探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原。结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%;64例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性。特异性为92.19%。结论检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值。     

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的 探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值.方法 应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原.结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%:64.例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性.特异性为92.19%.结论 检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值.     

人羧基肽酶H不同区段抗原的克隆表达及其初步应用

目的 构建人羧基肽酶H不同区段抗原的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,初步验证人羧基肽酶H不同抗原区段在羧基肽酶H自身抗体检测中的应用价值。方法 应用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠埃希氏菌诱导表达重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原建立人羧基肽酶H自身抗体的间接ELISA方法,评价羧基肽酶H抗原在检测新诊断2型糖尿病患者抗羧基肽酶H自身抗体中的应用价值。结果 获得了羧基肽酶H三种不同区段抗原,其中42～476氨基酸区段为较理想的抗原。以该全长抗原作为包被抗原检测95例新诊断2型糖尿病患者,羧基肽酶H自身抗体阳性率为8.42%。结论 原核克隆表达的人羧基肽酶H 42～476氨基酸区段抗原具有良好的抗原性,可作为成人隐匿性自身免疫性糖尿病鉴别诊断的候选抗原。     

结核分支杆菌16000抗原基因在大肠杆菌中的高效表达及其产物

目的：获得高效表达结核分支杆菌16000抗原的大肠杆菌工程菌，将培养物纯化后得到重组16000蛋白抗原纯品，并检测其免疫学特性。方法：用聚合酶链反应（PCR）方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析重组蛋白抗原的相对分子质量大小及表达形式。DEAE及PEI凝胶纯化重组蛋白。Western印迹及酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析重组蛋白的免疫原性。结果：构建了具有正确基因序列的重组表达载体，在大肠杆菌Bk。（DE3）中诱导表达，重组蛋白占菌体总蛋白的40％，Westem印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析中，该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论：实验中获得了能高效表达16000蛋白抗原的大肠杆菌工程菌，以可溶性形式存于胞浆内。该重组蛋白具有特异的免疫原性。结核病仍为危害全球健康的主要疾病之一，为了改进目前诊断试剂的特异性和研究筛选有价值的亚单位基因工程菌苗，近年来人们对其致病菌的基因及相关蛋白质进行更深入的研究，以期寻找到有应用价值的特异性蛋白质或相关基因，有目的地利用基因工程技术获得重组蛋白抗原为以上研究提供极大的便利。使用结核分支杆菌单克隆抗体TB68筛选出来的16000蛋白抗原，为结核分支杆菌主要的膜蛋白，对其天然提取物的研究结果表明，该蛋白不仅携带有结核分支杆菌特异性的B细胞表位，并能诱导细胞介导的免疫应答反应，具有潜在的诊断应用价值。大量获得重组16000蛋白抗原就为更深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性，开发其应用价值提供便利。     

结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价

目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景。方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列, 并与表达载体pET-32a构建重组质粒。原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白, 利用亲和层析的方法进行纯化。采用棋盘滴定的方法, 确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)最佳反应条件, 并应用190份血清进行血清IgG抗体检测, 结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价。通过ROC计算各抗原组合的诊断效能, 确定最佳组合方案。结果 成功构建了重组蛋白, 对重组后的片段进行测序, 经BLAST比对与目的基因完全一致, 且能够稳定表达。对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测, 经统计学分析, Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16%、56.84%和71.05%。结合ROC得到最佳的抗原组合方案为Rv2654c+Rv3868, 其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95%、72.63%和75.79%。结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力, 可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白。抗原组合Rv2654c+Rv3868具有较高的诊断效能, 有较好的潜在应用价值。     

增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁组织中的表达

背景：增殖细胞核抗原表达增高可促进细胞DNA合成增加,反映细胞增殖状况。C-Fos与DNA结合可直接调节具有转录活性的转录因子,在胚胎细胞的发育过程中,对细胞的生长、分化及增殖起促进作用。目的：观察增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃组织中的表达。方法：应用免疫组织化学法和图像分析软件检测第2,3,4三个月龄段,人胎胃组织细胞中PCNA和C-Fos蛋白阳性表达的积分吸光度。结果与结论：第2～4个月胎龄段,增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁各层组织细胞均呈阳性表达。随着胎龄的增大,胃壁组织中增殖细胞核抗原蛋白阳性表达先升高再降低,C-Fos蛋白阳性表达则逐渐增高（P〈0.01）。提示增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胚胎早期胃组织细胞的生长发育过程中起重要的调节作用。     

