TNF-α体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.     

TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子（TNF-α）对培养的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）mRNA表达的影响。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的PMVEC随机分为TNF-a时问刺激组与浓度刺激组,前组以5000U／ml的TNF—d分别与PMVEC作用Oh、0．5h、1．5h、3h、6h、12h;后组分别以0U／ml、200U／ml、1000U／ml、5000U／ml的TNF．d与PMVEC作用3h。运用RT-PCR法分析SSeCKSmRNA的表达变化。结果TNF—α可以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA的表达。结论SSeCKS可能参与了TNF—α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤过程。     

TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)大鼠细胞凋亡、Caspase-3表达及其与疾病严重程度的关系.方法:40只SD大鼠随机分成对照组(SAP组,胆管逆行性注射牛磺胆酸钠制备SAP模型,n=20),实验组(干预组,SAP模型制作成功后,注射重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白,n=20).测定两组血清淀粉酶和TNF-α亮含量,采用免疫组化法分析Caspase-3的表达,运用TUNEL技术检测胰腺细胞的凋亡,并对胰腺组织进行病理学评分.结果:与SAP组比较,干预组的血清淀粉酶、TNF-α、胰腺组织病理学评分较低(6868.80+595.50 U/L vs 5434.20±481.52 U/L.258.46±38.57 ng/L vs 182.00±19.67 ng/L.15.54±2.30vs 11.06±1.09,均P＜0.05),Caspase-3阳性率和和胰腺细胞的凋亡指数显著升高(20.06±2.17vs 28.52±3.74,10.42±1.27 vs 16.23±2.43,均P＜0.05).结论:SAP时胰腺细胞发生凋亡时伴随Caspase-3的高表达,而炎症反应和胰腺组织病理学评分得到改善.     

TGF-α、TNF-α和VEGF对人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法用噻唑兰(MTT)法观察TGFα、TNFα和VEGF对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖的作用;用PI染色流式细胞分析、Hochest33342染色的方法检测上述细胞因子对人嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响。结果0.1～100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF均促进人嗜铬细胞瘤细胞增殖。无血清培养72h,人嗜铬细胞瘤细胞的凋亡率为3.98%,100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF对其凋亡无明显影响。结论TGFα、TNFα和VEGF刺激原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。     

人重组TNF-α在晶状体上皮细胞炎症损伤中的作用

目的研究TNF-α诱导的人晶体上皮细胞（HLE-B3）炎症损伤模型中细胞形态及性状的改变,探讨核因子-κB（NF—κB）信号通路在炎症损伤中的作用。方法将HLE-B3细胞分为两组,对照组加入普通培养液,观察组加入含TNF-α的培养液。观察两组细胞形态变化;划痕试验检测细胞迁移率变化;免疫组织化学、Western blot和荧光定量PCR法分别检测NF—κB蛋白及mRNA表达变化;ELISA法检测培养液中NF—κB下游因子IL-1和IL-6水平。结果观察组HLE-B3细胞伸长变细,迁移率明显增快,逐渐向成纤维细胞转化。刺激后NF—κB蛋白表达增多,并从胞质向胞核内转移。与对照组比较,TNF—α刺激后6hNF—κB蛋白及mRNA表蓝量均明显增高,12h时达到高峰;培养液中IL-1和IL-6水平刺激后亦明显增加。结论应用TNF-α进行诱导是建立HLE-B3细胞炎症损伤模型的有效方法;NF—κB信号通路被激活可能是开启炎症损伤的关键。     

TNF-α诱导肝干细胞凋亡及信号转导途径的改变

目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导肝干细胞(WB细胞)凋亡及其信号转导机制.方法:WB细胞经TNF-α诱导不同时间,用流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡及细胞周期改变;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA的变化:经Western blot检测TNF-α诱导WB细胞与凋亡有关分子的改变.结果:TNF-α诱导WB细胞24 h,FCS发现51%细胞凋亡,核酸电泳出现DNA"ladder"现象;同时与细胞凋亡相关的转录因子NF-KB核内转移,活化的凋亡蛋白酶caspase-3增多,而与细胞增殖相关的信号转导途径被阻断-磷酸化的Erk/Akt水平下调.结论:经TNF-α仅诱导,与凋亡相关的信号分子caspases-3被激活,而与细胞增殖有关的信号途径被阻断(p-Erk/Akt)下调,导致细胞可能发生增殖阻滞而凋亡.     

