六味地黄丸防治大鼠糖尿病肾病的实验研究

目的:观察足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在糖尿病肾病发病机制中的作用,探讨六味地黄丸(LWDHW)保护糖尿病肾病大鼠肾脏的机制。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,1周后,按血糖浓度将成模的糖尿病大鼠随机分为:模型组(STZ,8只)、治疗组(STZ+LWDHW,8只),另设正常组(Control,8只)。治疗组给予六味地黄丸灌胃,模型组、正常组给予等量生理盐水,持续观察8周。治疗第8周末,称大鼠体重,计算肾系数,观察肾脏病理改变;检测24h尿蛋白总量、血尿素氮、血肌酐;免疫印迹检测nephrin和podocin在肾组织中的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血糖,体重明显下降(P<0.01),肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,见蛋白管型;nephrin和podocin蛋白表达减少(P<0.01)。治疗组血糖、体重无明显改变;肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显降低(P<0.05);病理改变明显减轻;大鼠肾组织nephrin和podocin表达明显增加(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过增加足细胞nephrin和podocin表达发挥保护糖尿病肾病大鼠肾脏的作用。     

加味升降散对糖尿病大鼠足细胞nephrin. podocin 蛋白表达的影响

目的:加味升降散对糖尿病大鼠足细胞肾小球细胞黏附分子受体抗原(nephrin)、肾小球足细胞跨膜蛋白(podocin表达的影响,探讨其肾脏保护机制。方法:60只雄性成年SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组、低剂量中药组和高剂量中药组。采用大鼠左侧切除左肾手术+高脂高糖饲料+链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)法制备糖尿病大鼠模型。高剂量中药组大鼠给予27 g/(kg·d)加味升降散灌胃,低量中药组大鼠给予9 g/(kg·d)加味升降散灌胃,培哚普利组大鼠给予0.48 mg/(kg·d)(溶于2 mL的CMC-Na溶液)培哚普利灌胃。空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。观察大鼠一般状况,应用考马斯亮蓝法监测24 h尿蛋白定量,应用全自动生化分析仪检测肾功能、血糖。光镜下观察大鼠肾脏病理学变化,免疫组织化法观察nephrin、podocin蛋白在肾脏组织的分布及表达情况。结果:与空白组比较,模型组血糖、血肌酐(Serum creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白均升高(P 0.01),nephrin、podocin蛋白表达均下降(P 0.01);与模型组比较,培哚普利组及低、高剂量加味升降散血糖、SCr、BUN、24 h尿蛋白均下降(P 0.01);培哚普利组、低剂量中药组、高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平均有不同程度上调(P 0.05),其中高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平上调最为显著。结论:加味升降散能有效改善糖尿病大鼠肾功能,减少蛋白尿,改善肾小球硬化等,其途径可能与加味升降散上调大鼠足细胞nephrin、podocin蛋白表达水平,减轻大鼠足细胞损伤有关。     

川芎嗪对高脂高糖饮食与STZ诱致大鼠 肾损伤保护作用的抗氧化机制

目的:探讨川芎嗪对高脂高糖饮食与链脲佐菌素(STZ)诱致大鼠肾脏损伤保护作用的抗氧化机制。方法:SD大鼠70只。除正常组外,其余大鼠均给予高脂-高糖饲料喂养4周,再给予STZ(40 mg.kg-1,ip)造模,72 h后测定空腹血糖,将血糖>16.67 mmol.L-1的大鼠随机分为4组:模型组,二甲双胍组(250 mg.kg-1),川芎嗪低、高剂量组(80,160 mg.kg-1),ig,连续8周。末次给药后,收集24 h尿,测定尿量和尿蛋白量;测定血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)等变化;测定肾组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和Na+-K+-ATP酶活性;测定糖化血红蛋白(HbAlc)和糖基化产物(AGEs)的含量。结果:模型大鼠SCr,BUN含量明显升高(P<0.01);肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,Na+-K+-ATP酶活性减弱(P<0.01);HbAlc和AGEs明显升高(P<0.01)。川芎嗪高、低剂量治疗8周后,明显降低SCr和BUN含量(P<0.05);减低肾组织MDA含量,提高SOD和Na+-K+-ATP酶活性(P<0.01,P<0.05);明显降低HbAlc和AGEs的含量(P<0.01)。结论:川芎嗪对高糖高脂饮食与STZ诱致大鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与增强肾脏组织抗氧化作用有关。     