增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁组织中的表达

背景:增殖细胞核抗原表达增高可促进细胞DNA合成增加,反映细胞增殖状况.C-Fos与DNA结合可直接调节具有转录活性的转录因子,在胚胎细胞的发育过程中,对细胞的生长、分化及增殖起促进作用.目的:观察增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃组织中的表达.方法:应用免疫组织化学法和图像分析软件检测第2,3,4三个月龄段,人胎胃组织细胞中PCNA和C-Fos蛋白阳性表达的积分吸光度.结果与结论:第2~4个月胎龄段,增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁各层组织细胞均呈阳性表达.随着胎龄的增大,胃壁组织中增殖细胞核抗原蛋白阳性表达先升高再降低,C-Fos蛋白阳性表达则逐渐增高(P < 0.01).提示增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胚胎早期胃组织细胞的生长发育过程中起重要的调节作用.     

乙型肝炎病毒B基因型和C基因型B细胞表位的差异及意义

目的分析乙肝病毒B基因型和C基因型B细胞表位的差异及意义。方法通过互联网从GenBank搜索乙肝病毒B基因型和C基因型的S蛋白氨基酸序列,使用DANStar生物学软件多个参数预测B细胞抗原表位,并在互联网服务器上用Kolaskear-tongaonakar法预测乙肝病毒B基因型和C基因型的S蛋白的B细胞抗原位点。结果综合预测乙肝病毒B基因型和C基因型S蛋白的B细胞抗原位点,B基因型的S蛋白有5个B细胞抗原位点,C基因型的S蛋白有3个B细胞抗原位点,并且B基因型的B细胞抗原位点的综合抗原指数(1.0798)高于C基因型的B细胞抗原位点的综合抗原指数(1.0729)。结论肝炎病毒C基因型较B基因型易引起患者肝炎慢性化,可能与乙肝病毒C基因型S蛋白的B细胞抗原位点少且抗原指数较低有一定关系。     

重组蛋白与合成肽抗原对戊型肝炎的诊断价值比较

目的　比较重组蛋白与合成肽抗原建立的酶联免疫吸附试验 (ELISA)在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。方法　选择戊型肝炎病毒第二开放读码框架 (ORF2 ) ,分别采用重组蛋白及合成肽抗原 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,同时检测 97份戊型肝炎急性期患者 ,4 7份甲、乙、丙、丁、庚型肝炎患者及 12 0份健康献血者的血清抗 HEV。结果　重组蛋白ELISA、合成肽ELISA与Genelabs重组抗原ELISA试剂盒检测结果的总符合率分别为 96 .9%和 92 % ;重组蛋白ELISA与合成肽ELISA的一致率为 91% ;合成肽ELISA对重组蛋白ELISA的灵敏度为 90 % ,特异度为 10 0 %。结论　戊型肝炎病毒相同表位的重组蛋白和合成肽抗原用于抗 HEVELISA检测有较好的一致性。     

普鲁卡因过敏有何表现?如何解救?如何配制皮试液?怎样观察阴性、阳性表现?

答:普鲁卡因为临床常用的局部麻醉药,应用时可引起过敏反应,其发生原因尚不清楚,现一般认为与其化学结构有关。因普鲁卡因属于氨基苯甲酸酯类。它虽非抗原或半抗原,但能很快地和血浆蛋白结合,结合后的蛋白有可能变性而成为抗原引起变态反应。     

