成纤维细胞影响心肌细胞搏动频率的观察

目的：观察影响心肌细胞搏动频率的各种因素并探讨其作用。 方法：实验于2003-05／2005—09于泰山医学院生化教研室、中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只，无菌的取出心脏，培养不同浓度（0.5&;#215;10^5 cells/mL, 1.0&;#215;10^5 cells/mL, 1.5&;#215;10^5 cells/mL, 2.0&;#215;10^5 cells/mL）的心肌细胞和成纤维细胞，分别在培养的第2，3，4天，利用Recorder-8050磁带式录像机观察并记录心肌细胞的搏动频率。同时将培养的心肌细胞分别用不同浓度的成纤维细胞培养液（80％，50％，20％）和不同时间间隔的成纤维细胞培养液（2，4，6d）进行处理，在培养的第2，3，4天观察心肌细胞的搏动频率。最后采用内皮素受体阻断剂BQ123（1．0&;#215;10^-6 mmol／L）处理心肌细胞，观察并分析内皮素能否影响心肌细胞的搏动频率。结果：①心肌细胞单独培养时，其浓度越大，培养时间越长，搏动频率越高。②低浓度组（0．5&;#215;10^8 L^-1）的搏动频率在96h达高峰，高浓度组（2．0&;#215;10^8 L^-1）的搏动频率在96h达高峰，两者之间有显著性差异（88．9&;#177;5．8次／min．144.2&;#177;62次／min，P〈0．05）。③用成纤维细胞培养液培养心肌细胞，发现与对照组相比，第2天收集的培养液在48h时的作用最强（116．6&;#177;6．6次／min．89．7&;#177;4．2次／min，P〈0．05）；高浓度组在48h时的作用也最强，与对照组有显著性差异（100．3&;#177;7．9次／min，85．2&;#177;6．1次／min，P〈0．05）。④BQ123能显著降低成纤维细胞培养液诱发的增加细胞搏动频率作用（113．9&;#177;6．5次／min，95．1&;#177;5．次／min，P〈0．01）。 结论：心肌细胞的搏动频率受多种因素的影响，是多种因素综合作用的结果。细胞的浓度、培养时间都能影响其频率；成纤维细胞培养液也能调节心肌细胞的频率；而内皮素可能是其发挥作用的关键物质之一。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对犬牙龈成纤维细胞的影响

背景:研究发现,局部应用外源性碱性成纤维细胞生长因子可明显促进体外培养牙龈成纤维细胞的增殖,口内局部应用可加速牙龈组织伤口的愈合.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染对Beagle犬牙龈成纤维细胞生物学特性的影响.设计、时间、地点:观察对比体外细胞学实验,于2008-04/09在福建医科大学细胞与发育工程中心及解放军南京军区福州总医院比较医学科完成.材料:Beagle犬4只,12月龄,体质量10～13 kg,雄性;含有人全长碱性成纤维细胞生长因子cDNA的pIRES2-EGFP-bFGF质粒为白行构建.方法:切取Beagle犬左上颌第2,3,4前磨牙的游离龈.无菌磷酸盐缓冲液冲洗4遍,将组织块剪碎后用2.5 g/L的胰酶37℃消化2 h,离心后弃上清,加入含体积分数为10%胎生血清的DMEM,接种于6孔板并覆盖玻片,置于37℃、体积分数为5%CO<,2>的培养箱培养,取对数生长期细胞消化传代.利用脂质体介导法将pIRES2-EGFP-bFGF质粒转染Beagle犬牙龈成纤维细胞,以空质粒转染组及未转染组作为对照.主要观察指标:MTT法检测牙龈成纤维细胞增殖状况;AO/EB双染色检测牙龈成纤维细胞凋亡;化学比色法检测牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性.结果:3组细胞均在转染后第3天开始进入对数生长期.MTT检测结果显示,转染后随着时间改变,与空质粒转染组及未转染组相比,实验组牙龈成纤维细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),而空质粒转染组及未转染组差异无显著性意义(P>0.05).AO/EB双染色结果显示,实验组牙龈成纤维细胞凋亡率低于空质粒转染组及未转染组(P<0.05).转染碱性成纤维细胞生长因子基因后,牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性未见明显改变,与未转染细胞差异无显著性意义.结论:碱性成纤维细胞生长因子基因转染可以加速牙龈成纤维细胞的增殖,抑制其凋亡,无促使牙龈成纤维细胞骨向分化的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子影响成骨细胞黏附与增殖的实验