神经调节素对痴呆大鼠模型海马区TNF-α表达的影响

目的研究神经调节素(NRG)-1β对实验性老年痴呆大鼠脑组织肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠30只,经左侧脑室微量注射淀粉样蛋白β1～40(Aβ1～40)建立实验性痴呆模型,经右侧脑室注射NRG-1β干预治疗,Y型电迷宫检测动物认知功能,原位TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组化检测TNF-α的表达水平。结果模型组大鼠较对照组认知能力明显下降,TUNEL阳性细胞显著增多、神经细胞TNF-α蛋白表达明显增强(P<0.05)。经侧脑室注射NRG-1β治疗后,大鼠较模型组认知能力显著改善、TUNEL阳性细胞显著减少、TNF-α表达减弱(P<0.05)。结论 NRG-1β可能下调炎性因子TNF-α表达,发挥抗炎作用,而改善动物的学习记忆能力。     

热休克处理对TNF-α诱导胃腺癌细胞凋亡作用的影响

目的探讨热休克处理在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导胃腺癌BGC823细胞凋亡过程中的作用,为胃癌的生物学治疗提供依据。方法将体外培养的胃腺癌BGC823指数生长期细胞分为热休克组和对照组,热休克组行热休克处理。两组均分别用0、25、50、100 ng/m1浓度的TNF-α诱导,作用4 h;热休克组行热休克处理。采用TUNEL法和3H-TdR掺入试验检测两组肿瘤细胞凋亡指数（AI）及细胞增殖抑制率（IR）。结果与对照组比较,热休克组AI明显下降（P〈0.01）;IR明显升高（P〈0.01）,呈剂量依赖性。结论热休克处理对TNF-α诱导的胃腺癌BGC823细胞凋亡具有抑制作用;此作用与TNF-α呈剂量依赖效应。     

TNF-α水平对急性心肌梗死预后的影响

目的 :观察急性心肌梗死 （AMI）病情稳定后肿瘤坏死因子 （TNF-α）水平升高对 AMI预后的影响。方法 :选1998-0 8～ 2 0 0 1-0 1的 AMI患者 13 4例 ,随访 3～ 3 2个月 ,将随访期内发生心绞痛、再次心肌梗死、心力衰竭及死亡的患者 3 4例作为事件组 ,同时 ,在随访期内未发生冠心病事件的患者中选取与事件组年龄、性别配对的患者 3 4例作为对照组 ,排除肝肾功能不全及存在明确的炎症病变者。 AMI患者发病后 4～ 8周抽静脉血加入 EDTA后分离血浆 ,用 EL ISA法检测血浆中 TNF-α含量。同时检测 CRP及 SAA。结果 :两组患者一般临床情况比较 ,事件组有糖尿病者多于对照组 （P>0 .0 5） ;其余临床情况无显著差异。事件组血浆 TNF-α及 CRP水平均高于对照组 （P<0 .0 5） ,而 SAA水平两组间无显著差异。结论 :AMI后血浆 TNF-α及 CRP水平持续升高患者可能提示其具有较高的冠心病事件发生率 ,应加强对此类患者的二级预防     

