形。[结论]骨水泥的抗稀散性对肺栓塞后心血管并发症的严重程度有重要影响,丝素的复合使磷酸钙骨水泥在血液中的抗稀散性明显提高,有效地减少了栓子特别是微栓子的产生,能明显减轻骨水泥栓塞后对血流动力学、呼吸功能及凝血系统的影响,从而降低急性心肺功能障碍的发生率和死亡率。     

经股骨颈股骨头成形术治疗塌陷期股骨头缺血性坏死的实验研究

[目的]本实验旨在评价经股骨颈股骨头成形术治疗塌陷期股骨头缺血性坏死的效果。[方法]取10只塌陷期股骨头缺血性坏死犬，行经股骨颈股骨头成形术，测定其生物力学性能并与健侧对比，以及测定其手术前后的X线片并进行对比。[结果]经股骨颈股骨头成形术能满意的撑起塌陷软骨和恢复股骨头生物力学性能。[结论]经股骨颈股骨头成形术可成为治疗塌陷期股骨头缺血性坏死的理想方法，但长期疗效尚待验证。     

磷酸钙骨水泥复合微小颗粒骨的体外实验研究

[目的]进行磷酸钙骨水泥复合微小颗粒骨的实验,探讨磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)和微小颗粒骨最佳混合比例。[方法]取大耳白兔双侧股骨制作颗粒骨,实验组为颗粒骨和CPC分别以1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5混合固化的材料;对照组为CPC固化的材料。测定两组的固化时间及最大抗压强度;间充质干细胞培养于材料浸提液中,MTT检测细胞增殖;间充质干细胞与各材料共培养5 d后,电镜观察材料表面的细胞量及形态。[结果]MTT检测:比例为1∶2和1∶3组明显促进细胞的增殖,优于其他组,有统计学意义(P0.05)。电镜扫描:1∶2、1∶3组材料表面的细胞生长良好,其他组材料表面的细胞量明显少于这两组。1∶3组材料的固化时间及最大抗压强度适中,与CPC组比较,有统计学意义(P0.05)。[结论]1∶3在可操作性、生物力学、细胞相容性方面是最合适的混合比例。     

新型纳米级rhBMP-2磷酸钙骨水泥修复股骨假体翻修时骨缺损的组织学研究

目的探讨新型纳米级复合人类基因重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）／磷酸钙骨水泥（CPC），合称CCPC，在修复股骨假体翻修时骨缺损的成骨作用。方法选择8只健康成年杂种犬，每只犬双侧股骨通过配对，均进行人工股骨头置换手术，一侧为实验组，即CCPC组；另一侧为对照组，即同种异体颗粒性松质骨组（MCA组）。术中按临床上AAOS分型Ⅱ型Ⅱ度行股骨近端骨缺损造模，然后分别应用CCPC和MCA两种材料填充股骨近端骨缺损区，同时固定股骨假体。术后3、6个月分别取出各组骨缺损区标本进行大体及组织学切片观察，了解骨缺损的修复情况。结果术后3个月CCPC组与MCA组骨缺损区均见有新骨形成，术后6个月两种植入材料基本被吸收替代，骨一材料结合良好，骨缺损修复良好。结论纳米级复合rhBMP-2／CPC的骨缺损修复能力与MCA相似。     

局部应用CPC/rhBMP-2复合材料对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响

目的研究磷酸钙骨水泥（Calcium Phosphate Cement，CPC）与重组人骨形态发生蛋白-2（Recombinant Human Bone Morphogenefic Protein-2，rhBMP-2）复合材料对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响。方法取4月龄雌性清洁大鼠106只，随机分成实验组96只，对照组10只。实验组行双侧卵巢切除术，对照组行假手术，术后行双能X线骨扫描确定骨质疏松动物模型形成。然后将实验组96只大鼠制作右侧股骨远端松质骨骨折，将上述动物随机分成3组，每组32只：（1）克氏针组，从髁间窝穿入直径1mm克氏针固定；（2）CPC组，将CPC从12号针头注入骨髓腔，手法固定至骨水泥凝固；（3）CPC-BMP组，将CPC与rhBMP-2复合材料用12号针头注入骨髓腔，手法固定至骨水泥凝固。术后第2、4、6、8wk三组各取8只动物处死，取手术侧股骨远端标本行压缩实验。结果在上述4个时间点，CPC-BMP组的骨折段最大载荷较克氏针组及CPC组增高（P〈0．05）；第2周CPC组骨折段最大载荷较克氏针组增高（P〈0．05）。结论（1）局部注射CPC-BMP复合材料可以促进骨质疏松大鼠骨折的愈合，提高骨折愈合后的强度；（2）CPC局部应用可以对骨折起到即时固定作用。