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性与成骨细胞DNA合成的影响。方法：实验于2004-08／12在广州军区广州总医院中心实验室完成。取2只健康新西兰大白兔骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外培养。①光镜下观察成骨细胞形态。②进行不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（0．1，1，10，100mg／L）诱导成骨细胞，设空白对照，于1，2，4，8h共4个时间点采用体视学计量黏附细胞数量。③流式细胞仪进行细胞DNA含量分析。结果：①成骨细胞特性观察：光镜下成骨细胞呈多角形或梭形表达出高碱性磷酸酶活性。②碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性的影响：碱性成纤维细胞生长因子浓度为1．0-10mg／L时细胞黏附数呈剂量依赖性，达到100mg／L时，细胞黏附数反而下降，时间到8h后，与对照组间无明显差异。③碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞DNA合成的影响：增殖指数显示碱性成纤维细胞生长因子浓度为1.0～10mg／L时呈剂量依赖性，到100mg／L时，指数略有下降，但仍显著高于对照组。结论：①碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0-10mg／L时可提高成骨细胞的黏附性。②碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0～10mg／L时可促进成骨细胞DNA合成，到100mg／L作用减弱。③碱性成纤维细胞生长因子可调节成骨细胞的黏附与增殖。     

瘢痕成纤维细胞的分化与凋亡

目的：研究正常皮肤、增生性瘢痕（ＡＴＳ）及瘢痕疙瘩成纤维细胞（ＦＢ）向肌成纤维细胞（ＭＦＢ）的分化、ＦＢ凋亡，以及它们与瘢痕的关系。方法：正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩各取１０例培养ＦＢ，利用流式细胞仪测定ＭＦＢ比例以及ＦＢ凋亡率。结果正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩培养ＦＢ的ＭＦＢ分化比例无差异；正常皮肤与ＨＴＳＦＢ凋亡率无差异，瘢痕疙瘩培养ＦＢ凋亡率较正常皮肤及ＨＴＳ低。结论：ＨＴＳ、瘢痕疙瘩ＦＢ向ＭＦ     

成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响

目的：观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响，探讨两者之间的协同作用，为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法：取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经，运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞，纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基：A组：成纤维细胞 DMEM／F12;组：成纤维细胞 雪旺细胞 DMEM／F12；c组：DMEM／F12(对照组)。将A，B，C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中，MTT检测雪旺细胞增殖情况，S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果：B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用；A组次之：C组最差(P＜O．001)。结论：成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。     

表皮细胞水化对成纤维细胞及瘢痕挛缩的影响

目的：观测表皮细胞水化对成纤维细胞及瘢痕挛缩的影响，探索其作用机制，方法：以表皮细胞与成纤维细胞分层培养为研究模型，采用放免、免疫组化及图像分析等方法，观测对表皮细胞水化处理后，成纤维细胞形态、胶原合成及细胞因子表达的影响。结果：采用水化处理后，成纤维细胞胶原合成、转化生长因子－β1、转化生长因子－R（I）和α-SM actin阳性表达水平明显下降。结论：通过对表皮细胞的水化，可抑制成纤维细胞的胶原合成及瘢痕挛缩。     

成牙本质细胞中成纤维细胞生长因子18的表达

目的：观察成牙本质细胞中是否表达成纤维细胞生长因子18。 方法：实验于2005—02／04在解放军第四军医大学口腔医院口腔内科实验室完成。①小鼠成牙本质样细胞系MDPC-23培养：细胞培养在含体积分数为0．1的胎牛血清α—MEM、青霉素100IU／mL、链霉素100mg／L和谷氨酰胺50mg／L的完全培养液中，同时附加50mg／L抗坏血酸。②免疫组织化学染色：一抗用1：100稀释的成纤维细胞生长因子18多克隆抗体，4℃湿盒过夜，最后滴加二氨基联苯胺液显色。以磷酸盐缓冲液代替一抗设为阴性对照。成纤维细胞生长因子18阳性表达细胞胞浆呈棕黄色。③免疫荧光染色：一抗用1：50稀释的羊抗小鼠成纤维细胞生长因子18多克隆抗体，4℃湿盒过夜后滴加按1：500稀释的FITC标记的兔抗羊二抗。阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗进行染色。成纤维细胞生长因子18阳性表达细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光。 结果：免疫荧光和免疫组织化学法均表明成纤维细胞生长因子18在MDPC-23细胞浆呈阳性表达。 结论：从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MDPC-23表达成纤维细胞生长因子18，提示成纤维细胞生长因子18可能是影响成牙本质细胞分化的胞内信号转导分子。     

