肝纤维化动物模型的选择及评介

作者介绍了肝纤维化动物模型目前常用的几种：CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型，二甲基亚硝胺（DMN）致大鼠肝纤维化模型，大鼠免疫损伤性肝纤维化模型及乙醇致大鼠肝纤维化模型，文中对上述模型均作了评价。     

复肝丸对小鼠和大鼠肝纤维化模型的影响

目的:观察复肝丸对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化和二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的防治作用。方法:小鼠随机分为正常组、模型组、复肝丸组和培哚普利,除正常组外,其余组腹腔注射四氯化碳复制肝纤维化模型;自造模之日起各组灌胃4周。大鼠随机分为正常组、模型组、复肝丸组和培哚普利,除正常组外,其余各组腹腔注射二甲基亚硝胺4周复制肝纤维化模型;造模结束后各组灌胃4周。称重测量肝体比、脾体比,比色法测定血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性,溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,碱消化法测定肝组织羟脯氨酸含量,HE染色观察肝组织炎性变化、天狼猩红胶原染色观察肝组织病理性胶原沉积变化。结果:与模型组相比,复肝丸10g生药/kg小鼠体重预防用药或6g/kg大鼠体重治疗用药均能降低大鼠和小鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性,减轻肝脏炎性病理,降低肝组织羟脯氨酸水平,改善肝组织病理性胶原沉积增生。结论:复肝丸对大鼠和小鼠肝纤维化具有防治作用。     

肾气丸对DMN大鼠肝纤维化干预作用研究

目的:以二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化模型为载体,以肾气丸为研究对象,探讨肾气丸对DMN大鼠肝纤维化的干预作用。方法:每周前3 d连续ip DMN(10 mg·kg-1)4周制备大鼠肝纤维化模型。造模2周末DMN处理组大鼠随机分为肾气丸组和模型组(各10只)。第3周的第1 d起,在继续造模的同时,肾气丸组给予成人70 kg体重的10倍量ig(1.029 g·kg-1),给药2周。4周末处死全部大鼠,留取肝组织样本和血清,观察大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝组织病理变化,实时定量PCR法观察肝组织肝细胞生长因子(HGF)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化。结果:DMN造模4周,引起大鼠肝功能紊乱,与正常组比较,4周模型组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及总胆汁酸(TBA)含量显著升高(P<0.01),血清白蛋白(ALB)含量显著下降(P<0.01)。肝组织羟脯氨酸含量显著升高,为正常组的4.58倍(P<0.01),HGF mRNA表达显著下降(P<0.01),α-SMA mRNA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,肾气丸组大鼠血清ALB含量显著升高,血清ALT,AST活性及TBA含量显著降低。肾气丸显著降低肝组织羟脯氨酸含量(P<0.05),同时显著降低α-SMA mRNA表达(P<0.01),升高HGF mRNA水平(P<0.05)。结论:肾气丸对DMN肝纤维化有较好的疗效,为肝病从肾论治提供了实验依据。     

木苏丸防治二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的实验研究

目的　观察木苏丸防治大鼠肝纤维化的疗效并探讨其作用机制。方法　采用 1%二甲基亚硝胺 (DMN) 10mg/ (kg·d)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型 ,木苏丸治疗组予木苏丸3.12 5 g/ (kg·d)灌胃 ,观察肝功能、血透明质酸 (HA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)含量变化及基质金属蛋白酶 - 2 (MMP - 2 )、金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP - 1)、α -平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)在肝组织中的表达 ;并观察肝脏显微结构改变。结果　木苏丸治疗组与模型对照组比较 ,碱性磷酸酶 (ALP)、MDA、HA明显下降 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ,血清白蛋白(ALB)、SOD明显增高 (P <0 .0 1) ,TIMP - 1表达下降 (P <0 .0 5 ) ,MMP - 2的表达无明显改变(P >0 .0 5 ) ;光镜下肝纤维化程度减轻。结论　木苏丸具有保肝、延缓肝纤维化形成的作用 ,其作用机制可能与其抗氧化及其下调TIMP - 1的表达有关     