结核分枝杆菌H_(37)Rv株菌体抗原及分泌抗原分析

目的对比分析人型结核枝杆菌(结核菌)H37Rv株固体培养菌、液体培养菌及分泌蛋白中抗原成分的差异,寻找结核菌的主要免疫抗原。方法应用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、免疫印迹技术及单克隆抗体技术分析人型结核菌H37Rv株固体培养、液体培养及其分泌蛋白中的抗原成分。结果固体培养菌与液体培养菌具有基本一致的多肽抗原成分,其主要成分分子量为79000、64000、54000、50000、28000～38000、23000等,而分泌蛋白差异稍大,其主要成分分子量为66000、63000～65000、55000、42000、32000～34000、24000、16000等。单克隆抗体进一步证明66000、55000、16000为分泌蛋白。多克隆抗体免疫印迹分析表明,菌体主要免疫原有79000、54000、38000～50000、28000蛋白成分,而分泌蛋白主要免疫原为分子量66000、55000～64000、30000～34000、24000、16000成分。结论人型结核菌H37Rv株菌体蛋白和分泌蛋白具有不同的主要免疫原,将有助于认识HRv株的总体蛋白组成及寻找与结核病相关的特异性抗原成分。     

免疫沉淀法与质谱联用检测RHD蛋白序列方法学的建立

目的建立人类红细胞RHD蛋白序列分析的方法,为检测RhD血型基因在红细胞膜上抗原量的表达奠定基础。方法随机选取10例无偿献血者的抗凝血5 mL,均为已知RhD阳性,对标本中的Rh血型抗原蛋白进行免疫沉淀。采用蛋白酶解法从红细胞膜中提取RH蛋白并定量。经蛋白酶切割后,利用LC-MS质谱平台对Rh蛋白序列进行鉴定。结果建立了检测RHD蛋白序列的方法,制定出适合检测RHD蛋白的标准曲线,得到10例样本的RHD蛋白浓度,鉴定到的RHD目标蛋白序列与Blast平台检索到的RHD蛋白片段序列吻合度达100%,获得红细胞膜RHD蛋白肽段二级图谱。结论免疫沉淀法与质谱联用可以鉴定红细胞RHD蛋白的氨基酸序列,为检测RhD抗原在红细胞上的表达量奠定基础,为精确鉴定RhD血型提供可行的方法,具有广泛的应用价值。     

鼻疽诺卡菌Nfa34810蛋白的抗原表位筛选与鉴定

目的制备鼻疽诺卡菌IFM10152的Nfa34810蛋白的单克隆抗体并进行B细胞抗原表位的筛选与鉴定。方法首先将Nfa34810蛋白截成相互重叠20个氨基酸的P1和P2,使用重组Nfa34810蛋白兔多抗血清与鼻疽诺卡菌IFM10152的鼠多抗血清,通过Western Blot方法检测P1和P2,初步定位抗原表位,对初步确定表位所在片段的P2进行纯化,并使用纯化的P2和Nfa34810蛋白分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。 采用Western Blot方法鉴定获得的单克隆抗体,应用肽扫描法进一步用单克隆抗体对逐步截短表达的短肽进行筛选,从而确定Nfa34810蛋白的B细胞抗原表位。结果成功制备了5株针对Nfa34810完整蛋白和4株针对P2的单克隆抗体,抗体能与P2和重组Nfa34810蛋白发生特异性抗原抗体反应。 通过肽扫描法成功筛选到1个抗原表位和2个抗原表位区域。结论本研究成功制备了Nfa34810蛋白的单克隆抗体,并对抗原表位进行定位,为开展鼻疽诺卡菌病原学检测、流行病学研究等奠定基础。     

大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离及鉴定

背景:前期研究在大鼠阴茎海绵体组织中检测到了具有干细胞标志物及肌源性标志物的干细胞.目的:在前期研究基础上,对大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞进行分离及表型鉴定.方法:取2月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶消化分离组织,采用Preplate差速贴壁技术对细胞进行初步纯化,获得PP1~PP6贴壁细胞,并进行流式细胞仪检测、免疫荧光细胞化学鉴定及Western blotting检测.结果与结论:连续6步差速贴壁分离后,PP1~PP6细胞贴附能力逐渐减弱,PP6细胞两三天后开始贴壁形成圆形或梭形.流式细胞仪检测PP6细胞中干细胞抗原1(+)5.7%、胚胎抗原(+)2.6%、结蛋白(+) 41.2%.免疫荧光细胞化学显示仅有少量细胞分别表达干细胞抗原1和胚胎抗原,均散在分布,干细胞抗原1主要表达于胞浆,胚胎抗原主要表达于胞核,表达结蛋白的细胞聚集,数量较多,主要表达于胞浆;亦发现有极少量双阳性表达细胞,即干细胞抗原1/胚胎抗原、干细胞抗原1/结蛋白和胚胎抗原/结蛋白.PP1~PP5细胞中未检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白的表达.结蛋白在PP1~PP6细胞中的表达逐渐增强.提示在大鼠阴茎海绵体中发现具有干细胞及肌源性干细胞表型的细胞.     