糖肾合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、podocin表达的影响

目的:探讨糖肾合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin的调节作用及其对肾脏的保护机制。方法:22只SD大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素以35mg/kg腹腔注射的方法复制糖尿病大鼠模型,17只造模成功的大鼠随机为模型组8只,糖肾组9只,另取8只大鼠作为正常组。予药物干预8周后检测大鼠体重、24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮及血浆白蛋白等生化指标。肾脏做病理切片观察结构改变。用Western blotting法和PCR法测定肾组织中Nephrin、podocin蛋白及NephrinmRNA、podocinmRNA的表达水平。结果:糖肾合剂干预后大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮明显降低(P0.05),血浆白蛋白显著升高(P0.05);病理减轻;Nephrin、Podocin蛋白及NephrinRNA、PodocinmRNA表达升高(P0.05)。结论:糖肾合剂保护肾脏的机制可能与上调肾脏足细胞上的Nephrin、podocin的表达有关。     

参芪地黄汤对IgA肾病大鼠肾组织nephrin、podocin蛋白及其mRNA表达的影响

目的 探讨参芪地黄汤治疗IgA肾病的可能作用机制. 方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组12只,采用“白蛋白十脂多糖十四氯化碳”联合法建立IgA肾病大鼠模型.中药低、高剂量组分别给予参芪地黄汤1.4、2.8g/100g灌胃,雷公藤组给予雷公藤多甙片0.625mg/100g灌胃,模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃,每日1次.12周末处死大鼠,检测各组血肌酐、尿蛋白定量、血清白蛋白水平;免疫组化和Western-blot法检测肾组织nephrin、podocin蛋白表达;RT-PCR法检测肾组织nephrin mRNA、podocin mRNA表达. 结果 与正常组比较,其余各组尿蛋白定量均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,各给药组尿蛋白定量均明显下降(P＜0.05).与正常组比较,其余各组大鼠肾组织nephrin、podocin蛋白及mRNA表达均明显下降(P＜0.05);与模型组比较,各给药组大鼠肾组织nephrin、podocin蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.05).结论 参芪地黄汤能有效降低IgA肾病大鼠尿蛋白定量,其机制可能是通过上调肾组织nephrin和podocin表达.     

糖肾宁对糖尿病肾病大鼠肾组织nephrin、desmin表达的影响

目的探讨糖肾宁对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤的影响。方法8周龄SPF级雄性SD大鼠46只,随机选择10只为对照组,其余大鼠予大剂量STZ腹腔注射建立糖尿病模型。其中34只大鼠血糖≥16.7 mmol/L视为糖尿病模型建立成功,随机分为模型组、缬沙坦组、糖肾宁组,予糖肾宁及缬沙坦干预12周,测定空腹血糖、血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白,足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin、骨架蛋白desmin的蛋白或基因表达。结果与对照组比较,模型组大鼠空腹血糖、血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白均明显升高(P0.05),desmin蛋白、基因表达上调(P0.05)、nephrin mRNA表达下调(P0.05);与模型组比较,糖肾宁、缬沙坦干预后,desmin蛋白、基因表达下调(P0.05)、nephrin mRNA表达上调(P0.05),血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白显著降低(P0.05),但血糖无明显变化。结论糖肾宁干预链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠可减少肾小球足细胞损伤,降低蛋白尿、保护肾功能。     

消渴汤对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探究消渴汤对糖尿病肾病大鼠的肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响。方法:选取4周龄健康雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字表法分为:正常组、对照组和实验组,每组各15只;对照组和实验组大鼠采用一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)55mg/kg方法制作糖尿病肾病(DN)模型;各组大鼠分别于完成造模后第0、2、4周采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮、血糖和24 h尿蛋白含量水平;采用Western blotting检测各组大鼠肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达情况;使用HE染色观察大鼠肾小球结构。结果:实验前,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验2周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组及对照组相比各项指标均无差异(Ρ0.05);实验4周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组与对照组相比各项指标均有下降(P0.05);相比正常组实验组及对照组大鼠肾组织nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P0.05);实验组Nephrin和Podocin蛋白水平高于对照组(P0.05)。HE染色结果显示,使用消渴汤治疗后大鼠肾小球体积相对对照组减小,肾小管间质病变减轻,纤维化和炎细胞浸润显著改善。结论:消渴汤可以通过抑制炎症、调节糖代谢并增加大鼠足细胞数目来实现治疗糖尿病肾病。     