膈下逐瘀汤与柴胡疏肝散对实验性肝纤维化作用研究

应用膈下逐瘀汤和柴胡疏肝散两个方剂的水提液和醇提液对实验性大鼠肝纤维经病变的作用进行了研究。结果表明柴胡疏肝散作用不够明显，膈下逐瘀汤效果明显，其中水提取液尤为明显，初步证明活血祛瘀，行气止痛法优于疏肝行气，和血止痛法。     

膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠组织形态学的影响

目的:从形态学角度探讨膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠胶原代谢的干预作用。方法:采用ALA- kokkol腹腔注射DMN的方法制作肝纤维化动物模型。结果:光镜和电镜下膈下逐瘀汤及其拆方各组炎性细胞浸润,纤维组织增长和其它各组对比有明显差异。结论:膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠胶原纤维增生、毛细血管化等具有明显减轻作用。     

茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的逆转作用

目的：探讨茵陈蒿汤抗二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化作用。方法：采用1%DMN按照1 mL给予大鼠腹腔注射制备肝纤维化模型,每周前3 d每天1次,连续造模3周;造模当天开始灌胃给药水飞蓟素（阳性对照组,50 mg·kg^-1·d^-1）、茵陈蒿汤（高、中、低剂量治疗组,20.0,8.0,3.2 g·kg^-1·d^-1）,模型组和正常对照组大鼠灌胃生理盐水,连续干预5周;采用HE染色观察肝组织病理学变化;测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GGT）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（CⅣ）和Ⅲ型前胶原氨端肽（PⅢNP）水平;测定肝组织氨基酸代谢谱及羟脯氨酸含量。结果：与模型组比较,茵陈蒿汤高、中剂量能显著逆转大鼠肝组织病理学变化;茵陈蒿汤能剂量依赖性降低大鼠血清中ALT,AST,γ-GGT,HA,LN,CⅣ及PⅢNP水平;茵陈蒿汤能剂量依赖性降低肝组织羟脯氨酸含量,并能改变大鼠肝组织中氨基酸代谢谱。结论：茵陈蒿汤具有明显逆转二甲基亚硝胺诱导所致大鼠肝纤维化的作用。     

化浊抗纤保肝汤对肝纤维化大鼠的影响及其机制

目的探讨化浊抗纤保肝汤对肝纤维化大鼠的影响及其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、膈下逐瘀汤组及化浊抗纤Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组10只。除正常组外,其余各组均采用猪血诱导大鼠肝纤维化。诱发肝纤维化同时,模型组给予蒸馏水灌胃至第9周,膈下逐瘀汤组和化浊抗纤Ⅰ组分别给予相应药物灌胃至第9周,化浊抗纤Ⅱ组自造模的第3周、化浊抗纤Ⅲ组自造模的第6周给予化浊抗纤保肝汤灌胃至第9周。检测各组大鼠血清AST、ALT、HA、LN和PCⅢ水平;取肝组织行HE和Mallory染色,观察大鼠肝组织病理学改变;采用免疫组化和Northern blot杂交技术检测肝组织中TGF-β1、TIMP-1和MMP-1表达情况。结果各造模组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ水平及肝组织中TGF-β1、TIMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显高于正常组(P均0.05),各给药组上述指标水平均明显低于模型组(P均0.05);各造模组大鼠肝组织中MMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显低于正常组(P均0.05),各给药组大鼠肝组织中MMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显高于模型组(P均0.05)。膈下逐瘀汤组与化浊抗纤Ⅰ组各指标水平比较差异均无统计学意义(P均0.05),化浊抗纤Ⅰ组与化浊抗纤Ⅱ组、化浊抗纤Ⅲ组比较差异均有统计学意义(P均0.05),化浊抗纤Ⅱ组与化浊抗纤Ⅲ组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论化浊抗纤保肝汤能明显减轻肝纤维化大鼠肝功能损伤和肝纤维化程度,其可能通过下调大鼠TGF-β1的表达而减少细胞外基质沉积,降低大鼠TIMP-1的水平而减轻对MMP-1的抑制作用进而促进细胞外基质降解。     

膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠TIMP-1/2蛋白表达的影响

采用免疫组化和原位杂交的方法分别测定6组肝纤维化大鼠治疗前后TIMP-1、TIMP-2的基因调节和蛋白表达,结果证明TIMP-1、TIMP-2与肝纤维化形成密切相关,膈下逐瘀汤对TIMP-1、TIMP-2的基因调节和蛋白表达有一定的抑制作用.     