不同应力对人牙周膜成纤维细胞细胞骨架影响的体外研究

目的:研究不同应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞微丝形态的影响。方法:分别给第3～5代的人牙周膜成纤维细胞施加静压力、周期性牵张力和流体剪切力,用相差显微镜和考马斯亮蓝染色方法观察加力后不同时间细胞及其微丝形态的变化特征。结果:流体剪切力作用6h后,部分人牙周膜成纤维细胞出现收缩、微丝排列等方面的变化;12h后,部分细胞死亡、脱落。较大的静压力(>100kPa)作用12h后,可引起细胞间隙增大等变化,细胞骨架改变较少。结论:一定性质和力量的外力可引起体外培养的人牙周膜成纤维细胞微丝的重排、细胞贴壁及细胞形态的变化。静压力与剪切力、动态张力相比,对体外培养的人牙周膜成纤维细胞微丝形态影响较轻。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异，以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法：测定细胞生长曲线；应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。结果：增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢；胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。bFGF对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用，对增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用。结论：增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞，它具有自己特殊的生物学特性。bFGF可以使增生性瘢痕成纤维细胞的生物学特性趋于正常皮肤成纤维细胞。     

加热湿化器在气管切开患者氧疗中的效果观察

目的 观察加热湿化器在气管切开氧疗患者气道湿化中的应用效果.方法 将ICU 64例气管切开患者,随机分为两组,实验组采用加热湿化器给氧法患者32例,对照组采用湿化瓶鼻导管吸氧、微量泵泵入湿化液湿化法32例.观察两组患者气道湿化和氧疗效果.结果 加热湿化器给氧法患者湿化和氧疗效果明显优于湿化瓶鼻导管吸氧、微量泵泵人湿化液...     

Detection of myocardial ischaemia using surface microdialysis on the beating heart

Microdialysis (MD) can be used to study metabolism of the beating heart. We investigated whether microdialysis results obtained from epicardial (surface) sampling reflect acute changes in the same way as myocardial sampling from within the substance of the ventricular wall. In anaesthetized open-thorax pigs a coronary snare was placed. One microdialysis probe was placed with the sampling membrane intramyocardially (myocardial), and a second probe was placed with the sampling membrane epicardially (surface), both in the area which was made ischaemic. Ten minutes collection intervals were used for microdialysis samples. Samples from 19 pigs were analysed for lactate, glucose, pyruvate and glycerol during equilibration, baseline, ischaemia and reperfusion periods. For both probes (surface and myocardial), a total of 475 paired simultaneous samples were analysed. Results from analyses showed no differences in relative changes for glucose, lactate and glycerol during baseline, ischaemia and reperfusion. Surface microdialysis sampling is a new application of the microdialysis technique that shows promise and should be further studied.     

大鼠心脏成纤维细胞向心肌细胞分化的可行性研究

目的:通过观察5-氮胞苷诱导的体外培养大鼠心脏成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)中心肌特异性β肌球蛋白重链(β-myosinheavychain,β-MHC)的表达,研究CFs向心肌细胞分化的可行性。方法:实验选用SD大鼠的乳鼠10只。胰酶消化、差速贴壁法体外分离培养大鼠CFs,分治疗组和对照组,前者用不同浓度5-氮胞苷(2.50,5,7.5,10.0,15.0,20.0μmol/L)诱导,24h后正常培养,以免疫组化、反转录多聚链合酶反应(RT-PCR)方法测定两组CFsβ-MHC、连接蛋白43的表达。结果:正常培养大鼠CFs呈梭形均匀生长,不表达βMHC和连接蛋白43。经5-氮胞苷诱导后,CFs体积缩小呈克隆样生长,表达β-MHC、连接蛋白43,以10μmol/L浓度时最明显。结论:5-氮胞苷诱导体外培养大鼠CFs表达心肌特异性β-MHC,与诱导浓度相关,提示可诱导大鼠CFs向心肌样细胞分化。     

葛根素治疗急性心肌梗死的疗效观察

目的观察葛根素注射液治疗急性心肌梗死患者的临床疗效及对其血清高敏c反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）水平的影响。方法48例急性心肌梗死患者随机分为两组,对照组用常规药物治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用葛根素注射液。血清hs-CRP采用免疫比浊法测定,IL-6采用酶联免疫吸附测定法测定。结果治疗组疗效明显优于对照组（P〈0．05）。两组患者血清hs-CRP、IL-6浓度较治疗前均明显降低（P〈0．01）,治疗组下降更明显,组间有显著性差异（P〈0．05）。结论葛根素注射液可明显改善急性心肌梗死患者临床疗效,显著降低急性心肌梗死患者血清hs-CRP、IL-6水平,提示葛根素注射液对急性心肌梗死的治疗作用与减轻炎症反应有关。     