TNF-α体外对Caco-2细胞通透性的影响及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞间通透性的影响及作用机制.方法:利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,模型分为正常对照组(C组)和TNF-α预处理组(TNF-α组),TNF-α组根据预处理时间又分为3、6、12、24 h 4个亚组.应用电阻仪测定TNF-α预处理后各组Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)变化;罗丹明-鬼笔环肽直接染色观察细胞骨架改变;同时采用荧光素酶报告基因检测NF-κB活性.结果:TNF-α各亚组TEER均降低,与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),其中TNF-α24 h亚组TEER降低明显.与C组及TNF-α 3、6、12 h亚组比较有显著性差异(均P<0.05);TNF-α 3、6、12 h亚组NF-κB活性增高.与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),且TNF-α12 h亚组NF-κB活性明显增高,与C组及TNF-α 3、6、24 h亚组比较均有显著性差异(均P<0.05);罗丹明-鬼笔环肽直接染色可见C组的F-actin沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,100 μg/L TNF-α预处理后导致F-actin荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布.结论:TNF-α导致Caco-2细胞问的通透性增加.其机制可能与NF-κB活化及F-actin重组有关.     

冠心病患者血清可溶性Fas和TNF-α水平变化

目的探讨血清可溶性Fas(sFas)和TNF-α水平与冠心病(CHD)之间的关系.方法采用酶联免疫吸附双抗体夹心ABC-ELISA方法测定57例CHD患者(CHD组)和23例对照组受试者血清sFas和TNF-α水平.结果CHD患者血清sFas水平高于对照组(P＜0.01),TNF-α水平也高于对照组(P＜0.05),且CHD患者血清sFas水平与TNF-α成正相关(r=0.289,P=0.029).CHD患者中sFas水平不稳定型心绞痛(UA组)患者和急性心肌梗死(AMI组)患者高于稳定型心绞痛(SA组)患者(P＜0.05).结论高水平的血清sFas和TNF-α与CHD有关,可能通过细胞凋亡和炎症反应途径参与冠状动脉粥样硬化斑块的发生发展.     

TNF-α抑制剂治疗自身炎症性疾病的机制

自身炎症性疾病(SAIDs)是一组因固有免疫失调导致全身炎症的遗传性、异质性疾病。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在急慢性炎症中起到关键作用,TNF-α抑制剂广泛用于类风湿关节炎、银屑病关节炎、炎性肠病等疾病,能有效控制SAIDs患者的全身炎症和改善症状,表现出起效快,耐受性好的特点。本文综述TNF-α抑制剂治疗SAIDs的机制及研究进展。     

Hp感染和胃粘膜上皮细胞的增殖与凋亡

从细胞动力学、分子生物学角度探讨幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉ－ｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）与胃癌关系为近年来研究的热点。在生理情况下，人的胃上皮细胞每２～３天就要全部更换一次，所以胃粘膜上皮细胞处于不断地死亡与增殖之中，以维持胃粘膜完整性及正常的保护...     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α诱导蛋白(TNFAIP)8在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其对肺癌A549细胞增殖和迁移能力的影响。方法用RT-PCR和Western印迹检测非小细胞肺癌组织与癌旁组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的差异。合成TNFAIP8特异性siRNA,转染肺癌A549细胞,RT-PCR和Western印迹检测TNFAIP8-siRNA对细胞中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的影响,MTT检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达情况。结果非小细胞肺癌组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。与空白对照组相比,转染TNFAIP8-siRNA的肺癌A549细胞TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01),细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.01),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。阴性对照组与空白对照组之间各项检测指标无显著差异(P>0.05)。结论 TNFAIP8高表达与非小细胞肺癌的发生密切相关,沉默TNFAIP8的表达能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