软肝汤治疗慢性肝炎后肝纤维化的临床观察

观察软肝汤治疗慢性肝炎后肝纤维化的临床疗效。将60例患者随机分成软肝汤治疗组和人参鳖甲煎丸对照组各30例,观察其对症状,体征,肝功能,肝纤维化指标的改善作用,疗程6个月,结果：治疗组对症状体征有明显改善,其中神疲乏力症状的改善与对照组相比有显著差异P＜0．01,对肝功能指标G,γ－球蛋白的改善治疗前后有显著差异P＜0．05,γ－球蛋白的改善与对照组相比也有显著差异P＜0．01,对肝纤维化指标HA,IVC,PIIIP,LN的改善治疗前后均有显著差异P＜0．01,与对照组相比HA,LN,IVC有显著差异P＜0．05,总有效率治疗组为83．33％, 对照组为73．33％（P＜0．05）,治疗组显效率33．33％,对照组23．33％（P＜0．01）,提示软肝汤对治疗乙型病毒性肝炎肝纤维化,早期肝硬化有较好疗效。     

虫草多糖逆转DMN诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的：研究虫草多糖抗肝纤维化作用的机制。方法： 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、虫草多糖组。采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型。经过虫草多糖治疗4周后,大鼠肝脏用丽春红胶原染色观察大鼠胶原纤维沉积的变化,观察大鼠血清肝功能的变化,盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸含量,Envision 两步法测定肝组织Ⅳ型胶原含量和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2）含量；酶图法检测肝组织金属蛋白酶2（MMP-2）活性,同时检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的改变。结果：镜下检查可见模型组大鼠肝脏胶原纤维间隔形成；血清肝功能指标异常,MMP-2含量降低；组织Hyp含量,Ⅳ型胶原含量,I型胶原蛋白表达,TIMP-2,MDA含量,均较正常组均显著增加,SOD活性下降,而虫草多糖组的上述指标较模型组均有不同程度的显著下降,使SOD活性升高,MMP-2含量升高。结论：虫草多糖有显著的抗肝纤维化作用,其机制与促进胶原降解和抗脂质过氧化作用有关。     

Potential therapeutic effects of a traditional Chinese formulation, BJ-JN, on liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats

Aim of the study

to evaluate the anti-fibrotic effects of BJ-JN (a traditional Chinese formulation) in CCl₄-induced liver fibrosis in rats.

Materials and methods

BJ-JN (0.5, 1.0, 2.0 g/kg) was administrated via gavage once a day starting from the fifth weeks after the CCl₄ treatment for subsequent 9 weeks. Evaluated with liver and spleen index, serum levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), hyaluronic acid (HA), nitric oxide (NO), hepatic malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity, as well as with histopathologic changes of liver. The proliferation and collagen synthesis of primary hepatic stellate cells (HSCs) from normal, model and BJ-JN (2.0 g/kg) treatment rats were examined with ³H-TdR and ³H-Pro uptake assay, respectively.

Results

BJ-JN (0.5, 1.0, 2.0 g/kg) effectively reduced the elevated levels of liver and spleen index, serum ALT, AST, NO, HA, and hepatic MDA contents, enhance the reduced hepatic SOD activity in CCl₄-treated rats. The histopathological analysis suggested that BJ-JN obviously alleviated the degree of liver fibrosis induced by CCl₄. The proliferation and collagen synthesis of HSC isolated from BJ-JN (2.0 g/kg) treatment rats were remarkably inhibited.