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠血清SREBP-1c、SREBP-2c水平及肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达影响

目的:观察糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用及可能机制。方法:SD大鼠采用腔注射STZ方法建立糖尿病肾病模型,对造模成功大鼠分为模型组、厄贝沙坦片组(15.75mg/kg)、糖肾一号组(1800mg/kg)、糖肾一号组(900mg/kg)、糖肾一号组(450mg/kg),各15只,另设正常对照组15只,连续给药8周,观察血糖、血脂、胱抑素C、SREBP-1c、SREBP-2c水平,尿微量白蛋白,肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平。结果:与模型对照组比较,糖肾一号胶囊(900mg/kg、1800mg/kg)各组大鼠血糖、血脂、胱抑素C、尿微量白蛋白明显降低,肾脏组织IRS-1及PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平明显升高,糖肾一号胶囊(450mg/kg)组升高不明显,糖肾一号胶囊(900mg/kg)组与糖肾一号胶囊(450mg/kg)比较,具有统计学意义,糖肾一号胶囊(900mg/kg)为有效剂量。结论:糖肾一号胶囊通过激活胰岛素受体底物-1(IRS-1),激活胰岛素信号传导系统,达到降糖;降低血清SREBP-1c、SREBP-2c水平,调节血脂代谢;提高肾组织podocin、CD2AP蛋白表达,改善肾足细胞损伤,降低尿蛋白,进而通过上述综合作用达到改善肾脏纤维化、硬化作用。     

白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

该实验研究白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响,探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制。实验采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠,动物分为正常对照组,糖尿病对照组,白芍总苷低、中、高剂量治疗组(50,100,200 mg·kg-1)及阳性对照组(雷公藤多苷8 mg·kg-1),灌胃给药,每日1次,14周末检测大鼠空腹血糖,血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白;光镜观察肾组织形态学的改变;病理图像系统分析平均肾小球面积及平均肾小球体积;免疫组织化学及Western blot检测肾组织Wnt-1,β-catenin蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织Wnt-1,β-catenin mRNA表达。研究发现高糖高脂诱导的2型糖尿病大鼠肾组织Wnt-1,β-catenin表达增高。与糖尿病对照组比较,各治疗组大鼠血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白,平均肾小球面积,平均肾小球体积显著降低,肾组织病理形态学明显改善;Wnt-1,β-catenin mRNA及蛋白表达显著减少。综上所述,2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路异常活化,白芍总苷可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,改善糖尿病大鼠肾脏损害,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病大鼠足细胞影响的实验研究

目的探讨冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组(A组)、DN模型组(B组)、冬虫夏草治疗组(C组)及雷公藤多甙治疗组(D组)、两药联合治疗组(E组)。12周后观察24h尿蛋白排泄量(24hurinary protein count,24hpro)、血糖(Glu)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞(WBC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)以及肾重(KW)/体重(BW)等值的变化;HE染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫荧光方法检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达。结果与A组比较,B组SCr、BUN增高(P<0.05);Glu、KW/BW和24hpro明显增高(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达减少。与B组比较,C、D、E组KW/BW和24hpro降低(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻;肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高。与C组比较,D、E组KW/BW和24hpro降低,肾小球、小管间质及足细胞病变减轻,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高,差异均有统计学意义以E组最为明显(P<0.01)。结论冬虫夏草及雷公藤多甙具有减轻DN蛋白尿,保护及修复DN大鼠足细胞病变的作用。其机制可能与其上调nephrin和podocin蛋白的表达有关。冬虫夏草与雷公藤多甙联合治疗可增加疗效并减轻雷公藤多甙的不良反应。     

Zhen-wu-tang, a blended traditional Chinese herbal medicine, ameliorates proteinuria and renal damage of streptozotocin-induced diabetic nephropathy in rats

Ethnopharmacological relevance

Zhen-wu-tang (ZWT) is a blended traditional Chinese medicine specifically used for various kidney diseases.