特定蛋白检测标准化——从CRM470到ERM-DA470k及ERM-DA472k

特定蛋白是指机体内具有某些生理功能,疾病状态时又起到一定病理作用的蛋白质。特定蛋白结构复杂,存在多种不同的空间结构和抗原表位。随着认识的逐步深入、检测方法的日渐成熟及各类检测仪器的大量应用,特定蛋白已成为临     

传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性影响分析

目的 应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响。方法 将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原。每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定。进一步采用NanoLC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定。结果 幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性。幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类（29.6%）、核糖体蛋白（15.5%）、外膜蛋白（10.7%）、假想蛋白（19.0%）、转运相关蛋白（2.0%）、其他蛋白（22.0%）。结论 细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性。     

双向电泳联合免疫印迹技术分析日本血吸虫成虫可溶性抗原

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳（2D—E）结合免疫印迹技术（Western blotting）,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest 8．0双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,鉴别特异性抗原。结果血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝G250染色,电泳图谱显示约152个主要蛋白斑点。分子量（Mr）分布约为14～114kD;等电点（pI）主要集中在4．9～9．5。进一步的Western blotting鉴定结果显示：实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约57个,对照组为0。结论双向电泳联合免疫印迹技术是成功分析蛋白质组学的技术关键,该技术为寻找日本血吸虫特异性抗原开辟了新途径。     

结核分枝杆菌H37Rv株菌体抗原及分泌抗原分析

目的 对比分析人型结核枝杆菌（结核菌）H37Rv株固体培养菌、液体培养菌及分泌蛋白中抗原成分的差异，寻找结核菌的主要免疫抗原。方法 应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、免疫印迹技术及单克隆抗体技术分析人型结核菌H37Rv株固体培养、液体培养及其分泌蛋白中的抗原成分。结果 固体培养菌与液体培养菌具有基本一致的多肽抗原成分，其主要成分分子量为79000、64000、54000、50000、28000～38000、23000等，而分泌蛋白差异稍大，其主要成分分子量为66000、63000～65000、55000、42000、32000～34000、24000、16000等。单克隆抗体进一步证明66000、55000、16000为分泌蛋白。多克隆抗体免疫印迹分析表明，菌体主要免疫原有79000、54000、38000～50000、28000蛋白成分，而分泌蛋白主要免疫原为分子量66000、55000～64000、30000～34000、24000、16000成分。结论 人型结核菌H37Rv株菌体蛋白和分泌蛋白具有不同的主要免疫原，将有助于认识H37Rv株的总体蛋白组成及寻找与结核病相关的特异性抗原成分。     

精子相关抗原9结构与功能研究进展

精子相关抗原9是近年来发现的一种肿瘤睾丸抗原,精子相关抗原9蛋白的基本结构与c-Jun氨基末端激酶相互作用蛋白相似,参与再生过程中细胞信号传导的调节。精子相关抗原9与精卵结合密切相关,并在一些恶性肿瘤中有较高表达,本文就精子相关抗原9的结构与功能研究新进展作一综述。     

结核分枝杆菌抗原Rv0173的克隆、表达与纯化

目的 在大肠杆菌中表达、纯化结核分枝杆菌Rv0173抗原,为研制新型结核病疫苗打下基础.方法 将结核杆菌抗原Rv0173的全长cDNA插入到原核表达载体pGES-4T-1中,构建成Rv0173重组质粒.将重组质粒转入大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白.结果 获得了pGEX4T-Rv0173 重组子,Rv0173蛋白在BL21菌中获得表达,表达的蛋白条带大小约45KD,与预期结果相符.结论 成功地对结核杆菌免疫保护性抗原Rv0173进行了基因克隆与表达,为进一步研究其在结核病新型疫苗研制中的应用奠定了基础.