Conclusions

Those results suggest BJ-JN has a protective and therapeutic effect on liver fibrosis induced by CCl₄, which might be associated with its anti-oxidative activity, inhibitory activity on HSC proliferation and collagen synthesis.     

Advances in mesenchymal stem cells combined with traditional Chinese medicine therapy for liver fibrosis

Liver fibrosis is a primary cause of liver cirrhosis, and even hepatocarcinoma. Recently, the usage of mesenchymal stem cells (MSCs) has been investigated to improve liver fibrosis. It has been reported that the differentiation, proliferation and migration of MSCs can be regulated by traditional Chinese medicine treatment; however, the mechanisms are still unclear. In this article, the authors review the characteristics of MSCs such as multidirectional differentiation and homing, and its application in animal experiments and clinical trials. The authors also list areas that need further investigation, and look at the future prospects of clinical application of MSCs.     

从血论治肝纤维化经方的现代药理作用研究进展

肝纤维化是一种肝脏损伤后可逆的持续性创伤修复反应。中医认为,正虚血瘀为肝纤维化疾病的核心病机,从血治肝是肝纤维化中医诊疗理念中特色鲜明的重要组成部分,但目前尚缺乏对从血治肝传统理论依据及现代研究进展的系统阐述。因此,阐明从血论治肝纤维化的中医诊疗理念,并对关联经方的现代药理研究进展进行总结,从而阐明从血治肝缓解肝纤维化进程的中医理论基础和现代科学内涵,为临床防治肝纤维化提供中医特色治疗思路和方法。     

扶正健肝方对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的影响

目的：观察扶正健肝方对白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成的影响。方法：采用人血白蛋白（HSA）诱导大鼠肝纤维化并随机分为扶正健肝方高、低剂量组(生药39.4,9.85 g·kg^-1),秋水仙碱组(0.000 1 g·kg^-1),模型组,对照组5组。观察血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 活性、总蛋白( TP),白蛋白(Alb)含量球蛋白和白蛋白比值。放射免疫分析法测定层连蛋白 (LN)、透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原(IV-C)的含量,化学法测定肝脏羟脯氨酸（Hyp）的含量。光镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度。结果：扶正健肝方能明显降低人血白蛋白诱导的肝纤维化大鼠ALT, AST 活性( P＜0.05, P＜0.01) ,提高Alb, TP含量及A/G比值 ( P＜0.05, P＜0.01) ,降低血清LN, HA IV-C含量(P＜0.05, P＜0.01)。病理学观察结果, 扶正健肝方能使大鼠胶原纤维沉积明显减轻,假小叶结构明显减少。并明显降低纤维化计分(P＜0.05, P＜0.01)。结论：扶正健肝方可抑制人血白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成和发展。     

五法经典方辨治肝纤维化的现代药理作用研究概况

肝纤维化是以肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）激活和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）异常沉积为特点的多种恶性肝脏疾病必经病理过程及影响疾病转归的重要因素。研究表明,众多临床常用经典方可通过调控HSCs命运、调节胆汁酸或脂质代谢、减少病理性血管生成、直接或间接促进ECM降解以发挥防治肝纤维化的重要作用。回顾并总结了近年来临床肝纤维化诊疗中的常见中医证型,在中医药辨证思维指导下归纳出利湿退黄、调和肝脾、养血柔肝、破瘀消癥、滋阴清热5种主要治法,并在此基础上总结对应经典方现代药理作用的研究进展,以期建立中医辨证理论指导下经典方治疗肝纤维化的独特治疗体系,并为临床提供肝纤维化创新性诊疗策略。     