停跳和不停跳行心脏直视手术对心肌保护作用的对比研究

目的：探讨浅低温体外循环(CPB)下温血停搏液持续灌注和不停跳行心内直视手术对心肌的保护作用。方法：18只同种健康山羊采用单盲法随机分为冷晶体间断灌注组(Ⅰ组)，温血停搏液持续灌注组(Ⅱ组)，不停跳组(Ⅲ组)3组，每组6只；分别在CPB的不同时刻测定心肌组织丙二醛(MDA)含量及静脉血心钠素(ANP)含量，并切取心肌组织在电镜下观察超微结构的改变。结果：Ⅰ组MDA和ANP在CPB期间逐渐升高，恢复正常灌注后升高更明显：Ⅱ组、Ⅲ组MDA和ANP虽也有所升高，但较Ⅰ组低，且恢复正常灌注后无升高趋势。心肌超微结构也显示Ⅰ组改变明显，而Ⅱ组、Ⅲ组则基本不变。结论：温血停搏液持续灌注和不停跳行心内直视手术可有效避免心肌的缺血和再灌注损伤，有良好的心肌保护作用。     

两种留置针回血率及堵管率的效果观察

摘要：目的探讨持续正压专利留置针的持续正压功能装置结合独特生理盐水4步冲封管手法对于降低回血率及堵管率的效果观察和意义。方法2018年5月至2018年8月在心血管内科的进行留置静脉留置针的老年患者100人,所有同意入组的患者在进行留置针穿刺前按照盲法随机入组,分为研究组50例,对照组50例。对照组采用Y型密闭式防针刺伤静脉留置针+生理盐水冲封管,观察组采用持续正压专利留置针+生理盐水独特4步冲封管手法。比较两组留置针1天、2天、3天、4天时的回血、堵管。结果观察组第1天、第2天、第3天的回血率,第2、3、4天的堵管率明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论持续正压专利留置针+生理盐水独特4步冲封管手法能够有效降低留置针的回血率及堵管率,延长留置针使用寿命。     

胡椒碱及其衍生物对原代培养心肌细胞损伤的保护作用

背景:胡椒碱是滇产回心草心脏保护作用的主要物质基础,同时,其化学结构相对简单,可进行结构修饰,为进一步研发新型的抗心肌缺血的化合物奠定基础.目的:观察胡椒碱及其7个衍生物对异丙肾上腺奈和过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用.方法:采用异丙肾上腺素和H2O2诱导原代培养大鼠心肌细胞致心肌细胞损伤模型,MTT法检测不同剂量胡椒碱及其衍生物对损伤心肌细胞的影响.结果与结论:7×10-8mol/L胡椒碱、7×10-8,7×10-7mol/L胡椒酸甲酯、7×10-8,7×10-7,7×10-6 mol/L吡略烷产物、7×10-8,7×10-7,7×10-6mol/L二乙胺产物可不同程度地提高异丙肾上腺素诱导的心肌细胞损伤模型中心肌细胞的存活比例(P<0.05),但未见剂量相关性: 7×10-8mol/L胡椒碱(P<0.05)、7×10-8,7×10-7mol/L吡咯烷产物和7×10-8,7×10-7mol/L二乙胺产物可提升过氧化氢诱导的心肌细胞损伤模型中心肌细胞存活比例,未见明显的剂量相关性.由此推测胡椒碱及其衍生物可显著缓解异丙肾上腺素和过氧化氢所致的心肌细胞损伤,且其吡咯烷产物和二乙胺产物作用效果优于胡椒碱.     

不停跳心内直视手术对心肌损伤的探讨

目的评价心脏不停跳心内直视手术对心肌的损伤情况。方法房间隔缺损(atrial septaldefect,ASD)和室间隔缺损(ventricularseptaldefect,VSD)患者共48例,随机分为实验组24例和对照组24例。实验组在浅低温(31～34℃)体外循环、心脏跳动状态下施术;对照组在冷晶体停搏液停跳、中度低温(28～30℃)体外循环下手术。比较两组体外循环时间、术后机械辅助通气时间、胸腔引流量和术后住院日数;分别在术前,术后2、6、24小时采集两组动脉血标本,检测血清中AST、肌酸激酶同工酶MB(creatinekinaseMB,CK MB)和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性;分别在心内操作开始和结束时剪取小块右心房组织,电镜观察心肌细胞超微结构变化并测量线粒体横截面积。结果实验组体外循环时间、术后机械辅助通气时间、胸腔引流量均少于对照组(P<0.05或P<0.01),术后住院日数两组比较差异无统计学意义(P0.05);两组术后AST、CK MB活性均较术前明显升高,而以对照组更为明显(P<0.05或P<0.01);SOD活性均较术前降低,对照组降低较实验组明显(P<0.05)。实验组心内操作完毕时心肌超微结构改变不明显,线粒体横截面积明显较对照组为小。结论心脏不停跳心内直视手术对心肌损伤较轻。