TNF-α联合阿霉素对人胃癌细胞株SGC-7901的作用及其机制研究

背景:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是抗肿瘤活性很强的细胞因子,但较多的全身毒副作用限制了其应用。目前发现小剂量TNF-α联合化疗药物可提高化疗效果。目的:探讨TNF-α联合阿霉素(ADM)对人胃癌细胞株SGC-7901的治疗作用及其机制。方法:体外常规培养人胃癌细胞株SGC-7901,并分为ADM组(64、16、4、1、0.25μg/mL)、TNF-α组(16 000、4000、1000、250、62.5 IU/mL)、联合组(ADM 5μg/mL+TNF-α4000 IU/mL)、阴性对照组和空白对照组。以MTT法观察细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,蛋白质印迹法检测caspase-8蛋白表达。构建裸鼠胃癌移植瘤模型,分为阴性对照组、ADM组(2 mg/kg)和联合组(ADM 2 mg/kg+TNF-α5×104IU/kg),观察肿瘤生长情况。结果:与ADM组相比,联合组SGC-7901细胞存活率明显降低,S期和G2期细胞比例、细胞凋亡率、caspase-8蛋白表达均明显升高;体内实验亦显示联合组对裸鼠移植瘤的抑瘤率明显高于ADM组。结论:TNF-α与ADM联合应用可增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用,其机制部分与促进细胞凋亡和改变细胞周期有关。     

益赛普对大鼠放射性肺损伤中TNF-α的影响

目的观察注射用重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（益赛普）对大鼠放射性肺损伤过程中TNF-α的影响,试图寻找一种预防或治疗放射性肺损伤的有效途径。方法 72只雌性SD大鼠随机分为3组：正常对照组、单纯照射组和益赛普治疗组,每组24只。照射组及治疗组动物麻醉后,行直线加速器全胸部照射一次,剂量为25Gy。照射后第一周内,治疗组大鼠腹腔注射益赛普（5mg·kg^-1）,共计2次。对照组和照射组大鼠注射同等体积的生理盐水。于照射后第1、4、8、和24周处死动物,取部分肺组织行HE染色,观察组织学变化,另提取组织行免疫组化观察组织中TNF-α变化,使用酶联免疫吸附分析法检测血清中TNF-α水平。所有数据采用SPSS统计软件进行方差分析。结果照射组大鼠肺组织血清中TNF-α水平与对照组相比,明显升高,并在第4周时达到顶峰（P〈0.01,q=5.63,q=6.21）;治疗组TNF-α水平与对照组相比,第4周时也增加明显,但是与照射组相比明显下降（P〈0.01,q=4.97q=7.42）。结论大鼠放射性肺损伤时TNF-α水平明显升高,在放射性肺损伤发展中起到重要作用,益赛普能显著降低它们的水平,并抑制炎症反应严重程度,从而能有效地防治放射性肺损伤。     

SSeCKS对施万细胞TNF-α自分泌的作用

目的探讨Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对施万细胞TNF-α自分泌的作用。方法予TNF-α处理施万细胞及siRNA干扰SSeCKS表达后,ELISA法检测培养基上清中TNF-α的含量,蛋白免疫印迹检测SSeCKS、磷酸化p38、磷酸化JNK、总p38、总JNK的表达。结果 TNF-α可以诱导施万细胞自分泌及SSeCKS表达的增加;干扰SSeCKS表达可以抑制TNF-α的自分泌及p38与JNK通路的激活。结论在施万细胞中,SSeCKS可能通过影响p38及JNK激活对TNF-α的自分泌发挥正向调控作用。     

辛伐他汀对急性脑梗死患者血清TNF-α及IL-6的影响

将急性脑梗死（ACI）患者58例随机分为辛伐他汀组30例和常规治疗组28例,分别于治疗前及治疗4周后行放射免疫分析法测定血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）水平变化.另选同期健康体检的20例作为对照组.结果 ACI治疗前血清TNF-α、IL-6水平均明显高于对照组（P＜0.01）.治疗后辛伐他汀组血清TNF-α、IL-6水平明显低于常规治疗组（P＜0.05）,常规治疗组患者治疗后血清TNF-α、IL-6降低不明显（P＞0.05）.认为辛伐他汀通过影响ACI患者血清TNF-α、IL-6水平从而发挥明显的抗炎作用.