辨证论治对血吸虫肝病患者的疗效及肝纤四项的影响效果分析

[目的]观察辨证论治对不同证型血吸虫肝病患者的疗效及肝纤维化4项的影响效果。[方法]将昆山市第二人民医院消化科自2013年8月—2015年8月收治的120例血吸虫肝病患者作为研究对象,根据随机对照原则,分为2组,即观察组予以中医辨证论治治疗+常规治疗,对照组予以常规治疗,每组均60例。观察治疗前后肝功能相关指标以及肝纤维化4项的变化情况,并评定有效率。[结果]观察组有效率为90.00%,高于对照组(有效率为71.67%),差异具有统计学意义(P0.05)。治疗前,两组患者的肝功能、肝纤维化4项指标比较,未见统计学差异(P0.05);治疗后,与对照组比较,观察组患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBiL)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)的水平降低明显,差异均具有统计学意义(P0.05)。[结论]辨证论治血吸虫肝病患者可较好改善患者的肝纤维化4项,提高疗效。     

扶正化瘀胶囊对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠血清代谢组学的影响

探讨扶正化瘀胶囊(Fuzheng Huayu capsules,FHC)对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导的肝纤维化模型大鼠血清代谢组学的影响。应用液质联用技术分别建立对照组、模型组和FHC组的大鼠血清代谢图谱,并定量分析各组内源性代谢物——氨基酸和胆汁酸水平。实验结果表明,FHC组大鼠的血清代谢指纹谱与模型组存在显著差异,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法(PLS-DA)初步鉴定了潜在5种溶血磷脂胆碱类生物标记物。再通过定量分析各组大鼠血清氨基酸和胆汁酸的水平,发现FHC治疗4周后血清中失调的14种氨基酸和5种胆汁酸水平明显有回归正常水平的趋势。由此可见,FHC抗肝纤维化作用机制可能涉及到溶血磷脂胆碱类、氨基酸和胆汁酸的代谢过程。     

扶正化瘀方对正常及肝纤维化大鼠体内CYP450酶的影响

使用Cocktail探针药物法,研究扶正化瘀方(FZHY)对正常和肝纤维化大鼠细胞色素P450(CYP450)5种同工酶的影响。正常和二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射诱导的肝纤维化模型大鼠,以FZHY浸膏粉连续灌胃2周后,单剂量尾静脉注射由CYP450 5种同工酶的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、氢溴酸右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑(CYP3A4)配置的Cocktail探针溶液后,通过建立的LC-MS/MS法同时检测血浆中5种探针药物的浓度,采用PK solution 2TM对数据进行处理,并计算主要药动学参数。正常大鼠灌胃FZHY后,非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑和氢溴酸右美沙芬的AUC0-t均出现不同程度的增加,CL也均出现降低趋势,提示FZHY能明显抑制正常大鼠CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6的活性,但对CYP3A4的活性影响不明显;肝纤维化大鼠灌胃FZHY后,甲苯磺丁脲的AUC0-t显著增加,Vd显著降低,其他4种探针药物的药动学参数未见显著改变,提示在肝纤维化大鼠体内FZHY仅对CYP2C9有抑制作用,对CYP1A2,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4活性影响不明显。CYP450酶在肝纤维化条件下活性的改变可能是FZHY对正常和肝纤维化大鼠CYP450酶影响不同的原因。     

保肝宁对肝纤维化大鼠肝功、血脂及肝组织瘦素表达水平的影响

目的:探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制。方法:采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG),用免疫组化方法观察肝纤维化大鼠肝组织瘦素(Leptin)表达水平。观察保肝宁对肝纤维化模型大鼠ALT、AST、AST/ALT,TC、TG及大鼠肝组织Leptin表达水平等各项指标的影响。结果:与正常组比较,模型组及各药物组血清ALT、AST、AST/ALT比值均明显升高(P均<0.01)。与模型组比较,保肝宁药物组血清ALT、AST明显下降,差异有显著性意义(P均<0.01),保肝宁大剂量降低AST作用明显优于秋水仙碱(P<0.05)。与模型组比较,保肝宁大、中剂量药物组血清TC、TG水平明显升高,差异有非常显著性意义(P均<0.01)。保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织Leptin的表达。与模型组比较,差异有显著性意义(P均<0.01)。结论:保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过改善肝功能,调节血脂及抑制模型大鼠肝组织Leptin的表达密切相关。