Aim of the study

The present study is to evaluate the effects of ZWT on diabetic nephropathy and investigate the potential anti-diabetic mechanisms.

Materials and methods

Streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats were orally administrated ZWT (80,320 mg/kg b.w.) once a day, for a period of 12 weeks. Body weight, urinary volume, urine protein and blood biochemical parameters were measured every 3 weeks. At the end of the observation period, kidneys were isolated for histology, angiotensin II content determination, real time PCR and Western blot analyses.

Results

ZWT (320 mg/kg b.w.) prevented body weight loss, reduced polyurea, urinary protein excretion, serum creatinine and blood urea nitrogen, although it did not alter the hyperglycemia. It ameliorated glomerular hypertrophy and expansion of the mesangial area, swell and effacement of foot process. It also suppressed the increased expression of angiotensin II, nephrin and podocin.

Conclusions

Data from this study suggest that ZWT possess a protective effect on renal damage of STZ-induced diabetic nephropathy in rats, by suppressing hyperactivity of renal renin-angiotensin system that turns in to modulate renal nephrin and podocin expressions, thereby protecting podocyte from injury.     

Effect of Arctiin on Glomerular Filtration Barrier Damage in STZ‐Induced Diabetic Nephropathy Rats

Diabetic nephropathy (DN) is the major life‐threatening complication of diabetes. Abnormal permeability of glomerular basement membrane plays an important role in DN pathogenesis. This study was performed to assess the effect of arctiin, the lignan constituent from Arctium lappa L., on metabolic profile and aggravation of renal lesions in a rat model of streptozotocin (STZ)‐induced DN. STZ‐induced diabetic rats were treated with arctiin at the dosage of 60 or 40 mg/kg/day via intraperitoneal injection for 8 weeks. Blood glucose and 24‐h urinary albumin content were measured, and kidney histopathological changes were monitored. RT‐PCR and immunohistochemistry were used to detect the mRNA and protein levels of nephrin, podocin and heparanase (HPSE) in the kidney cortex of rats, respectively. Treatment with arctiin significantly decreased the levels of 24‐h urinary albumin, prevented the sclerosis of glomeruli and effectively restored the glomerular filtration barrier damage by up‐regulating the expression of nephrin and podocin and down‐regulating HPSE level. Our studies suggest that arctiin might be beneficial for DN. The effects of arctiin on attenuating albuminuria and glomerulosclerosis are possibly mediated by regulating the expression of nephrin and podocin and HPSE in STZ‐induced diabetic rats. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响

目的 探究丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响.方法 采用高糖培养基培养NRK-52E,Western blot检测AT1蛋白表达.高糖高脂联合STZ建立糖尿病大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯沙坦组(20 mg/kg)、丹参注射液组(2 mL/kg),腹腔注射丹参注射剂,1次/d,给药6周.BCA法检测尿蛋白水平、自动生化仪分析检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,HE染色观察肾脏结构,IHC和Western blot检测AT1蛋白表达.结果 丹参注射液可以抑制高糖环境下NRK-52E和糖尿病大鼠肾小管AT1表达的上调(P<0.05,P<0.01),改善糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄(P<0.01),降低血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平(P<0.01),减轻糖尿病大鼠肾小管病变.结论 丹参注射液对糖尿病肾病改善作用可能与抑制AT1表达及改善肾素-血管紧张素系统有关.     

糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用及其机制研究

目的观察糖肾一号胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠的作用及可能机制。方法 SD大鼠采用ip链脲佐菌素(STZ)方法制备DN模型,造模成功大鼠随机分为模型组,贝那普利组(1.04 g/kg),糖肾一号胶囊高、中、低剂量(9、6、3 g/kg)组,每组15只,另设对照组15只,各组连续ig给药8周,测定各组大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、血清固醇元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、SREBP-2c水平,进行尿微量白蛋白定量,检测各组大鼠肾组织IRS-1、PI3K、podocin蛋白表达水平。结果与模型组比较,糖肾一号胶囊高、中剂量组大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、尿微量白蛋白明显降低(P0.05、0.01),血清SREBP-1c和SREBP-2c水平显著降低(P0.05),肾脏组织IRS-1、PI3K及podocin蛋白表达水平明显升高(P0.05),而糖肾一号胶囊低剂量组升高不明显(P0.05),高剂量组与中剂量组比较差异显著(P0.05)。结论糖肾一号胶囊对DN大鼠具有一定保护作用,其能够降低DN大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、尿微量白蛋白水平,作用机制可能与提高肾组织podocin蛋白表达、改善肾足细胞损伤、延缓肾脏纤维化有关。     

番石榴叶总三萜对2型糖尿病大鼠肾损伤的保护作用

目的:探讨番石榴叶总三萜(TTPGL)对2型糖尿病大鼠肾脏病变的影响。方法:采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)方法建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的糖尿病大鼠随机分为5组:糖尿病模型组,番石榴叶总三萜低、中、高剂量组,罗格列酮阳性对照组;另取12只正常大鼠作为正常对照组。给药组灌胃给药1次/d,连续给药6 w。取血清测定大鼠空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)、血清肌酐(Cr)、血清尿素氮(BUN)。另取肾组织,进行常规HE染色进行病理组织学切片。结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组空腹血糖显著升高、胰岛素水平及胰岛素敏感指数下降;血清肌酐及尿素氮水平升高;肾脏病理形态学显示:肾小球内皮及系膜细胞增生,毛细血管腔变窄,基底膜增厚,肾小球肿大、肾小囊变窄,肾小管水肿等。与糖尿病模型组比较,TTPGL中、高剂量组大鼠的空腹血糖显著降低,血清胰岛素水平及胰岛素敏感指数显著升高(P0.01或P0.05);同时,TTPGL给药组大鼠血清肌酐、尿素氮含量显著降低,肾脏病理形态学损伤明显改善(P0.01或P0.05)。结论:番石榴叶总三萜能显著降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,提高胰岛素敏感指数,并对糖尿病肾损伤具有明显的保护作用。     

2型糖尿病肾损伤大鼠模型的建立和肾脏CD34表达

目的观察高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(STZ)注射的SD大鼠2型糖尿病肾损伤模型的代谢特征及CD34的变化。方法4周龄雄性SD大鼠60只随机分为2组。正常对照组10只,普通饲料喂养;糖尿病模型组50只,高脂饲料喂养,即普通饲料中加入1O%猪油、10%葡萄糖、1%胆固醇、2%蛋黄粉、1%胆酸钠。喂养4周后尾静脉注射STZ(35mg/kg)。所有大鼠在STZ注射10d与30d时做灌胃葡萄糖耐量试验(OGTT)。放免法测定血清胰岛素,免疫组化染色观察肾脏CD34的阳性表达。结果糖尿病肾损伤大鼠空腹血糖(FBG)显著高于正常对照组(P<0.01),血糖值在注射完STZ后1～3个月比较稳定;24h尿蛋白从1个月后一直持续上升;空腹血清三酰甘油(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平显著高于正常对照组(P<0.05);尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)显著高于正常对照组(P<0.01);在糖尿病肾损伤大鼠的肾脏中CD34出现高表达。结论高脂喂养联合低剂量STZ注射的糖尿病大鼠模型拟2型糖尿病肾病发生的主要病理生理过程,具有高血糖以及血脂异常和肾功能损伤等基本特征;肾损伤可能与CD34有关。     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞 TGF-β1 与Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨小檗碱对糖尿病肾病(DN)大鼠肾病变的保护作用及其机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、小檗碱低、中、高剂量治疗组(50,100,200mg·kg-1 ·d-1)、消渴丸治疗组( XKW,0.8g·kg-1·d-1),8周后检测空腹血糖(FBG)、肾重/体重比(KW/BW)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及尿蛋白(Upro);免疫组织化学检测肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)与Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)蛋白的表达.结果:ig给药,小檗碱可降低大鼠FBG,KW/BW,BUN,Cr及Upro水平,降低肾小球系膜细胞TGF-与Ⅳ-C蛋白的表达.结论:小檗碱对DN大鼠肾微循环病变具有保护作用,这种作用可能与其抑制肾组织TGF-β1与Ⅳ-C蛋白表达有关.     

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.